一种体外注射标记营养素代谢率的测定方法及测定装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及水生动物营养技术领域，具体涉及一种体外注射标记营养素代谢率的测定方法及测定装置。
【背景技术】
[0002]自然状态下，水生动物经常会受到饥饿、缺氧或药物等外界因素的胁迫，而机体为了面对各种有利或不利的环境条件，必然采取相应的代谢策略给予应对。代谢的改变通常伴随营养素代谢选择的改变，对于营养素代谢是如何选择从而产生不同的代谢效率？传统营养研宄，通常从计算总代谢率方法入手。通过对耗氧率、排氨率、二氧化碳产生率等系列指标的测定，来推算机体对营养素代谢偏好的选择。其方法粗略笼统，并且不能对不同处理间动物特定某种营养素的代谢速率进行比较，此外，通过长期投喂一种营养素的方式来评判机体对特定营养素的利用速率并不可行。因为在其它营养素缺失的情况下无法保证机体生长、存活和繁殖，而且极不科学。更无法客观反应机体对特定营养素的代谢速率。
[0003]现有技术中存在的问题，例如，传统使用装置虽然设计精密，并有一定使用基础，但是其大多是通过计算耗氧率、排氨率等推算三大营养物质总代谢率，方法粗略而装置配套复杂庞大；对于能够测定体外注射标记营养物质代谢率的装置，因其易产生放射性污染的特点，国内鲜有见到，而国外常见于使用价格昂贵的电脑操作装置结合个体较大的虹鳟鱼手术套管注射防止污染。在适用性上受鱼个体大小限制，技术要求强，污染成本高。而现有的代谢率测定装置，对代谢二氧化碳的含量测定也不能达到实时收集测定。
[0004]因此，现在市场上亟需一种新的代谢率测定装置来克服上述缺陷。
【发明内容】
[0005]本发明提出的体外注射标记营养素代谢率的测定方法及测定装置，可以灵敏精确地测定机体对特定营养素的代谢率。通过代谢率变化差异直接评测机体应对环境条件的代谢选择，从而为生产实践中饲料营养配方调整提供理论指导。
[0006]本发明提出了一种体外注射标记营养素代谢率的测定方法，包括如下步骤:
[0007]步骤一:真空干燥器盛放曝气自来水，三角烧瓶盛放氢氧化钾溶液。
[0008]步骤二:对鱼麻醉后进行腹腔注射，待鱼在清水中游动，取水样测定，用于计算注射入鱼体内的放射度，
[0009]步骤三:将鱼放入所述真空干燥器中；
[0010]步骤四:抽取氢氧化钾溶液，加入液闪液，放入液闪仪测定其放射性强度。
[0011]本发明体外注射标记营养素代谢率的测定方法，进行腹腔注射所用的待注射液是按10尾50g体重鱼用量进行计算，500 μ I14C棕榈酸与62.5 μ I未标记棕榈酸相混合，经过N2吹干，加入200 μ IDMSO助溶剂，充分溶解后配成待注射液。
[0012]本发明体外注射标记营养素代谢率的测定方法，需在步骤一之前进行预实验，所述预实验包括如下步骤:
[0013]步骤a:根据鱼的体重配备对应浓度及放射强度的标记脂肪酸；
[0014]步骤b:对鱼进行麻醉，注射所述标记脂肪酸；
[0015]步骤c:分别在 2min, 1min, 25min, 40min, 55min, 70min, 130min, 190min 之后对回收标记0)2的氢氧化钾溶液进行采样测定，从而确定正式实验的采样时间点。
[0016]本发明体外注射标记营养素代谢率的测定方法，通过直接检测标记0)2量反映机体对特定某一营养素的精确代谢率，并达到实时收集检测。避免了传统测定代谢率装置以测定耗氧率、排氨率和CO2产生率等系列指标推算各营养素代谢率的方法，灵敏精确。
[0017]本发明体外注射标记营养素代谢率的测定方法中，所述氢氧化钾溶液浓度为45% -80% ο
[0018]本发明体外注射标记营养素代谢率的测定方法中，24cm直径大小真空干燥器的加水量为6-7L，鱼体大小可为20-100g
[0019]本发明提出了一种体外注射标记营养素代谢率的测定装置，其包括:真空干燥器、三角烧瓶、第一导管、第二导管和注射器；
[0020]所述真空干燥器的内部盛放经曝气的自来水，所述第一导管为L形导管，所述第一导管设置在所述真空干燥器的瓶口中，一端位于所述瓶口的外部，另一端伸入所述自来水中；
[0021]所述三角烧瓶内部盛放氢氧化钾溶液，所述三角烧瓶的瓶口与所述真空干燥器的瓶口之间设置所述第二导管，所述第二导管的一端位于所述自来水的上部，另一端伸入所述氢氧化钾溶液中；
[0022]所述注射器的针头插入所述三角烧瓶的瓶口中。
[0023]本发明的体外注射标记营养素代谢率的测定装置中，所述第二导管包括短L形导管、乳胶管和长L形导管，所述短L形导管设置在所述真空干燥器的瓶口，一端位于所述自来水的上方，另一端与所述长L形导管通过所述乳胶管连通，所述长L形导管设置在所述三角烧瓶的瓶口，一端伸入所述氢氧化钾溶液中。
