一种鉴别不同产地麦冬的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种麦冬产地的鉴别方法，包括利用特征性成分鉴别两种不同产地麦 冬的方法和该特征性成分的含量测定方法，具体地说是利用龙脑次苷鉴别麦冬产地的方法 和龙脑次苷的含量测定方法。 技术背景
[0002] 麦冬又称麦门冬，为百合科植物麦冬Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.的干 燥块根。具有养阴生津、润肺清心之功效。用于肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴， 内热消渴，心烦失眠，肠燥便秘。为常用大宗中药材之一。麦门冬始载于《神农本草经》，列 为上品，此后历代本草均有记载。根据历代本草记载和现代麦冬的产销情况，麦冬形成两大 道地药材，即浙麦冬（又称杭麦冬）和川麦冬，且历代本草均认为浙麦冬质量最佳，川麦冬 次之。
[0003] 浙麦冬主产于浙江省的杭州附近和慈溪，以杭州笕桥所产为最佳。浙麦冬的采收 年限一般为三年。川麦冬主产区四川绵阳地区的三台县，采收年限为一年，且产量高于三年 生的浙麦冬。根据《中国药典》和现代植物分类学文献，浙麦冬和川麦冬为同一种植物，但 根据两个产地的植物形态观察和化学成分分析，二个产地的麦冬不管是植物形态特征、生 长状况还是从化学成分，均存在着明显的差别。目前已上市的参麦注射液所选取的麦冬药 材产地不同，却没有标明其所用的麦冬其产地为何。
[0004] 文献显示，麦冬中含有多种有效成分，主要为皂苷类和黄酮类（长春中医学院 学报，麦冬化学成分及药理作用的研究现状），然而发明人发现上述两类成分均难以被鉴 别或不具有特征性。目前已有文献报道，使用龙脑苷鉴别参麦注射液中的麦冬成分（CN 200910155685. 6)，但是对于两个不同产地的麦冬到目前为止没有行之有效的鉴别方法。
[0005] 龙脑次苷首次发现是浙麦冬中，在1983年，金田宣等（金田宣 等.StudiesontheComponentsofOphiopogonRoots(China).I[J].Yakugaku zasshi.1983, 103 (11):1133-1139.)从 20kg的浙麦冬（Ophiopogonjaponicus Ker-Gawler)中分得龙脑次苷300mg，得率为300mg/20kg。常规条件下根本无法检测到其 存在，但是龙脑次苷又是麦冬的重要活性成分，有保护心肌细胞凋亡、促进心肌内皮细胞N0 释放和抗低密度脂蛋白酶氧化等作用，故目前急需一种快速，简便的龙脑次苷检测方法用 于鉴别麦冬产地。
【发明内容】
[0006] 本发明提供一种麦冬产地的鉴别方法，包括通过检测龙脑次苷鉴别麦冬产地的方 法和麦冬药材中龙脑次苷的含量测定方法。
[0007] 本发明针对目前龙脑次苷含量测定方法的缺失，提供了一种行之有效的测定方 法，可用于鉴别不同产地的麦冬药材。
[0008] 本发明对麦冬原药材进行不同条件的提取浓缩后，采用高效液相色谱法检测龙脑 次苷的含量，并且根据龙脑次苷的含量鉴别麦冬药材的产地。
[0009]具体方法如下：
[0010] (1)制备待测样品：将浙麦冬药材粉碎后过10目筛，精密称定150g，加溶剂 500mL，提取0. 2~3小时，滤过，减压浓缩至近干，残渣加甲醇溶液20mL，滤过，取续滤液作 为供试品溶液。
[0011] (2)制备对照品：精密称取龙脑次苷对照品（纯度：98· 08% )35. 38mg，，置100mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0012] (3)含量测定：将待测样品注入高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：色谱柱 为C18柱（250X4. 6mm，5μm)，蒸发光散射检测器；流动相为乙腈-水（28:72)混匀；流速 1.Oml/min;柱温35°C;检测条件：漂移管温度40°C;氮气压力3. 5L/min。
[0013] 进一步，所述步骤（1)中，所述溶剂优选甲醇，乙醇，乙酸乙酯，水，氯仿，和正丁 醇。
[0014] 所述步骤（1)中，所述提取方法优选超声处理0. 2~3小时或者加热回流0. 2~ 3时。
