载体、该载体的制造方法、生物物质的免疫学测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及在表面具有聚合物的载体、该载体的制造方法以及使用免疫反应以高 灵敏度测定生物标记物等生物物质的生物物质免疫学测定方法。
【背景技术】
[0002] 以往，血清、血浆、尿等各种生物体试样中含有的微量物质的测定一直采用放射免 疫测定法（RIA)、酶免疫测定法（EIA)等免疫测定法。这时，作为不溶性载体，有时使用结合 了抗原或抗体的磁性粒子。
[0003] 然而，在非均相的免疫测定法中，存在起因于测定试样中含有的成分的干扰物质 所致的、不依赖于抗原和抗体的特异性反应的所谓的"非特异性吸附"导致的空白值上升的 问题。另外，在微量滴定板这样的一个反应容器进行从抗原抗体间的反应到检测反应的工 序的情况下，存在容器的污染引起显著的空白值上升、测定精度降低的问题。
[0004] 以往，为了减少非特异性吸附、容器的污染，报告了向反应体系中添加白蛋白、酪 蛋白、明胶等来自生物的物质的方法；添加表面活性剂的方法（专利文献1~3)等。然而， 使用来自生物体的封闭剂时，有BSE所代表的生物污染的问题，另一方面，使用表面活性剂 则可举出某种程度的效果，但尚不能说是充分的。
[0005] 现有技术文献
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献1:日本特开昭58 - 187862号公报
[0008] 专利文献2:日本特开昭60 - 53846号公报
[0009] 专利文献3:日本特开昭61 - 260163号公报
【发明内容】
[0010] 本发明要解决的课题是提供用于以高灵敏度测定生物标记物等的生物物质量的 载体、载体的制造方法、测定方法。
[0011] 本发明人等发现通过使用以含有具有亚磺酰基的重复单元的聚合物处理过的载 体来抑制非特异性吸附，能够以高灵敏度测定生物物质。
[0012] SP，本发明是以下的< 1 >~< 10 >。
[0013] < 1 >一种载体，其特征在于，在表面具有聚合物，该聚合物含有具有亚磺酰基的 重复单元。
[0014] < 2 >根据< 1 >中记载的载体，其中，上述聚合物是含有在侧链具有亚磺酰基的 重复单元的聚合物。
[0015] < 3 >根据< 1 >或者< 2 >中记载的载体，其中，上述聚合物进一步含有疏水性 重复单元。
[0016] < 4 >根据< 1 >~< 3 >中任一项中记载的载体，其中，进一步担载有配体。
[0017] < 5 >根据< 1 >~< 4 >中任一项中记载的载体，其中，具有含有磁性物质的磁 性粒子。
[0018] < 6 >-种上述载体的制造方法，其特征在于，使含有具有亚磺酰基的重复单元 的聚合物与载体接触。
[0019] < 7 >-种生物物质的免疫学测定方法，其特征在于，包含将测定对象物质捕获 至载体的工序，上述载体为< 4 >或< 5 >中记载的载体。
[0020] < 8 >根据< 7 >中记载的免疫学测定方法，其中，进一步包含清洗含有上述载体 的反应体系来进行B/F分离的工序。
[0021] < 9 >根据< 7 >或< 8 >中记载的免疫学测定方法，其中，进一步包含测定上述 载体所捕获的对象物质量的工序。
[0022] < 10 >-种测定方法，其特征在于，是在同一反应容器中进行如下工序的生物物 质的免疫学测定方法：向磁性粒子捕获测定对象物质的反应工序，清洗含有上述磁性粒子 的反应体系而进行B/F分离的清洗工序，测定磁性粒子所捕获的对象物质的测定工序；在 反应容器内投入含有聚合物的溶液和上述磁性粒子，进行捕获反应，该聚合物含有在侧链 具有亚磺酰基的重复单元。
[0023] 根据本发明，在非均相的免疫测定法中能够减少起因于干扰物质的非特异性吸 附。由此，能够降低背景噪音。因此能够在不对生物物质或者含有生物物质的血液献体等 生物体试样进行稀释的情况下进行测定。另外，由于同时高效进行免疫反应，所以低值下的 测定精度提高，分析时间缩短。另外，如果采用在反应容器中利用聚合物处理磁性粒子等 载体的方法，则同时也能够防止免疫反应时的反应容器的污染，因此上述效果进一步提高。 另外，本发明的方法，优选使用磁性粒子作为固相载体，这时被检测物的浓缩、清洗容易，另 外，能够以短时间测定大量被检测物。
【具体实施方式】
[0024] 本发明的载体的特征在于，在表面具有聚合物，该聚合物含有具有亚磺酰基的重 复单元。
[0025][含有具有亚磺酰基的重复单元的聚合物]
[0026] 以下，将具有亚磺酰基的重复单元简称为"重复单元（A) "，将含有该重复单元的聚 合物简称为"聚合物"。
[0027] 作为重复单元（A)，只要是具有亚磺酰基的重复单元，则可以在主链具有亚磺酰 基，也可以在侧链具有亚磺酰基，优选在侧链具有亚磺酰基。
[0028] 另外，作为重复单元（A)，优选显示亲水性。这里，在本说明书中，亲水性是指具有 与水的亲和力强的性质。具体而言，仅由1种重复单元构成的均聚物（由实施例的测定法 得到的数均分子量为1万~10万左右的均聚物）在常温（25°C )下在纯水100g中溶解lg 以上的情况下，该重复单元是亲水性的。
[0029] 另外，作为上述重复单元（A)，优选表示亲水疏水的尺度的Hydrophile - Lipophile Balance(HLB值）为10以上。得到高的亲水性的情况下，HLB值更优选为15以 上，进一步优选为20~40。