[0024]本发明的体外注射标记营养素代谢率的测定装置中，所述真空干燥器的瓶口设置有双孔胶塞，双孔分别用于设置所述第一导管和所述第二导管。
[0025]本发明的体外注射标记营养素代谢率的测定装置中，所述三角烧瓶的瓶口设置有单孔胶塞，单孔用于设置所述第二导管。
[0026]本发明有益效果包括:
[0027]实施本发明时，可保证水生动物生活环境的相对密闭性及维持其有氧呼吸的正常进行。
[0028]本发明实施操作简便，主要采用真空干燥器、乳胶管、三角烧瓶、注射器、玻璃导管、单双孔塞。只需将真空干燥器，三角烧瓶通过玻璃导管和乳胶管进行连接并且确保胶塞的封闭性，将注射器插入胶塞采集水样即可。本发明使用实验室常见的真空干燥器和三角烧瓶即可开展实验，生产实践中易于推广实施，应用前景广泛。
[0029]本发明中采用静水装置，避免了流水装置中曝气时空气中带入的二氧化碳所导致的测定误差。
[0030]现有的传统营养研宄技术无法直接测定特定某一营养素的代谢速率，而本发明方法通过14C营养素在体内代谢产生的140)2量，进而精确反应机体对某种特定营养素的代谢速率。可以作为评判机体代谢选择、代谢状态的一个灵敏指标。
[0031]现有技术中略有国外报道涉及主要针对三文鱼、虹鳟等个体较大的水生动物的体外注射标记营养素代谢速率的精密装置。对于个体偏小的相关鱼类、尤其是国内大宗经济鱼类，并未见有任何报道公开相关配套且经济的适用装置，也没有任何报道涉及有关检测的实验材料、条件摸索等相关信息。本发明首次创新提出的检测方法和装置对研宄人员进tx相关研宄具有极尚的参考价值。
[0032]本发明通过直接检测标记CO2量反映机体对特定某一营养素的精确代谢率，同时达到实时收集检测。避免了传统测定代谢率装置以测定耗氧率、排氨率和CO2产生率等系列指标，从而间接粗略笼统推算各营养素代谢率的方法，灵敏精确。
【附图说明】
[0033]图1为本发明体外注射标记营养素代谢率测定装置的结构示意图。
[0034]图2为实施例中体外注射标记营养素代谢率测定方法预实验的实验结果示意图。
[0035]图3为实施例中体外注射标记营养素代谢率测定装置的结构示意图。
[0036]图4为实施例中体外注射标记营养素代谢率测定方法放射度的测定结果示意图。
[0037]图5a为实施例中20分钟时的放射度测定结果示意图。
[0038]图5b为实施例中40分钟时的放射度测定结果示意图。
[0039]图5c为实施例中60分钟时的放射度测定结果示意图。
【具体实施方式】
[0040]结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
[0041]如图1所示，本发明体外注射标记营养素代谢率的测定装置，其包括:真空干燥器
1、三角烧瓶2、第一导管3、第二导管和注射器7 ;真空干燥器I的内部盛放经曝气的自来水，第一导管3为L形导管，第一导管3设置在真空干燥器I的瓶口中，一端位于瓶口的外部，另一端伸入自来水中；三角烧瓶2内部盛放氢氧化钾溶液，三角烧瓶2的瓶口与真空干燥器I的瓶口之间设置第二导管，第二导管的一端位于自来水的上部，另一端伸入氢氧化钾溶液中；注射器7的针头插入三角烧瓶2的瓶口中，用于收集水样。
[0042]本发明中，第二导管包括短L形导管4、乳胶管5和长L形导管6，短L形导管4设置在真空干燥器I的瓶口，一端位于自来水的上方，另一端与长L形导管6通过乳胶管5连通，长L形导管6设置在三角烧瓶2的瓶口，一端伸入氢氧化钾溶液中。
[0043]本发明中，真空干燥器I的瓶口设置有双孔胶塞，双孔分别用于设置第一导管3和第二导管。
[0044]本发明中，三角烧瓶2的瓶口设置有单孔胶塞，单孔用于设置第二导管。
[0045]本发明中，24cm直径大小真空干燥器:加水量为6-7L,鱼体大小可为20_100g
[0046]本发明中，可配置45% -80% KOH溶液，过高质量分数容易析出沉淀。
[0047]实施例
[0048]本实施例以“不同营养背景尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)体外注射标记14C棕榈酸的代谢实验”示例。
[0049]本实施例以测定50g大小尼罗罗非鱼体外注射标记棕榈酸的代谢率装置为例，如图3安装装置:选取直径24cm真空干燥器I。打开真空干燥器盖子，对容器内盛满7L已曝气的自来水，盖上干燥器盖，塞上直径2.8cm双导管塞，导管直径为5cm ;选用250ml三角烧瓶2，配置好45 % Κ0Η,倒入三角烧瓶2中，盖上插有注射器7直径3.5cm的单孔导管塞，导管直径为5cm，使用约20cm长乳胶管5，乳胶管5直径为4cm。
[0050]本实施例中，盛水用真空干燥器I，盛KOH用三角烧瓶2，第一导管3，第二导管和注射器7均为必须组成部件。
[0051]本实施例中