[0015] 进一步，所述步骤（1)中，所述提取方法优选加热回流0. 5-2小时。
[0016] 本发明方法中，提取浓缩后产生大量糖浆状混悬物，无法完全干燥，加入甲醇后无 法得到浓度均匀的供试品溶剂，且含量极低，为提高龙脑次苷的含量，优选步骤（1)溶剂为 甲醇：氯仿=1~9:1。
[0017] 进一步，所述步骤（1)中，所述溶剂优选甲醇：氯仿=1~3:1。
[0018] 使用上述方法，发明人通过不同渠道，收集了大量不同种植基地、不同采收时间的 两种产地的麦冬，对多批次的浙麦冬与川麦冬进行分别测定，发现龙脑次苷只有在浙麦冬 存在，川麦冬中检测不到龙脑次苷的存在，使用龙脑次苷作为麦冬药材中的指标性成分进 行鉴别是行之有效的方法。
[0019] 与现有技术相比，本发明的优势体现在：目前常规检测龙脑苷的方法是无法准确 检测到龙脑次苷的含量，本发明不仅能做到快速检测，同时优选了提取方法与最佳溶剂，通 过改变提取方法，使用较短的提取时间充分提取了药材中的微量成分，同时发明人筛选了 不同溶剂以排除药材中大量糖类物质的干扰，最终能够准确检测其在药材中的含量，弥补 了现有技术的空白。同时能够准确鉴别不同产地的麦冬药材，能够有效提高参麦注射液的 质量。
【附图说明】
[0020] 图1为实施例1中龙脑次苷标准曲线图。
[0021] 图2为实施例1中龙脑次苷标准品溶液的色谱图。
[0022] 图3为实施例1中供试品溶液的色谱图。
[0023] 图4为实施例2中提取lh后供试品溶液的色谱图。
[0024] 图5为实施例4中溶剂为甲醇-氯仿（2:1)的供试品色谱图。
[0025] 图6为实施例6中浙麦冬20150621的色谱图。
[0026] 图7为实施例6中川麦冬20150621的色谱图。
[0027]图8为实施例6中川麦冬20150801的色谱图。 具体实施例
[0028] 发明的具体实施方案是为了更清楚地说明本发明，不是对本发明技术特征的限 制。
[0029] 实施例1 :采用高效液相色谱法测定浙麦冬（浙麦冬20150801)中龙脑次苷的含 量。
[0030] (1)高效液相色谱条件
[0031] 仪器名称：Agilent 1100高效液相色谱仪；
[0032] 色谱条件：色谱柱为AlltimaC18柱（250X4.6mm，5ym);流动相为乙腈-水 (28:72)混匀；流速1.Oml/min;柱温35°C;检测条件：漂移管温度40°C;氮气压力3. 5L/ min；
[0033] 检测器：SEDEX75蒸发激光散射检测器。
[0034] (2)标准品溶液制备
[0035]精密称取龙脑次苷对照品（纯度：98· 08% )35. 38mg，，置lOOmL量瓶中，加甲醇溶 解并定容至刻度，摇匀，即得。
[0036] (3)供试品溶液的制备
[0037] 将麦冬药材粉碎后过10目筛，精密称定150g，加甲醇500mL，超声1小时，滤过，减 压浓缩至近干，残渣加甲醇溶液20mL，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
[0038] (4)线性范围考察
[0039] 精密称取龙脑次苷对照品35. 38mg，至100mL量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度， 摇匀，即得，按照拟定的色谱条件，分别进样1，2, 5, 10, 15和20μL，以峰面积的对数值与进 样量的对数值进行回归，求得回归方程：Υ= 1. 5891Χ-0. 3422,r= 0. 9993,结果见附图1， 表明龙脑次苷在0. 3470-6. 940μg范围内线性良好。
[0040] (4)待测样品含量测定
[0041] 精密吸取供试品溶液，每次进样量20μL，计算龙脑次苷含量为3. 764μg/g。
[0042] 实施例2 :将实施例1中步骤（3)中的超声提取法更换为80°C加热回流提取，反应 时间见表1，其他操作同实施例1，测定结果见表1。
[0043] 表1不同提取时间对含量的影响
[0044]
[0045] 实施例3 :将实施例2中的提取溶剂更换为表2所示，其他操作同实施例2,结果见 表2所示。
[0046] 表2不同提取溶剂对含量的影响
[0047]
[0048]
