物质和方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫治疗剂。特别地，涉及可以用于预防或治疗病症的物质，所述病症 的特征在于存在不需要的细胞，如引起肿瘤或其它疾病的细胞。
【背景技术】
[0002] 用于靶向恶性疾病的免疫治疗策略是转译（translational)临床研宄的活跃领 域，并且已经进行了数十年。目前的模型要求癌症代表可以用宿主的免疫治疗操作治疗的 功能性或体质（constitutional)免疫缺陷。这些努力可以宽泛地分为两组。第一组通过 如接种疫苗、细胞因子支持（IL_2、IFNy)或降低免疫抑制环境（伊匹单抗（ipilimumab)) 这样的方法来增强或支持内源性抗肿瘤免疫力，而第二组设法用功能性免疫应答成分来修 复绝对缺陷（使用抗体的被动免疫治疗、TCR转移、干细胞移植和过继性免疫治疗）。通过 高效的功能性抗肿瘤免疫应答确实是可能的论点，将这些方法进行了统一。尽管在一些情 况中对于有效的抗肿瘤免疫应答存在勿庸置疑的证据，但这个肿瘤免疫学的重要支柱受到 目前临床现实压倒性的反对，所述临床现实为尽管进行了很多努力，但对于大部分的癌症 病人没有可用的有效的免疫治疗方法。几乎所有的癌症疫苗接种试验都提供了否定结果， 而提供肯定数据的那些最常见的是证明了小的作用。现实是，治疗性抗体，除了少数例外， 在肿瘤学领域中提供了非常少的临床益处。
[0003] 如果可以研发出能有效地重新定向内源性抗病毒免疫应答到分子上而不是靶向 恶性组织的治疗策略，这将提供一种新的有力且安全的治疗恶性疾病的方法。
[0004] 大部分细胞毒性治疗抗体依赖于免疫效应物机制，来传送它们的抗癌作用，如补 体依赖性细胞毒性（CDC)和抗体依赖性细胞毒性（ADCC)。重要地，所有细胞（健康的和恶 性的）都具有各种机制来限制免疫应答的攻击，以避免自身免疫性。这在自身免疫疾病的 环境中是明显的，其中高水平的组织反应性抗体尽管常常引起器官炎症，但很少诱发完全 的器官破坏。实际上，已知其中观察到完全的组织破坏的自身免疫疾病，如糖尿病，是依赖 于CTL应答，而不是抗体定向的机制。
[0005] 为了提高治疗抗体差的功效，已经使用了免疫偶联物（放射性核素/毒素）和 工程化抗体，其能更好地保证细胞毒性效应物机制（例如，糖基化工程）。然而，这些药剂 的临床试验仍然是很令人失望的，并且受到毒性的困扰。一个实例是已经研发来选择性 地将抗肿瘤剂靶向肿瘤的抗体-药物偶联物（ADC)(参见US 5, 773, 001 ;US 5, 767, 285 ; US 5, 739, 116 ；US 5, 693, 762 ；US 5, 585, 089 ；US 2006/0088522 ；US 2011/0008840 ；US 7,659,241 ；Hughes(2010)Nat Drug Discov 9:665,Lash(2010) ；In vivo:The Business & Medicine Report 32-38 ;Mahato 等人（2011)Adv Drug Deliv Rev 63:659 ;Jeffrey 等人 (2006) BMCL 16:358 ;Drugs R D 11(1): 85-95)。ADC通常含有对抗存在于肿瘤细胞上的目 标的单克隆抗体、细胞毒性药物以及将抗体连接至药物的连接物。然而，目前只有少数ADC 处于临床研发的后期，而且已经证明了这些的临床成功是难以捉摸的。
[0006] 因此，仍然存在对具有更高功效和更低毒性的更有效的免疫治疗剂的需求。
【发明内容】
[0007] 本发明的物质（agent)是重新定向的（re-directed)免疫治疗的实例。这指的是 将通常靶向带有外源抗原的细胞的现有的免疫应答重新定向到靶向病症（如癌症）中不需 要的细胞的概念。此概念需要标记物抗原（marker antigen)在不需要的细胞上递呈，使得 它们成为免疫细胞的目标。
[0008] WO 95/17212描述了由肽T细胞抗原和细胞结合配偶体组成的偶联物 (conjugate)及其在重新定向的免疫治疗中的用途。偶联物在结合了结合配偶体到表面受 体后内在化至靶细胞中，并且从偶联物加工T细胞抗原，并且以与MHC分子的复合物的形式 在细胞表面上表达。经T细胞受体的复合体的识别诱导了对祀细胞的细胞毒性T细胞应答。 然而，从WO 95/17212难以预测哪些结合配偶体能够实现内在化并且因此随后递呈T细胞 抗原，而哪个不能。仅有的显示有效地递呈肽抗原的受体是B细胞的抗原受体，其正常作用 是结合并内在化递呈至辅助性T细胞的抗原。然而，WO 95/17212没有对哪些其它受体（如 果有的话）可确保提供相同的结果提供任何指导。
[0009] 令人惊奇地且预料不到地，本发明人现在已经鉴定了在重新定向的免疫治疗中具 有实用性的具体的抗原，即 CD70、CD74、CD22、HLA-DR、CD23、CD30、CD43、CD44、CD47、CD54、 ⑶55、⑶58、⑶59、⑶62L或⑶95。用病毒衍生肽靶向这些抗原中的每一个都使得体外病毒 特异性T细胞的活化增加，这表明，令人惊奇地，各个抗原都能使肽内在化并随后在细胞表 面上递呈。
