新的床旁检测系统和方法
【专利说明】新的床旁检测系统和方法
[0001] 本发明涉及最好应用在床旁领域中的检测系统或测定系统（检验系统）和检测方 法。
[0002] 在人类、兽医、食品或许多其它应用领域内的研宄和体外诊断学中，分析检测用于 定性或/和定量确定分子、待检物或其活性或组成。检测结果提供不同的结论（例如诊断 参数），以鉴定疾病、食品来源或药品有效性。
[0003] 当今，DNA和蛋白质分析学的已知方法在可供使用的检测中占主导地位。尤其是 免疫测定体现为下述方法：抗体被用于专门结合所选出的、足够大的几乎任何类型的靶分 子（如生物标记）。
[0004] 在检测开始后的几分钟或几小时内并且在取样地点旁边，快速检测提供测量值， 而不需要送出试样（床旁（P〇C))。
[0005]已知的标准化检测方法是侧流检测（LFT)、流过检测（FTT)、凝结检测（AT)或固相 检测（SPT)。所有这些方法直接目测检验待检物。对于这些检测，附加存在紧凑的读取仪 器，其也提供定量结果。
[0006] 体外诊断学的已知测定方法是免疫测定（IA)，尤其是酶联免疫测定（EIA)，或者 "结合测定（夹心）"（例如见 EP0171150B1、EP0063810B1)。另外，参见 Roger P.Ekins(尤 其如W08401031)的资料。
[0007] 尤其是血液的过敏源IgE的膜辅助型结合测定从二十世纪八十年代末起就是已 知的，比如由以下公开：CHEMICAL ABSTRACTS (第25期第101卷，1984年12月17日，第 578页，摘要号228190b，美国俄亥俄州哥伦布斯）；B.J. WALSH等人的"Allergen discs prepared from nitrocellulose:detection of IgE binding to soluble and insoluble allergens" 和 J. IMMUNOL. METHODS (1984, 73(1)，139-45)。一些基于侧流原理的检测系统 可作为过敏快速检测而在商业上获得。
[0008] 对于床旁领域，例如描述了本申请人的可商业购得的床旁快速检查（参见 EP1718970)，其可以基于用膜辅助的结合测定被用于全血过敏检验。
[0009] 另外，在W02011/000959中描述了本申请人的快速检测，在这里，一个膜有目的地 在检验位置之间被润湿，以便将检测试剂非常有效地平行加入"此前带有待分析的全血的 膜的特定区域"中。
[0010] 本申请人的另一种快速检测在2013年2月28日的W02013026808A1中有描述，在 此，膜从两侧被环绕冲洗。为此，该膜在纵向侧被固定在一个装置内，从而在其顶面和底面 出现自由容积，液体可通过该自由容积在该膜旁流过。
[0011] 但是，对改善的快速检测的呼声很高。
[0012] 尤其是均匀一致地给各个检验位置加载样液（待检物）是有改善空间的，同样还 有高效冲洗所有检验位置以及液体的可再现的流动引导（其公差由加工误差决定的膜性 能变化而定）。但是，所有这些性能是可再现的高品质结果的前提。
[0013] 因而，针对床旁检测系统的本发明任务是提供一种改善的且可更好再现的方法， 用于给支架加载样液，以便借助于受体分子检验待检物。
[0014] 出人意料地，该任务通过权利要求1来完成。根据本发明，规定一种用于检验来自 样液的至少一种待检物的检测方法，其由两个样室构成，它们优选通过允许样液部分透过 的由至少两个表面构成的支架被分开，其中，该支架的正面朝向第一样室，该支架的背面朝 向第二样室，并且
[0015] a)至少一个受体分子被固定在该支架的正面上，
[0016] b)通过支架的正面和背面分别构成至少一个由室壁限定的自由容积，
[0017] c)第一样室具有至少两个开口，其中，样液通过第一开口沿流动梯度经支架正面 流向与支架间隔的第二开口，
[0018] d)第二样室具有至少两个开口，其中，样液通过第一开口从第一样室沿流动梯度 经支架背面且优选与在支架正面的流动反向地流向第二开口，
[0019] e)第一样室的第二开口和第二样室的第一开口通过流道相互连通，
