白花龙胆的hplc检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及白花龙胆的HPLC检测方法。
【背景技术】
[0002] （b0ng ji0n，"榜间"），"榜"藏语意为"高山草甸"，"间"有"装饰"之意， 即"高山草甸的点缀"，中文名，龙胆花。《晶珠本草》中归为的花类药物。以花色的不同常 分为白、蓝、黑三种，分别为"榜间嘎保"（中文名，白花龙胆），为花白色者，深秋生长在高山 寒凉地带，叶状如秦艽叶；无茎，从地面开出四、五朵白花，有红色光泽，花基部合生。"榜间 恩保"（蓝花龙胆），花蓝色者，初秋生长在非常潮湿的沼泽草滩，叶小，花淡蓝色；"榜间那 保"（黑花龙胆），花黑色者，中秋生长在高山草甸，形态与前同，花深蓝色，比蓝色种略大。 关于"榜间"有这样一段传说：仙女三姐妹化作草地三姐妹，大地春回，阳气上泛，三姐妹作 为诸药先导化为马兰花、报春花、点地梅，迎接三春。三花一开，诸药不得不生，百花相继开 放。秋风萧瑟，阳气下降，诸药枯萎，百花凋谢，三姐妹化作大、中、小三种榜间，分别开在三 秋。三花一开，诸药不得不去。
[0003] "榜间"来源于龙胆科龙胆属多种药用植物。是具有代表性的常用大宗藏药材，功 效为治毒病，各种热症，喉炎热闭。目前，10余家藏药企业拥有总计14个国药准字号的藏药 复方制剂，分别是十味龙胆花颗粒（胶囊）、三味龙胆花片（丸）、十五味龙胆花丸（散）； "龙胆花"商品药材在青海、四川、西藏等地药材市场和土特产门市出售，是内地最常用的藏 药材之一。
[0004] 然则就功效来看"榜间"分类不同其功效有异，"榜间嘎保"，即是白花龙胆，治一切 热病，解毒，利喉，列为上品，"榜间恩保"与前者同效而性凉，"榜间那保"治黑痘疤疹。就使 用现状看，"榜间"基原品种复杂，仅"榜间嘎保"的使用就不只一种，尚有"榜间恩保"替代 "榜间嘎保"使用的情况。现代藏医药学著作及国家、地方标准收载的品种繁多，且质量控制 方法简单，缺乏内在质量评价的标准。
[0005] 因此，目前亟需找到一种有效鉴别白花龙胆各基原品种及其混伪品的方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供白花龙胆的HPLC检测方法。
[0007] 本发明提供了白花龙胆的HPLC检测方法，它包括如下操作步骤：
[0008] (1)取待检药材，甲醇提取，制备供试品溶液；
[0009] (2)将供试品溶液注入高翔液相色谱仪中，检测即可，其色谱条件如下：
[0010] 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料；
[0011] 检测波长：240±3nm ;
[0012] 流动相：A相为0. 1~0. 3%磷酸水溶液，B相为甲醇，梯度程序如下：
[0013]
[0014] 进一步地，步骤（1)中，采用超声或者回流提取。
[0015] 进一步地，步骤（2)中，所述色谱柱尺寸为4. 6 X 250mm，5 μ m。
[0016] 进一步地，步骤（2)中，流动相流速为1.0 mL/min。
[0017] 进一步地，步骤⑵中，柱温：30°C。
[0018] 进一步地，所述待检药材为大花龙胆、短柄龙胆、高山龙胆无茎植株、高山龙胆有 茎植株或岷县龙胆。
[0019] 本发明还提供了一种蓝花龙胆、麻花秦艽或龙胆草HPLC检测方法，包括如下操作 步骤：
[0020] (1)取待检药材标准品，甲醇提取，制备供试品溶液；
[0021] (2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即可，建立标准指纹图谱，色谱条 件如下：
[0022] 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料；
[0023] 检测波长：240±3nm ;
[0024] 流动相：A相为0. 1~0. 3%磷酸水溶液，B相为甲醇，梯度程序如下：
[0025]
[0026] (3)取待检药材，按照步骤⑴和⑵的方法得到指纹图谱，将其与标准指纹图谱 的对比即可。
[0027] 进一步优选地，步骤（2)中，所述色谱柱尺寸为4. 6 X 250mm，5 μ m，流动相流速为 1.0 mL/min，柱温为 30°C。
[0028] 进一步优选地，所述指纹图谱的参照物为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、异荭草苷和异牡 荆苷。
[0029] 本发明的检测方法，得到了出峰量较多和峰形较好的指纹图谱，不仅可以有效分 辨白花龙胆与其近似品种和混伪品，还可以准确区分白花龙胆的不同基原品种及不同存放 时间的药材。因此，本发明的检测方法可以有效保障白花龙胆的品质。
