一种改进测定托吡酯有关物质的方法
【专利摘要】本发明公开了一种改进测定托吡酯有关物质的方法，它是对托吡酯中有关物质进行归属研究，并且测定主成分检测浓度与峰面积的线性关系。实验结果表明：托吡酯有关物质检测浓度在4～40mg/ml范围内，随着主成分浓度的提高，逐渐不成线性关系。因此采用自身对照法比面积归一化法更准确可靠。
【专利说明】一种改进测定托吡酯有关物质的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物检测【技术领域】，涉及确定药品中有关物质检测条件及定量方法，更具体的说是一种改进测定托吡酯有关物质的方法。
【背景技术】
[0002]癫痫(epilepsy)俗称“羊癫疯、羊角风”是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病。而癫痫(羊癫疯)发作(epileptic seizure)是指脑神经元异常和过度超同步化放电所造成的临床现象。其特征是突然和一过性症状，由于异常放电的神经元在大脑中的部位不同，而有多种多样的表现。抗癫痫药物可通过两种方式来消除或减轻癫痫发作，一是影响中枢神经元，以防止或减少他们的病理性过渡放电；其二是提高正常脑组织的兴奋阈，减弱病灶兴奋的扩散，防止癫痫复发。一般将60年代前合成的抗癫痫药如:苯妥英钠、卡马西平、乙琥胺、丙戊酸钠等称为老抗癫痫药，其中苯巴比妥、苯妥英钠、卡马西平、丙戊酸钠是目前广泛应用的一线抗癫痫药。
[0003]托卩比酯是由美国强生制药(Johnson&Johnson)公司开发的GABA再摄取抑制剂，1995年以商品名Topamax在英国上市，临床用于治疗成人原发性部分性癫痫。它有别于以往传统抗癫痫药物之处在于它首先是一个带有磺胺基团的单糖衍生物，是一种结构全新的抗癫痫药物。其次是具有独特的三重作用机理:(I)选择性阻断钠离子通道，限制持续重复发作；(2)增强氨基丁酸介导的神经抑制作用；(3)阻断介导的神经兴奋作用，因而具有广谱强效的抗癫痫作用。
[0004]托卩比酯(topiramate),别名为妥泰(Topamax),化学名称为2, 3:4，5_双_0_ (1-甲基亚乙基)-β-D吡喃果糖氨基磺酸酯，是一个由氨基磺酸酯取代单糖的新型抗癫痫药物。美国药典中有关物质的检测主要有Testl和Test2两种方法。其中Testl是采用C18色谱柱，检测器和柱温为55°C，流动相为乙腈-水(50: 50)，流速为0.6ml/min进行检测，；Test2是采用C6色谱柱，柱温为35°C，流动相为甲醇-水(32: 68)，流速为1.5ml/min ;两种检测方法都采用面积归一化计算有关物质含量。但我们的研究结果表明:采用面积归一化法测得的杂质含量偏高。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于，克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种改进托吡酯有关物质测定的方法，本发明采用美国药典有关物质检测的Testl，采用自身对照法计算有关物质的含量，其结果更加准确可靠。
[0006]为实现上述目的本发明公开了如下的技术内容:
[0007]—种改进测定托吡酯有关物质的方法，其特征在于按如下的步骤进行:
[0008](I)色谱条件
[0009]色谱柱为Kromasil C18 柱(250mm*4.6mm*5 μ m)；
[0010]流动相:乙腈-水的体积比为48: 52?52: 48[0011 ]流速:0.48-0.72ml/min
[0012]检测器和柱温:50°C；55°C ；60°C ；
[0013]配样浓度:4_40mg/ml；
[0014]进样体积:40-60μ I ；
[0015](2)有关物质归属
[0016]分别向原料药溶液中添加硫酸钾、双丙酮-D-吡喃果糖、异丙醚，说明相对托吡酯保留时间0.4杂质为硫酸盐无保留的无机离子，相对托吡酯保留时间0.9的杂质为双丙酮-β -D-吡喃果糖，相对托吡酯保留时间2.2的杂质为异丙醚；相对托吡酯保留时间4.5的杂质归属采用液质联用，测定条件除流速0.4ml/min ；
[0017](3)有关物质检测浓度的确定
[0018]精密称取托吡酯4000mg置IOOml量瓶中，配成浓度为40mg/ml储备液，精密移取
l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度为4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液，相当于检测浓度的 10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%U00%,作为供试品溶液；取50 μ I分别注入液相色谱仪，记录色谱图；以相对托吡酯保留时间4.5杂质为例，不同检测浓度(10?100%)按照面积归一化法其杂质含量分别为 0.11、0.09,0.11,0.11,0.11,0.12,0.12,0.13,0.14,0.14%，而按照自身对照法其杂质含量分别为 0.10,0.09,0.10,0.10,0.09,0.10,0.10,0.10,0.10,0.10%。