[0020] f)第二样室的第二开口允许液体流出，
[0021] g)来自b)的自由容积至少部分被构造有液柱，
[0022] h)其中，该流动梯度沿支架的正面和背面借助压力施加来实现并且携带来自g) 的液柱。
[0023] 以下称为"本发明的方法"。
[0024] 本发明的方法尤其有利地允许可重现地给支架加载样液和冲洗支架，以检验待检 物。在此情况下，通过在支架上方沿流动梯度暂时形成液柱和形成带有受体分子的相关检 验位置而获得了质的改善。
[0025] 本发明优选的是：该支架分开两个样室，从而近似所有样液流在两个样室之间流 过支架或流过样室之间的流道，但优选没有经过支架边缘。由此保证了尺寸变化的支架也 能在顶面和底面被样液以相似程度流过。也优选的是：可能有的支架沿横向呈柱形的隆起 (从一开始就有或只在被样液润湿后才存在或出现的）通过将支架固定在样室之间而被减 小，或甚至被抵消。根据本发明的此方案，也导致了所期望的均匀而可再现的围绕支架流 动。
[0026] 根据本发明，流道从第一样室的第二开口延伸向第二样室的第一开口。该流道首 先允许该样室借助支架被分开，而且还从第一样室向第二样室引导液流，从而支架的正面 和背面可以均匀地被流过。令人吃惊的是，该流道没有影响冲洗作用，虽然它就像节流阀那 样作用于流动。
[0027] 该实施方式的根据本发明的另一个优点在于，通过该流道阻止在被施加于样室的 压力被减小情况下的样液回流。
[0028] 在一个优选实施方式中，从第一样室的第二开口至第二样室的第一开口的该流道 具有如下直径，该直径大致等于试样供应通道和用于废料（废液）的流道的直径。还优选 的是，该流道的直径小于样室的或自由容积的直径。还优选的是，该流道包围支架的固定件 (尤其是横撑杆）并且具有圆孔。
[0029] 通过该方案保证了，虽然有支架加工误差，仍可再现地出现就两个支架表面（即 正面和背面）而言的足够大的流动梯度，在这里，可以有利地做到在支架之外输送样液的 主要部分（但至少是一半样液）。这尤其适用于以下支架区域：其在样液流入时是首先到 达的或被润湿的并且在其上有至少一个受体分子位于检验位置。其它溶液如冲洗液也最好 基本在支架之外被输送。
[0030] 根据本发明，液柱是从支架的正面或背面至各样室的对置室壁（室顶面或室底 面）形成的。
[0031] 在另一个优选实施方式中，该支架的第一或第二表面至室壁的距离为l〇ym及以 上，其中，一旦出现了流动梯度，则在该正面和/或背面上在自由容积内存在液柱。
[0032] 但优选在正面或背面分别相对于室壁的10-1500ym(l. 5mm)距离，在此可以有利 地没有进行流动梯度中断，还优选80ym-350ym的距离，尤其优选120ym-200ym的距离。
[0033] 还可能优选的是，该支架的各正面或背面的两个距离是彼此不同的并且尤其是距 室顶面（上室壁）距离是例如170ym，至室底面（下室壁）的距离例如是150ym。变化取 决于与样液有关的所需流动梯度。
[0034] 还优选的是，该支架被裁切成长条形并且在所有边侧被牢固固定在该样室上。优 选的是，这些长边侧被夹在半壳的两个边缘之间，它们构成样室以及在该膜上方和下方的 所述自由空间或者说自由容积。还优选的是，支架的一个端面或两个端面处于例如一个接 片的强制导槽中，以避免支架在试盒安装时滑动并简化加工。支架也可以被粘接在纵向侧 或端侧上。夹紧和粘接的组合也是可行的。其它可行的支架固定方法包括将边缘浇注入聚 合物基材中，溶剂粘接、超声焊、激光焊和热焊、激光掩模焊、机械固定例如夹紧或（塑料） 铆接或3d打印技术，此时支架的固定通过成型来做到。
[0035] 在本发明的另一个优选实施方式中，该检测装置除了两个样室外还包括第三室， 第三室与第二样室的第二开口流体连通，并且所加入的液体（样液、冲洗液、溶液等）在流 过所述两个样室之后汇集在该第三室内。第三（副）室可以按照已知方式配备有吸收性材 料例如棉、纤维素、聚丙烯酸酯或者功能化聚丙烯酸酯（例如见图3)。优选至少1. 0ml且尤 其是5-10ml的室体积。
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