一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及W天然植物药材原料制成的烟手复方添加剂HPLC指纹图谱的构建方 法，W及由此方法得到的烟用中药复方添加剂HPLC标准指纹图谱。
【背景技术】
[0002] 随着社会的持续进步和文明的不断发展，人们的健康意识越来越强，卷烟作为一 种特殊的嗜好品，不但要能满足消费者享受吸烟的乐趣，而且还要满足对人体健康低危害 的要求，因此，减少卷烟危害不仅是烟草行业持续发展的需要，更是消费者利益之上的体 现。我国拥有丰富的中草药资源，有悠久的中草药研究历史，许多中草药品种在化学成分上 与烟草结构相似，但疗效不同，可W在某些方面弥补烟草的不足。受祖国医药学理论启发， 依据传统中医理论，我国烟草科技工作者从传统本草资源出发，寻找中草药资源，加入烟草 中，W期在不影响卷烟效用的情况下防护个体少受烟草烟气毒害，并证明切实可行。
[0003] 中草药和烟草中均为多组分复杂体系，因此评价中草药添加到烟草后的制品质量 应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含 量测定等方法都不足W解决送一问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对上面所述缺陷，提供一种用于烟用中药复方添加剂的快速质 量检测方法，该方法有效全面的涵盖烟用中药复方添加剂中多种指标成分的基本信息，能 全面的反映出产品的质量信息，从而能够全面、有效地控制产品质量。
[0005] 本发明的目的是通过W下技术方案予W实施的。
[0006] 一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法，其特征在于，依次采用下步 骤： (1)供试液制备；精密吸取烟用中药复方添加剂200μL用50%甲醇-水稀释20倍后， 过0. 22μm滤膜即得。
[0007] (2)色谱条件；色谱柱为十八烷基娃焼键合硅胶为填料，地enomenexlimaC18反 相色谱柱（4. 6mmX250mm,Sum);流动相为己腊-0. 1%甲酸水二元梯度洗脱，梯度洗脱： 0 ~48mins，10%B~：M%B;48 ~65mins，：M%B~82%B;65 ~80mins，82%B~100% B;流速；1血/min;柱温；25°C;检测波长；254皿；记录80min色谱图。
[0008] (3)供试液指纹图谱检测；精密吸取供试品溶液10μ以进样，用高效液相色谱仪 测定，WS峰的保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积，即得到 烟用复方添加剂的指纹图谱。所述S峰是参照物的色谱峰。
[0009] (4)指纹图谱共有峰的确定；HPLC指纹图谱共标定了 20个共有峰，见图1。共有 峰及其参考相对保留时间见表1。
[0010] 表1烟用中药复方添加剂指纹图谱共有模式
(5)指纹图谱相似度评价；取连续生产的13批烟用中药复方添加剂，按上述检测方法 进行检测，得出其13批样品的HPLC图谱，将13批金圣香指纹图谱的AIA数据文件导入《中 药色谱指纹图谱相似度评价系统研究2009版》，生成对照指纹图谱，计算各样品指纹图谱与 生成的对照图谱R的相似度。各检测波长下的相似度均应大于0. 90。
[0011] 本发明的有益效果是：本发明采用高效液相色谱法对烟用中药复方添加剂进行指 纹图谱研究，建立了一种烟用中药复方添加剂指纹图谱，全面地反映了药物烟中所含化学 成分的种类与数量，基本代表了烟用复方添加剂的药理活性，其指纹图谱质量标准涵盖了 烟用复方添加剂的基本信息，进行对药物烟质量进行整体描述和评价，从而能够全面、有效 地控制产品质量。可W客观、量化地确定生产全过程的关键质量监控点及工艺参数，可W明 确的指导中药生产技术的研究，可作为评价中药质量的关键手段，促进中药产品国际市场 进程。本发明操作方便、快捷；而且，W此得出的相似度结果对制剂指纹图谱进行评价，结论 较为客观、准确、快速。
【附图说明】
[0012] 图1为本发明实施例中烟用中药复方添加剂指纹图谱共有模式。
[0013] 图2为本发明实施例中烟用中药复方添加剂13批成品指纹图谱。
[0014] 图3为本发明实施例中烟用中药复方添加剂对照指纹图谱。
[0015]图4为本发明实施例中13批成品烟用中药复方添加剂相似度结果。
【具体实施方式】[001引 实施例。
[0017] 1、仪器与试剂。
[001引仪器；Agilent1200高效液相色谱仪（Agilent公司），二极管阵列检测器，chemstation色谱工作站，phenomenexlimaC18 色谱柱（4. 6mmX250mm, 5μm)，《中药色谱 指纹图谱相似度评价系统2009版》。
[0019] 试剂；己腊（Merck公司，色谱纯)，甲酸(北京现代东方精细化工有限公司，分析 纯)，MilliQ超纯水（自制）；烟用中药复方添加剂(批号分别为090109、090116、090123、 090207、090214、090221、090228、090307、090314、090321、090407、090414、090421 均由江西 中烟工业有限责任公司提供)。
[0020] 2、实验方法。
[0021] 色谱条件：色谱柱；phenomenexlimaC18 反相色谱柱（4. 6mmX250mm, 5μm);流 动相；A(0. 1%甲酸水）-B化腊）梯度洗脱；流速；1血/min;柱温；25°C;检测波长；254nm; 进样量；10μL。
[0022] 测定方法：精密吸取金圣香200μL用50%甲醇-水稀释20倍后，过0. 22μm滤 膜后直接进样，记录80min色谱图。
[0023] 3、方法学考察。