[0010] ⑶70 (TNFSF7)是肿瘤坏死因子（TNF)超家族的成员。其是II型膜内在蛋白且是 ⑶27的配体。该蛋白在抗原活化的T和B淋巴细胞中瞬时表达，并且其与⑶27的相互作用 调节T细胞和B细胞的功能。具体地，该蛋白的作用为控制靶细胞的死亡、存活和共刺激。 尽管⑶70是由正常淋巴细胞和树突状细胞的限定亚群（limited subsets)表达，其由广泛 的恶性血液病和某些实体肿瘤异常地表达。
[0011] ⑶74是II型MHC分子伴侣并且功能为免疫细胞上促炎性细胞因子巨噬细胞迀移 抑制因子（MIF)的膜受体。MIF结合至⑶74通过MPK和Akt途径激活下游信号并促进细 胞增殖和存活。除了由免疫细胞表达，还已经在数个非-CNS癌症中观察到CD74的过表达， 并且在这些肿瘤中的CD74表达通常与攻击行为和患者预后不良相关。
[0012] CD22是属于凝集素的SIGLEC家族的分子，其特异性地用位于其N-末端的免疫球 蛋白（Ig)结构域结合唾液酸。其出现在成熟B细胞的表面上且较小程度地出现在一些未 成熟的B细胞上。认为CD22是调节分子，其阻止免疫系统的过度活化和自身免疫疾病的发 展。其存在于许多B细胞恶性肿瘤（包括慢性淋巴细胞性白血病和非霍奇金氏淋巴瘤）上。
[0013] 由染色体6上的人类白细胞抗原复合体编码HLA-DRII型MHC细胞表面受体。 HLA-DR和其配体的复合体（长度为9个氨基酸或更长的肽）构成了 T细胞受体（TCR)的配 体。应答信号时HLA-DR分子被上调。HLA-DR出现在各种癌症（包括结直肠癌）中，其中增 加的HLA-DR表达涉及更好的预后结果。
[0014] ⑶23是IgE (-种参与过敏和抗寄生虫的抗体同种型）的"低亲和力"受体，并且 在IgE水平的调节中很重要。与许多抗体受体不同，CD23是C型凝集素。其出现在成熟的 B细胞、活化的巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、滤泡树突状细胞和血小板上。CD23出现在B细胞 恶性肿瘤（如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤和B细胞慢性淋巴细胞白血病）中的B细胞 上。
[0015] CD30是肿瘤坏死因子受体家族的细胞膜蛋白并且是肿瘤标记物。此受体由活化 的（而不是休眠的）T细胞和B细胞表达。TRAF2和TRAF5可以与此受体相互作用，并介导 导致NF- K B活化的信号转导。其是细胞凋亡的正调节子，并且还显示限制自身反应性⑶8 效应T细胞的增殖潜能并保护身体抵抗自身免疫。CD30出现在T细胞淋巴瘤（包括间变性 大细胞淋巴瘤）并且也由B细胞淋巴瘤（包括霍奇金淋巴瘤）表达。
[0016] ⑶43是人类T淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和一些B淋巴细胞表面上的主要的唾 液酸糖蛋白，其似乎对于免疫功能是重要的，并且可以是参与T细胞活化的生理配体-受体 复合体的一部分。⑶43在超过90%的T细胞淋巴瘤中存在，并也可用作群组（panel)的一 部分以证明B细胞淋巴母细胞性淋巴瘤，这是因为在此病症中的恶性细胞通常是⑶43阳性 的。其还染色粒细胞和它们的前体，因此其可以是骨髓肿瘤的有效的标记物。
[0017] CD44是参与细胞-细胞相互作用、细胞粘附和迀移的细胞表面糖蛋白。其是透明 质酸的受体，并也可与其它配体如骨桥蛋白、胶原和基质金属蛋白酶（MMP)相互作用。其参 与多种细胞功能（包括淋巴细胞活化、再循环和归巢、造血和肿瘤转移）。CD44以各种剪切 形式出现，并且报道了 CD44中的变动用作一些乳腺癌和前列腺癌干细胞的细胞表面标记 物。其还被视为上皮卵巢癌患者的存活时间增加的一个指标。CD44变体亚型还与头颈部鳞 状细胞癌的进展相关联。
[0018] CD47是膜蛋白，其涉及经由细胞粘附到细胞外基质而发生的细胞内钙浓度的增 加。该蛋白还是血小板反应蛋白的C末端细胞结合结构域的受体，并且其可以在膜运输和 信号传导中起作用。CD47是出现在许多类型的癌症中的分子，并被膀胱癌细胞使用以躲避 巨噬细胞的正常清除。
[0019] CD54(也称为细胞间粘附分子1)是细胞表面糖蛋白，其通常表达于内皮细胞和免 疫系统的细胞上。其结合⑶Ila/⑶18或⑶Ilb/⑶18型的整合素。⑶54出现在B细胞淋巴 母细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤以及其它的内皮癌上，且在转移中起作用。
[0020] CD55(也称为补体衰变加速因子）是70kDa的膜蛋白，其调节细胞表面上的补体 系统。其防止C3bBb复合体（可替代途径的C3-转化酶）的组装或加速预先形成的转化酶 的分解，从而阻断膜攻击复合体的形成。这种糖蛋白广泛分布于造血细胞和非造血细胞中。 其还出现在许多内皮癌（包括结直肠癌和前列腺癌）中。
[0021] ⑶58是表达在抗原递呈细胞（APC)(尤其是巨噬细胞）上的细胞粘附分子。其结 合至T细胞的⑶2上，并且在加强T细胞和专职性抗原递呈细胞（professional antigen presenting cell)之间的粘附上是重要的。当T细胞漫游于淋巴结中，寻找APC表面上的 肽：MHC复合体时，这种粘附作为T细胞活化前的T细胞和抗原递呈细胞之间的短暂最初的 接触