，吗啡-BSA偶联物、吗啡标准品、小鼠抗吗啡单克隆抗体、葡萄糖氧化酶标记的羊抗鼠二抗均够自北京沫之东生物技术有限公司，人IgG(翊圣生物，上海)，兔抗人IgG、羊抗兔IgG均够自上海博士德生物公司，葡萄糖(Sigma, USA)，96 孔酶标板(Corning, USA)，过氧化氢试纸条(Millipore, Germany)，30kd 超滤管(Millipore, Germany)。
[0074]部分实验溶液配制方法如下:
[0075]磷酸盐缓冲液(PBS，0.01M，pH = 7.4):
[0076](1)先配 0.2M PB(pH = 7.4，100mL)的母液:取 19mL0.2mol/L 的 NaH2P04，81mL0.2mol/L 的 Na2HP04，混合即可。
[0077](2)0.01M PB (PH = 7.4):取 50mL0.2M PB，加水稀释至 1000ml，并且加入 NaCl 至0.9% (g/100mL)即可。
[0078]封闭液:称取1.2g BSA于40ml水中，摇匀，配成3% BSA封闭液。
[0079]包被液(碳酸盐缓冲液):称取碳酸钠、碳酸氢钠各1.59g、2.93g溶于1000ml水中。
[0080]洗涤液:取5片PBS片溶于500ml水中，再加入2.5ml吐温-20，摇匀，配成PBST洗涤液。
[0081]葡萄糖溶液:称取18mg葡萄糖溶于30mL水中，配成5mmol/L葡萄糖溶液。
[0082]实施例1过氧化氢试纸条对不同浓度过氧化氢的响应结果
[0083]将过氧化氢溶液从100 μ Μ开始进行2倍倍比稀释至640000倍，吸取10 μ L于过氧化氢试纸条上，等待10s，观察其颜色的改变，结果见图1，从图1可以看出，随着H202的浓度的升高，试纸条反应区的颜色逐渐加深。
[0084]实施例2利用过氧化氢试纸条对兔抗人IgG进行免疫分析
[0085]1、实验操作流程
[0086](1)将人IgG用包被液(碳酸盐缓冲液，pH 9.6)稀释至1.25 μ g/mL，加入至ELISA酶标板孔中，100 μ L/孔。置于37°C，2h。
[0087](2)甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)Tween-20的PBS溶液，150 μ L/孔，静置lmin，甩净孔内洗涤液，拍干。重复洗涤4次。
[0088](3)封闭:加入 100yL/孔的 3%的 BSA，置于 37°C，2h。
[0089](4)室温下，甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)Tween-20的PBS，150 μ L/孔，甩净孔内洗涤液，拍干，重复洗涤4次，_20°C保存，待用。
[0090](5)向包被好的ELISA板中加入100yL/孔的PBS，置于室温lOmin，甩净。
[0091](6)用含0.1% (质量体积比)BSA的PBS对兔抗人IgG(40mg/mL)从1000倍开始进行2倍系列稀释，将稀释倍数分别为1000、2000、4000、8000、16000、32000、64000的兔抗人IgG以100 μ L/孔的加入量加入至ELISA板中，设置加入含0.1 % BSA的PBS而不加入兔抗人IgG的孔作为阴性对照，置于37°C孵育lh。
[0092](7)室温下，甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)Tween-20的PBS，150 μ L/
孔，甩净孔内洗涤液，拍干，重复洗涤4次。
[0093](8)将偶联的G0D-羊抗兔二抗稀释1000倍后分别取100 μ L加入各孔中，置于37°C孵育 lh。
[0094](9)室温下，甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)Tween-20的PBS，150 μ L/
孔，甩净孔内洗涤液，拍干，重复洗涤4次。
[0095](10)配制葡萄糖溶液(5mmol/L)，以100 μ L/孔加入至ELISA板，置于37°C lOmin。
[0096](11)吸取每孔中的10 μ L溶液于过氧化氢试纸条，观察颜色反应，结果如图2所示。图2的结果表明，随着兔抗人IgG浓度的升高，试纸条下端显色区的颜色逐渐变深，可作为后续检测的参比数据。
[0097]2、制作标准曲线