[0024] 精密度试验；取同一批号的供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，记录色谱 图，考察各共有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果各共有峰的相对保留 时间的RSD为0. 01%~0. 22%，相对峰面积的RSD值为0. 1%~2. 54%。表明本实验仪器的 精密度良好。
[00巧]稳定性试验；取同一批号的供试品溶液，分别在0,1，2,4,8,12,24h进色谱分析， 记录色谱图，考察各共有色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的一致性，结果各共有色谱 峰相对保留时间的RSD为0. 02%~0. 37%，相对峰面积的RSD为2. 58%~4. 0%，说明样品在 常温实验条件下稳定性较好，在24h时间能保证实验结果的科学可靠。
[0026] 重现性试验；取同一批号的供试品，重复制备6份供试品溶液，每份进两样分析， 考察色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的一致性。结果各共有色谱峰相对保留时间 的RSD为0. 02%~0. 17%，相对峰面积的RSD值为0. 86%~3. 57%，结果说明此方法结果可 重现性良好，利于推广。
[0027] 1、相似度评价。
[002引取连续生产的13批烟用中药复方添加剂，按上述检测方法进行检测，得出其13批 样品的HPLC图谱，见图2,将13批金圣香指纹图谱的AIA数据文件导入《中药色谱指纹图 谱相似度评价系统研究2009版》，生成对照指纹图谱，见图3,计算各样品指纹图谱与生成 的对照图谱R的相似度，结果见表2,图4。相似度计算结果显示，13批金圣香指纹图谱相似 度均大于0. 9,说明工艺较稳定，用该方法对生产工艺中质量控制较可靠。
[0029]表2 13批烟用中药复方添加剂指纹图谱相似度
【主权项】
1. 一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法，其特征在于，该方法依次包括 以下步骤： (1) 供试品的制备：精密吸取烟用中药复方添加剂200μL，用50%甲醇-水稀释20倍 后，过0. 22μm滤膜即得； (2) 烟用复方添加剂的指纹图谱的测定：精密吸取供试品溶液10μL，进样，用高效液 相色谱仪测定，以S峰的保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面 积，即得到烟用复方添加剂的指纹图谱； 所述S峰是参照物的色谱峰； 所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用phenomenexlunaC1S反相色谱柱 (4.6mmX250mm，5ym);流动相：A(0.1% 甲酸水）_B(乙腈)，梯度洗脱：0 ~48mins，10% B~34%B;48 ~65mins，34%B~82%B;65 ~80mins，82%B~100%B;流速：lmL/min; 柱温：25°C;检测波长：254nm;记录80min色谱图； (3) 相似度评价。2. 根据权利要求1所述的一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法，其特征 在于，所述指纹图谱中共有峰的特征为：指纹图谱包括20个共有峰，各峰号的相对保留时 间分别为：峰 1 :〇· 069、峰 2 :0· 113、峰 3 :0· 420、峰 4 :0· 445、峰 5 :0· 525、峰 6 :0· 545、峰 7 : 0· 565、峰8 :0· 573、峰9 :0· 604、峰 10 :0· 794、峰 11 :0· 812、峰 12 :0· 958、峰S:1· 000、峰 14 : 1. 026、峰 15 :1· 141、峰 16 :1· 265、峰 17 :1· 409、峰 18 :1· 464、峰 19 :1· 584、峰 20 :1· 679。3. 根据权利要求1所述的一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法，其特征 在于，所述指纹图谱中共有峰的特征为：指纹图谱包括20个共有峰，各峰号的相对峰面积 分别为：峰 1 :〇· 250、峰 2 :0· 656、峰 3 :0· 453、峰 4 :0· 367、峰 5 :0· 244、峰 6 :0· 147、峰 7 : 0· 216、峰8 :0· 593、峰9 :0· 121、峰 10 :0· 210、峰 11 :0· 299、峰 12 :0· 242、峰S:1· 000、峰 14 : 0· 760、峰 15 :0· 625、峰 16 :0· 106、峰 17 :0· 212、峰 18 :0· 105、峰 19 :0· 102、峰 20 :0· 135。4. 根据权利要求1所述的一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法，其特征 在于，供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2009版》进行评价，各检测 波长下的相似度均大于0.90。
【专利摘要】一种用于烟用中药复方添加剂的快速质量检测方法,涉及以天然植物药材原料制成的烟手复方添加剂HPLC指纹图谱的构建方法。依次采用下步骤：（1）供试液制备；（2）色谱条件；（3）供试液指纹图谱检测；（4）指纹图谱共有峰的确定；（5）指纹图谱相似度评价。该方法有效全面的涵盖烟用中药复方添加剂中多种指标成分的基本信息，能全面的反映出产品的质量信息，从而能够全面、有效地控制产品质量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105277627
【申请号】CN201410037072
【发明人】罗敏娟, 苏加坤, 樊海燕, 郭磊, 罗海涛, 徐达, 蔡继宝
【申请人】江西中烟工业有限责任公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2014年7月3日