一种检测水产品中6种含硫类致嗅物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于水产品检测技术领域，具体涉及一种检测水产品中6种含硫类致嗅物 质的方法。
【背景技术】
[0002] 含硫类致嗅物质多为挥发性含硫化合物（volatilesulfurcompounds，VSC)，主 要包括硫化氢（hydrogendisulfide,H2S)、甲硫醇（methanethiol，MT)、羰基硫（carbonyl sulfide，COS)、甲硫酿（dimethylsulfide，DMS)、二硫化碳（carbondisulfide，CS2)、二 甲二硫（dimethyldisulfide,DMDS)、二甲三硫（dimethylTrisulfide，DMTS)和二甲四硫 (dimethyltetrasulfide，DMTeS)，其嗅阈值（odorthresholdconcentration，0TC) -般 都很低，即使以很低的浓度存在于环境及水生动物体内也会产生嗅味问题。当含硫类致嗅 物质通过食物链被水产动物摄食而进入体内，并蓄积达到一定限量后，会导致水产品产生 明显的异味，引起消费者明显的不适应。另外，大部分含硫类致嗅物质有较强的毒性，即使 很低的浓度，也能造成对人呼吸系统的损害，在高浓度条件下暴露危害最大，可以导致昏 迷。此外，硫化氢可与人体内细胞色素、氧化酶及该类物质的二硫键作用，影响细胞氧化过 程，造成细胞组织缺氧，危及人类的生命。因此，提供一种有效检测水产品中6种含硫类 致嗅物质的方法就非常重要。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种操作简便快速、 能有效地减少了基体成分的干扰、高灵敏度、高分辨率，利用气相色谱-质谱定性定量的功 能，对水产品中挥发性含硫类致嗅物质进行检测。
[0004] 本发明检测水产品中6种含硫类致嗅物质的方法，其步骤如下：
[0005] 1)对标准品的配置：
[0006] 准确称量6种含硫类致嗅物质的标准品用正己烷溶解来配置标准品溶液，优选标 准品溶液的浓度为l〇ng/ml-1000ng/ml;
[0007] 2)待检测样品前处理：
[0008] 取待检测的水产品样品粉碎后，加入正己烷进行超声提取30min，提取结束后低温 条件下离心分出有机相；
[0009] 作为优选，超声提取时保持温度在30°C以下；
[0010] 3)测定：
[0011] 标准品通过顶空进入质谱，进行一级准确质量数的采集，扫描采集参数；其中顶空 条件为平衡温度110°c，平衡时间15min;进样针温度120°C，传输线温度130°C;顶空瓶压力 172kPa，加压时间3min，进样时间0. 05min，干吹2min，分流进样，分流比5:1 ;
[0012] 色谱条件如下：
[0013] 色谱柱为60mX0. 4mmX0. 32μπι的DB-1柱；升温程序：起始温度40°C，保持3min， 以10°C/min升温至110°C，再以15°C/min升温至200°C，再以40°C/min升温至240°C;进 样口温度：250°C;载气为氦气He(纯度>99. 999% );隔垫吹扫流量：3ml/min;进样模式：不 分流进样；进样量1. 〇μ1 ;
[0014] 质谱条件：
[0015] 离子源温度：230°C;四极杆温度：150°C;接口温度：240°C;电离方式为电子轰击 (EI)离子源；电子能量为70eV;电子倍增器电压为1671V;S頂采集模式，扫描质量范围： 40~350m/z;阈值：150 ;采样频率：2 ;溶剂延迟：4min。
[0016] 4)选取不同种类的水产品粉碎后，加入正己烷进行超声提取30min，提取结束后 低温条件下离心分出有机相；然后对有机相按照步骤3)进行测定，确定是否含有含硫类致 嗅物质。
[0017] 所述的6种含硫类致嗅物质，是硫化氢（hydrogendisulfide,H2S)、甲硫醇 (methanethiol，MT)、甲硫酿（dimethylsulfide，DMS)、二硫化碳（carbondisulfide， CS2)、二甲二硫（dimethyldisulfide,DMDS)、二甲三硫（dimethylTrisulfide，DMTS)。
[0018] 通过上述优化建立水产品中含硫类致嗅物质快速、高效、灵敏的检测方法。现有技 术相比，本发明的优点在于：本发明的检测方法操作简便快速，灵敏度高，水产品基质下其 检出限可达2ppb以下，其回收率及重复性能满足日常检测的要求，采用基质分散法净化样 品，有效地减少了基体成分的干扰，而且，本方法具有高通量、高灵敏度、高分辨率，高质量 精确度及可行的线性范围，利用气相色谱质谱定性定量的功能，对水产品中含硫类致嗅物 质进行检测，大大地减少了假阳性等误判事件，极大地提高了检测机构对水产品风险的监 测能力，经检测后的水产品更为卫生安全。