[0030] 另外，本说明书中，HLB值是指由化合物的有机性的值与无机性的值的比率计算的 值（小田式），可以通过"Formulation Design with Organic Conception Diagram"[1998 年，NIHON EMULSION CO.，LTD]中记载的计算方法进行计算。例如，后述的制造例1中记 载的N-1一1的共聚物中含有的亲水性重复单元的HLB值为（100X3+60X1+140X1)/ (20X10+40X1 - 10X3) X 10 = 23. 8。
[0031] 另外，重复单元（A)没有特别限定，从防止非特异性吸附的观点出发，优选非离子 性的。
[0032] 另外，重复单元（A)，除了亚磺酰基之外，还可以具有羟基、羧基、氨基、磺基、硫醇 基、磷酸基、醛基等亲水性基团。另外，该亲水性基团的位置和个数是任意的，但其位置优选 为聚合物的侧链。另一方面，作为亚磺酰基以外的亲水性基团的个数，从得到适度的亲水性 的观点出发，在1个重复单元中，优选〇~12个，更优选0~10个，进一步优选0~5个， 更进一步优选〇~3个，再进一步优选1~3个，特别优选2或者3个。另外，上述亲水性 基团中，从得到适度的亲水性的观点出发，优选羟基。应予说明，在不丧失本发明的效果的 范围，聚合物中含有的多个亚磺酰基的一部分可以为硫醚基、磺酰基。
[0033] 另外，作为上述重复单元（A)的优选的具体例，可举出侧链中含有至少一个下述 式（1)表示的结构的重复单元。作为形成侧链中具有式（1)表示的结构的重复单元的聚合 物种，可以使用公知的聚合物，其中优选（甲基）丙烯酸酯系的聚合物种、（甲基）丙烯酰胺 系的聚合物种、苯乙烯系的聚合物种等。更具体而言，可举出下述式（2)表示的重复单元。
[0034]
[0035]〔式（1)中，R3表示直接键合或者碳原子数1~24的2价的有机基团，R 4表示碳原 子数1~10的有机基团。〕
[0036]
[0037] 〔式（2)中，R1表不氢原子或者甲基，R2表不一0 -基、* - (C = 0) - 0 -基、* - (C = 0) - NR5-基、* 一 NR 5 -（C = 0) -基（R 5表不氢原子或者碳原子数1~10的有机 基团，*表示与式（2)中的R1所键合的碳原子键合的位置）或者亚苯基，R 3和R4与上述含 义相同。〕
[0038] 这里，对式（1)和（2)中的各符号进行详细说明。
[0039] R1表示氢原子或者甲基，优选甲基。
[0040] 另外，R2表不一0 -基、* - (C = 0) - 0 -基、* - (C = 0) - NR 5 -基、* - NR5 -（C = 0) -基或者亚苯基。作为该亚苯基，可举出1，2-亚苯基、1，3-亚苯基、1，4 一 亚苯基。
[0041] 另外，上述R5表示的有机基团的碳原子数优选为1~10,更优选为2~8,进一步 优选为2~6。作为上述有机基团，可举出烃基。该烃基是包含脂肪族烃基、脂环式烃基以 及芳香族烃基的概念。
[0042] 上述R5中的脂肪族烃基可以是直链状也可以是支链状，具体而言，可举出甲基、乙 基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基等烷基。
[0043] 另外，上述脂环式烃基大致分为单环的脂环式烃基和桥环烃基。作为上述单环的 脂环式烃基，可举出环丙基、环己基等环烷基。另外，作为桥环烃基，可举出异冰片基等。
[0044] 另外，作为上述芳香族烃基，可举出苯基等芳基。
[0045] 像上述那样的R2中，从非特异性吸附抑制效果的观点出发，优选* 一（C= 0) - 0 一基、亚苯基，特别优选* 一(C= 0) 一 0 一基。
[0046] R3表示直接键合或者碳原子数1~24的2价的有机基团。作为该直接键合，可举 出单键。
[0047] 这样的R3中，优选碳原子数1~24的2价有机基团。该2价有机基团的碳原子 数优选为2~18,更优选为2~10,进一步优选为2~9,特别优选为3~6。
[0048] 作为上述2价有机基团，可举出2价烃基。2价烃基优选为2价脂肪族烃基，可以 是直链状，也可以是支链状。具体而言，可举出甲烧一 1，1 一二基、乙烧一 1，1 一二基、乙 烧一 1, 2 一二基、丙烷一 1, 1 一二基、丙烷一 1, 2 一二基、丙烷一 1, 3 一二基、丙烷一 2, 2 一 二基、丁烧一 1, 2 一二基、丁烧一 1, 3 一二基、丁烧一 1, 4 一二基、戊烧一 1, 4 一二基、戊烧一 1, 5 -二基、己烧一1, 5 -二基、己烧一1, 6 -二基、庚烧一1, 7 -二基、辛烧一1, 8 -二基 等链烷二基。
[0049] 另外，上述2价烃基可以具有取代基，也可以在碳一碳键间含有醚键。
[0050] 作为上述2价的烃基可以具有的取代基，可举出上述亲水性基团。该取代基的个 数优选为1~5,更优选为1~3,进一步优选为1或者2。
[0051] 另外，作为上述2价的烃基可以含有的醚键的个数，优选0~5,更优选0~3。
[0052] 另外，作为2价的有机基团的优选的具体例，可举出下述式（3)表示的连接基团、 碳原子数1~24的链烷二基，更优选为式（3)表示的连接基团。
[0053]
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