[0049] 实施例4 :将实施例3中的提取溶剂更换为表3所示，其他操作同实施例2,对待测 样品进行检测，结果见表3所示。
[0050] 选择更换溶剂的原因是在尝试大量不同溶剂提取浓缩后发现，待测样品变成浓稠 糖浆状混悬物，无法彻底旋干，考虑是药材中糖类物质过多造成，使龙脑次苷包覆于混悬物 中无法检测，致使其含量偏低，检测困难。通过在溶剂的摸索过程中，发现氯仿能有效抑制 糖类物质的渗出，故考察不同比例溶剂对含量测定的影响。
[0051] 表3不同比例溶剂对含量的影响
[0052]
[0053] 实施例5实施例4中的甲醇-氯仿（2:1)作为提取溶剂，其他操作不变，进行方法 学验证。精密吸取同一样品溶液（浙麦冬2015621)，重复进样6次，每次进样量20μL，计 算含量（Pg/g)，测试结果见表4,5,RSD(n= 6)为均在3%以内。结果表明该方法精密度 良好。
[0054]表4精密度测试含量（μg/g)结果
[0055]
[0056] 表3重复性测试含量（μg/g)结果
[0057]
[0058] 本方法的方法学验证中12小时稳定性考察符合要求，结果见表4.
[0059]表5稳定性实验数据列表
[0060]
[0061]平均值：35. 643μg/g;RSD= 1· 63%
[0062] 精密量取已测含量（以其重复性试验的平均值计，5335. 01μg)的浙麦冬药材6份 (浙麦冬20150621)，每份75g，每份精密加入对照品溶液7. 40mL(精密称定龙脑次苷对照品 35. 38mg，，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得），按照相同方法，制备成 加样回收率供试液，分别精密吸取20μL以上供试品溶液，依法测定，测试结果见表6,加样 回收率（η= 6)为92. 15%，RSD为3. 98,说明该方法具有一定准确度。
[0063] 表6加样回收率实验数据列表
[0064]
[0066]实施例6实施例4中的甲醇-氯仿（2:1)作为提取溶剂取，其他条件不变，检测 不同批次的浙麦冬和川麦冬中龙脑次苷的含量。
[0067] 表7麦冬药材中龙脑次苷的含量
[0068]
【主权项】
1. 一种检测麦冬中龙脑次苷含量的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤： ⑴制备待测样品：将麦冬药材加溶剂提取0. 2~3小时，滤过，浓缩。 (2)含量测定：高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为C18柱，流动相为乙腈-水 (28:72)，蒸发光散射检测器。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，提取溶剂为甲醇，乙醇，乙酸 乙酯，水，氯仿，正丁醇及他们的混合溶剂。3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，提取溶剂为甲醇-氯仿= 1 ~9:1〇4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，提取方法为超声0. 2~3小 时、加热回流0.2~3小时。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1)中，提取方法为加热回流0. 5~ 2小时。6. 如权利要求权利1，步骤（2)，C18为AlltimaC18柱所述的方法在鉴别麦冬产地的 用途。
【专利摘要】本发明公开了一种麦冬产地的鉴别方法，将麦冬药材进行提取浓缩制成待测样品，通过高效液相色谱法，对麦冬药材中的特征性药效成分——麦冬龙脑次苷进行含量测定，发现不同产地的麦冬药材中龙脑次苷含量存在明显差异。该方法不仅提供了一种全新的检测麦冬中的微量成分——龙脑次苷的方法，同时也是一种全新的麦冬产地鉴别方法。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105388228
【申请号】CN201510881864
【发明人】陈莉, 朱子微, 宓寅筱, 叶虹, 王木兰, 李梅
【申请人】正大青春宝药业有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2015年12月4日