【附图说明】
[0019] 图1 :6种含硫类致嗅物质标准品的气相色谱-质谱总离子流图（浓度为200ng/ ml)；
[0020] 图2 :H2S选择性离子色谱图A和扫描质谱图Β(9· 671min);
[0021] 图3:MT选择性离子色谱图A和扫描质谱图B(10. 775min);
[0022] 图4:DMS选择性离子色谱图A和扫描质谱图B(12. 405min);
[0023] 图5 :CS2选择性离子色谱图A和扫描质谱图B(14. 137min);
[0024] 图6:DMDS选择性离子色谱图A和扫描质谱图B(14. 389min);
[0025] 图7:DMTS选择性离子色谱图A和扫描质谱图B(14. 658min)。
[0026]图8 :6种含硫类致嗅物质标准品水产品机制下的气相色谱-质谱总离子流图（浓 度为2ng/ml)
【具体实施方式】
[0027]申请人在长期的研究中对各个步骤和理化参数进行了优化，从而使本发明的方法 可以在一次反应中精确的检测6种含硫类致嗅物质（硫化氢、甲硫醇、甲硫醚、二硫化碳、二 甲二硫、二甲三硫），从而促成了本发明。
[0028] 下面首先对本发明方法的所使用的仪器、试剂和方法进行如下的解释：
[0029] 1.主要仪器
[0030]气相色谱-质谱联用仪（GC/MS)，AgilentGC7890A/MS5975C，美国Agilent公司， 配备顶空进样器、增强型化学工作站；高速组织捣碎机，DS-1，上海标本模型厂；高速冷冻 离心机，SERJSE09L31，USA;数控超声波清洗器，KQ5200DE，昆山市超声波仪器有限公司；数 显型漩祸混合器，美国Talboys。
[0031] 2.试剂
[0032] 正己烷：色谱纯；标准品：含硫类致嗅物质（纯度98.0%);硫化氢（hydrogen disulfide,H2S)、甲硫醇（methanethiol，MT)、甲硫酿（dimethylsulfide，DMS)、二硫化 碳（carbondisulfide，CS2)、二甲二硫（dimethyldisulfide,DMDS)、二甲三硫（dimethyl Trisulfide，DMTS)由上海安谱公司提供。
[0033] 3.顶空条件
[0034] 平衡温度110°C，平衡时间15min;进样针温度120°C，传输线温度130°C;顶空瓶压 力172kPa，加压时间3min，进样时间0. 05min，干吹2min，分流进样，分流比5:1。
[0035] 4.色谱条件
[0036] 色谱柱：DB-l，60mX0. 4mmX0. 32μπι;升温程序：起始温度40°C，保持3min，以 10°C/min升温至110°C，再以15°C/min升温至200°C，再以40°C/min升温至240°C;进样 口温度：250°C;载气：He(纯度>99. 999% );隔垫吹扫流量：3ml/min;进样模式：不分流进 样；进样量1.0μ1。
[0037] 5.质谱条件
[0038] 离子源温度：230°C;四极杆温度：150°C;接口温度：240°C;电离方式：电子轰击 (EI)离子源；电子能量：70eV;电子倍增器电压：1671V;SIM采集模式，扫描质量范围：40~ 350m/z;阈值：150 ;采样频率：2 ;溶剂延迟：4min。
[0039] 上述条件下，6种含硫类致嗅物质的保留时间和定性定量离子如表1所示。
[0040] 表1 6种含硫类致嗅物质的保留时间和定性定量离子表 [0041 ]
[0042] *下划线标注的为定量离子
[0043] 实施例1 :
[0044] 1)标准溶液制备
[0045] 分别准确称取6种含硫类致嗅物质标准品0.lg(精确到0.OOOlg)，用正己烷定容 至50ml，得到含硫类致嗅物质标准储备液，浓度为2.Omg/ml。准确移取上述标准储备液，以 正己烧逐级稀释配制含硫类致嗅物质：10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、1μg/ml系 列混合标准工作溶液。
[0046] 2)样品制备
[0047] 称取粉碎的水产品样品5.0g，置于50ml具塞离心管中，加入5ml正己烷，于混合器 上祸旋混勾lmin，超声提取30min(保持温度在30°C以下），低温条件下离心10min，分出有 机相，再提取2次，每次5ml正己烷，合并有机溶剂相放入顶空瓶。
[0048] 3)测定
[0049] 首先通过优化的顶空条件