一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法。
【背景技术】
[0002] 喹诺酮类抗菌药氟甲喹（Flumequine)具有疗效显著、抗菌谱广、不会轻易出现交 叉耐药性的特点，被广泛应用于人和动物多种感染疾病的防治中。众所周知，食用水产动物 较难保存，对水质要求较高，极易感染细菌从而导致使用者出现肠道疾病等，而作为一种高 效的广谱抗菌药，氟甲喹不仅对于革兰阳性细菌和革兰阴性细菌具有一定的抑制作用，对 于水产动物感染的大肠杆菌病，弧球菌属和单孢菌属病等也有较强的抑制作用；并且，由于 使用氟甲喹的安全范围广、无不良反应、药物残留小等，也使氟甲喹在抗菌药中的应用更为 广泛。
[0003] 氟甲喹存在两种对映体，其结构式如下：
[0005] 由于不同的对映体在手性条件下反应可显示不同的反应性，而手性药物的对映体 分子于手性固定相上的手性识别是许多因素综合作用的结果，不同的体系存在着不尽相同 的手性识别机理，为了更进一步的对氟甲喹进行深入研究，研究手性化合物对映体及手性 固定相的拆分机理十分重要，对于手性药物的研究和开发都具有重要意义，鉴于此，本发明 提供一种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种检测水产品中氟甲 喹手性对映体的方法，该方法能够成功实现氟甲喹手性对映体及手性固定相的拆分，为氟 甲喹的深入研究提供了条件。
[0007] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种检测水产品中氟甲喹手性对 映体的方法，其特征在于包括以下步骤：
[0008] (1)用体积比为80%~100%:20%~0%的无水乙醇与异丙醇的混合物作为流动相 将氟甲喹溶解并稀释配置成20yg/ml~30yg/ml的溶液，并用微孔滤膜过滤；
[0009] (2)取匀浆后的水产品2g于离心管中，加入步骤（1)中配置的氟甲喹溶液10~ lOOmL，振荡后加入2g~3g无水Na2S04及15ml~25ml乙酸乙酯，用漩润混匀后再将离心 管置于离心机上进行离心处理，然后转移离心管中的乙酸乙酯层到分液漏斗中；离心管中 的残渣再用5ml~10ml乙酸乙酯溶解并进行离心处理，将该离心后的乙酸乙酯层与上述分 液漏斗中的乙酸乙酯层进行混合；
[0010] (3)向上述分液漏斗中加入20ml~30ml正己烷溶液，充分振荡使其混匀，静置分 层后弃正己烷层，将乙酸乙酯溶液转移于水浴锅中蒸干，蒸干后的残渣用无水乙醇溶解定 溶至lml~2ml，并采用微孔滤膜进行过滤后得到溶液A，溶液A中加入三乙胺作为添加剂， 使其体积分数为〇. 1%~〇. 3% ;
[0011] (4)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL0D-H手 性柱，该手性柱的填料为硅胶表面涂布纤维素-三-[3,5_二甲苯基氨基甲酸酯];所 述手性柱的柱温为20°C~30°C;检测时的流速为0. 5mL/min~0. 7mL/min，波长为254nm。
[0012] 作为优选，所述无水乙醇占乙醇和异丙醇混合物的体积分数为100%。
[0013] 优选地，在所述溶液A中加入体积分数为0. 3%的三乙胺作为添加剂。
[0014] 所述步骤（4)中采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时的流速优选为 0? 6mL/min;检测波长为 254nm。
[0015] 所述步骤（4)中采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时所述手性柱的柱温 优选为20°C。
[0016] 所述微孔滤膜过滤所采用的微孔直径为0. 45ym。
[0017] 与现有技术相比，本发明用于检测水产品中氟甲喹手性对映体，成功实现了氟甲 喹手性对映体及手性固定相的拆分，其中，对映体S- (-)-FMQ及R- ( + )-FMQ在lOiig/ mL~10 0yg/mL浓度范围内与其响应值呈良好的线性关系，回归方程及相关系数分别为 Y=96. 62X-238. 50、R2=l. 0000 及Y=112. 32X-281. 04、R2=l. 0000,样品平均回收率分别为 85. 33%和83. 28%，日间精密度分别为5. 4%和4. 7%，检出限分别为0. 05iig/g和0. 04iig/ g，定量限分别为〇. 08iig/g和0. 07iig/g。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明实施例中对映体分离度与乙醇含量之间的关系曲线图；
[0019] 图2为本发明实施例中对映体分离度与三乙胺浓度之间的关系曲线图；
[0020] 图3为本发明实施例中对映体分离度与流速之间的关系曲线图；
[0021] 图4为本发明实施例中氟甲喹对映体的分离色谱图；
[0022] 图5为本发明实施例中S- (_) -FMQ的色谱图；
[0023] 图6为本发明实施例中R- ( + )-FMQ的色谱图。
【具体实施方式】
[0024] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0025] -种检测水产品中氟甲喹手性对映体的方法，包括以下步骤：
[0026] (1)用乙醇和异丙醇的混合物作为流动相将氟甲喹溶解并稀释配置成20yg/ ml~30iig/ml的溶液，并用微孔直径为0. 45iim的滤膜过滤；
[0027] (2)取匀浆后的水产品2g于离心管中，加入步骤（1)中配置的氟甲喹溶液10~ lOOmL，振荡lOmin后分别加入2g无水Na2S04及20ml乙酸乙酯，用漩润混匀5min后再将离 心管置于离心机上以4000r/min的速度进行离心处理lOmin，然后转移离心管中的乙酸乙 酯层到分液漏斗中；离心管中的残渣再用10mL乙酸乙酯溶解并进行离心处理，将该离心后 的乙酸乙酯层与上述分液漏斗中的乙酸乙酯层进行混合；
[0028] (3)向上述分液漏斗中加入30mL正己烷溶液，充分振荡使其混匀，静置分层后弃 正己烷层，将乙酸乙酯溶液转移于水浴锅中蒸干，残渣用无水乙醇溶解定容至lmL并采用 0. 45ym的微孔滤膜进行过滤后得到溶液A;
[0029] (4 )在溶液A中加入三乙胺作为添加剂，采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检 测，高效液相色谱仪选用CHIRALCEL0D-H手性柱，该手性柱的填料为硅胶表面涂布纤 维素-三-[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]，检测波长为254nm。