[0098]将图2所示试纸条采用配套的手持检测仪器(默克公司，RQflexlO，如图3所示)读取数据，绘制兔抗人IgG浓度和信号值(吸光度)的关系图(如图4所示)，并制作标准曲线和线性方程(如图5所示)。通过试纸条上颜色的深浅可以得到可定量的信号值(吸光度)，结合标准曲线中的线性方程，即可计算得出未知样品中兔抗人IgG浓度。
[0099]实施例3利用过氧化氢试纸条对未知浓度兔抗人IgG进行定量检测
[0100]检测步骤同实施例2中实验的操作流程，在颜色反应后，将结果与实施例2中的图2参比数据进行对照，确定待测物中兔抗人IgG的浓度，其落在一定区间，即可定性或者简单定量。或者将试纸条用配套仪器读取数据，将数据运用实施例2的标准曲线(如图5所示)的线性方程进行换算，从而确定其精确含量。
[0101 ] 实施例4基于CAT酶和H202试纸条对兔抗人IgG进行免疫分析
[0102]1、实验的操作流程
[0103](1)生物素化过氧化氢酶(CAT-B1tin)和生物素化的羊抗兔IgG的制备:取CAT (5mg/mL) 74.62 μ L、羊抗兔 IgG (lOmg/mL) 40 μ L,分别和 B1tin (5mg/mL) 4 μ L 于 400 μ LPBS中混合反应1.5h，用lOkd超滤管离心(9000rpm，20min)，除去未偶联的B1tin，CAT最终浓度为9.33mg/mL，羊抗兔IgG最终浓度为12mg/mL。
[0104](2)在ELISA板中包被一定浓度为20 μ g/mL的人lgG，4°C过夜，加入100 μ L/孔的PBS，置于室温lOmin，甩净。
[0105](3)用含0.1 % (质量体积比)BSA的PBS对兔抗人IgG (40mg/mL)从1000倍开始进行2倍系列稀释，将稀释倍数分别为1000、2000、4000、8000、16000、32000、64000的兔抗人IgG以100 μ L/孔加入至ELISA板中，设置加入含0.1 % BSA的PBS而不加入兔抗人IgG的孔作为阴性对照，置于37°C孵育lh。
[0106](4)室温下，甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)Tween-20的PBS，150 μ L/孔，甩净孔内洗涤液，拍干，重复洗涤4次。
[0107](5)将生物素化的羊抗兔IgG稀释5000倍，然后往ELISA板中每孔加入100 μ L的该溶液，然后在37°C孵育90min，甩净孔内溶液，拍干，用PBST缓冲溶液重复洗涤4次。
[0108](6)将链霉亲和素SA稀释4000倍，分别取100 μ L加入各孔中，置于37°C孵育40mino
[0109](7)室温下，甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)Tween-20的PBS，150 μ L/
孔，甩净孔内洗涤液，拍干，重复洗涤4次。
[0110](8)将偶联的CAT-B1tin稀释1000倍后分别取100 μ L加入各孔中，置于37°C孵育lh。
[0111](9)室温下，甩净孔内溶液，拍干。加入含1% (体积)TWeen-20的PBS，150yL/孔，甩净孔内洗涤液，拍干，重复洗涤4次。
[0112](10)配制过氧化氢溶液(25mg/L)，以100 μ L/孔加入至ELISA板中，置于37°C lOmin。
[0113](11)吸取每孔中的10 yL于过氧化氢试纸条，观察颜色反应，实验结果如图6。图6的结果表明，随着兔抗人IgG浓度的升高，试纸条下端显色区的颜色逐渐变浅，可作为后续检测的参比数据。
[0114]2、制作标准曲线
[0115]将图6所示试纸条采用配套的手持检测仪器读取数据，绘制兔抗人IgG浓度和信号值(吸光度)的关系图(如图7所示)，并制作标准曲线和线性方程(如图8所示)。通过标准曲线中的线性方程和试纸条上颜色的深浅，可以计算出未知样品中兔抗人IgG浓度。
[0116]实施例5利用过氧化氢试纸条对未知浓度兔抗人IgG进行定量检测
[0117]检测步骤同实施例4中标准品实验的操作步骤，在颜色反应后，将结果与实施例4中的图6参比数据进行对照，确定待测物中兔抗人IgG的浓度，其落在一定区间，即可定性或者简单定量。或者将试纸条用配套的手持检测仪读取数据，将数据与实施例4的标准曲线(如图8所示)进行对比，从而确定其精确含量。
[0118]实施例6基于过氧化氢试纸条对小分子(毒品-吗啡)进行免疫分析
[0119]1、可视