[0019]本发明更加详细的测定方法如下:
[0020]I仪器与试剂
[0021]LC-10A型高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；RID_10A型示差折光检测器(日本Shimadzu公司);SIL_10AV型自动进样器(日本Shimadzu公司);Class_vp工作站(日本Shimadzu公司);电子天平(瑞士 Mettler toledo公司)。
[0022]托吡酯原料药(本公司自制110601批)，乙腈(色谱纯，TEDIA Company)，水为屈臣氏纯净水。
[0023]2方法与结果
[0024]2.1色谱条件
[0025]根据合成路线，首先选用美国药典有关物质方法Testl,色谱柱为Kromasil C18柱(250mm*4.6mm*5 μ m);流动相:乙腈-水(50: 50);流速:0.6ml/min ;检测器和柱温:55°C ;配样浓度:4-40mg/ml ;进样体积:40-60 μ I。
[0026]2.2系统适用性
[0027]称取D-吡喃果糖3mg和双丙酮-β -D-吡喃果糖3mg置IOml量瓶中，加40mg/ml的托吡酯溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，取50 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图。D-吡喃果糖、双丙酮-β -D-吡喃果糖和托吡酯之间都能达到基线分离，见图1，2。
[0028]2.3有关物质归属
[0029]分别向原料药溶液中添加硫酸盐、双丙酮-β -D-吡喃果糖、异丙醚，说明相对托吡酯保留时间0.4杂质为硫酸盐等无保留的无机离子，相对托吡酯保留时间0.9的杂质为双丙酮-β -D-吡喃果糖，相对托吡酯保留时间2.2的杂质为异丙醚。
[0030]相对托吡酯保留时间4.5的杂质归属采用液质联用，测定条件除流速0.4ml/min夕卜，其它同上，质谱图见图3，化学结构见图4。[0031]由于合成路线中会产生相对托吡酯保留时间4.5的杂质，该杂质极性较小，不容易洗脱，需要强洗脱能力的乙腈配制流动相，因此选用美国药典Testl作为有关物质液相检测条件。
[0032]2.4有关物质检测浓度的考察
[0033]精密称取托吡酯4000mg置100ml量瓶中，配成浓度为40mg/ml储备液。精密移取
l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度为4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液(相当于检测浓度的 10% ,20% ,30% ,40% ,50% ,60%,70%,80%,90%,100% )作为供试品溶液。取50 μ I分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1。以进样浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，作图，见图5。
[0034]表1有关物质测定不同浓度测定结果
【权利要求】
1.一种改进测定托吡酯有关物质的方法，其特征在于按如下的步骤进行: (1)色谱条件 色谱柱为 Kromasil C18 柱(250mm*4.6mm*5 μ m)； 流动相:乙腈-水的体积比为48: 52~52: 48
流速:0.48-0.72ml/min 检测器和柱温:50°C ；55°C ；60°C ； 配样浓度:4-40mg/ml ； 进样体积:40-60 μ I ； (2)有关物质归属: 分别向原料药溶液中添加无机盐、双丙酮-β -D-批喃果糖、异丙醚，说明相对托吡酯保留时间0.4杂质为无保留的无机离子，相对托吡酯保留时间0.9的杂质为双丙酮-β -D-吡喃果糖，相对托吡酯保留时间2.2的杂质为异丙醚；相对托吡酯保留时间4.5的杂质归属采用液质联用，测定条件为流速0.4ml/min ； (3)有关物质检测浓度的确定: 精密称取托吡酯4000mg置100ml量瓶中，采用流动相配成浓度为40mg/ml储备液，精密移取l、2、3、4、5、6、7、8、9、10ml置IOml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度为4、8、12、16、20、24、28、32、36、40mg/ml 溶液，相当于检测浓度的 10%,20%,30%,40%,50%,60%、70 %、80 %、90 %、100 %，作为供试品溶液；分别各取50 μ I注入液相色谱仪，记录色谱图，按照自身对照法检测杂质；所述的无机盐为硫酸钾、硫酸钠、氯化钾、氯化铁或EDTA。
【文档编号】G01N30/02GK103630615SQ201210302454
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年8月24日 优先权日:2012年8月24日
【发明者】韩建萍, 田青松, 刘颖 申请人:天津泰普药品科技发展有限公司