[0030] 同时，由于一些其他的龙胆花和龙胆草同样具有药用价值，如蓝花龙胆、麻花秦艽 和龙胆草等，这些品种与白花龙胆均属于龙胆科，其内部的主要化学成分存在一定的相似 性。因此，我们推测，尽管专属性可能会稍差于白花龙胆的标准指纹图谱，但是本发明的技 术方案有用于对这些白花龙胆以外的其他龙胆科药材进行鉴别的可能。幸运的是，最终实 验证明，将本发明的方法在用于以上龙胆科药材时，可以获得出峰量较多和峰形较好的指 纹图谱。因此，本发明的方法还可用于对蓝花龙胆、麻花秦艽或龙胆草进行检测。
[0031] 显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0032] 以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【附图说明】
[0033] 图 1 为 We I chrom-C 18 柱图谱。
[0034] 图 2 为 Swell_C18 柱图谱。
[0035] 图3为流动相为乙腈-0. 2%磷酸水时的色谱图，上为岷县龙胆、下为大花龙胆。
[0036] 图4为流动相为甲醇-0. 2%磷酸水时的色谱图，上为岷县龙胆、下为大花龙胆。
[0037] 图5为岷县龙胆（MX-6)的特征3D谱图。
[0038] 图6为大花龙胆（DH-14)的特征3D谱图。
[0039] 图7为供试品的乙酸乙酯、乙醇、甲醇提取色谱图，1和2依次为乙酸乙酯提取岷县 龙胆和大花龙胆，3和4依次为乙醇提取大花龙胆和岷县龙胆，5的上方为甲醇提取的岷县 龙胆，下方为甲醇提取的大花龙胆。
[0040] 图8为对照品色谱图：1獐牙菜苦苷、2龙胆苦苷、3异荭草苷、4异牡荆苷。
[0041] 图9为大花龙胆（上）和岷县龙胆（下）的HPLC指纹色谱图，。
[0042] 图10为岷县龙胆（上）和大花龙胆（下）的对照品色谱峰指认色谱图：1獐牙菜 苦苷、2龙胆苦苷、3异荭草苷、4异牡荆苷。
[0043] 图11为大花龙胆（上）和短柄龙胆（下）的特征图谱。
[0044] 图12为岷县龙胆（上）、高山龙胆"有茎"（中）、高山龙胆"无茎"（下）的特征 图谱。
[0045] 图13为条纹龙胆的特征图谱
[0046] 图14为蓝花类龙胆、麻花秦艽、乌奴龙胆、中药龙胆的特征图谱。
[0047] 图15为白花龙胆、蓝花龙胆、混伪品及龙胆草的投影图。
[0048] 图16为白花龙胆、蓝花龙胆、混伪品及龙胆草的系统聚类图。
[0049] 图17为26批大花龙胆、短柄龙胆高效液相指纹图谱。
[0050] 图18为对照图谱共有峰标定。
[0051] 图19为大花龙胆、短柄龙胆三维投影图。
[0052] 图20为19批高山龙胆、岷县龙胆、蓝花类龙胆高效液相指纹图谱。
[0053] 图21为对照图谱共有峰标定。
[0054] 图22为高山龙胆、岷县龙胆、蓝花类龙胆三维投影图。
【具体实施方式】
[0055] 材料：
[0056] 样品来源如表1所示：
[0057] 表1样品来源编号
[0058]
[0061] 通过查阅文献资料、核对四川大学及中国科学院成都生物研究所标本，经鉴定，以 上样品1号~18号为龙胆科植物大花龙胆G. szechenyii Kanitz，19号~28号为龙胆科植 物短柄龙胆G. stipitata Edgew.，29号~34号为龙胆科植物高山龙胆G. algida pall.，35 号~40号为龙胆科植物峨县龙胆G. purdomii Marq，41号~45号为条纹龙胆G. striata Maxim.。以上样品为白花龙胆的不同基原品种。
[0062] 编号46~53号为蓝花类龙胆，藏医及藏药厂替代白花龙胆使用，鉴定为龙 胆科植物青藏龙胆G.futtereri Diels、华丽龙胆G.sino-ornata Balf.f·、蓝玉簪龙 胆 G.veitchiorum Hemsl·、六叶龙胆 G.hexaphylla Maxim.;编号 54 ~56 为麻花秦充 G. straminea Maxim，白花龙胆伪品；57、58号乌奴龙胆G.urnula H.，花为白色，藏药做"岗 嘎琼"使用；59~62号为中药龙胆草。以上样品为白花龙胆的近似品种和混伪品，用于与 白花龙胆比较鉴定。
[0063] 仪器：
[0064] 1200型高效液相色谱仪（美国，安捷伦，DAD检测器，自动进样器），BP121S型电子 分析天平（万分之一，Sartorius德国赛多利斯股份公司），BP211D型电子分析天平（十万 分之一，Sartorius德国赛多利斯股份公司）；KQ5200E型数控超声波清洗器（昆山市超声 仪器有限公司）；DZKW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有