购得鸡蛋200枚作为一组，称为"P组"， 两组鸡蛋均新鲜且保存条件一致。
[0039] 1.2不同饲养方式下鸡蛋营养成分的测定
[0040] 从两组鸡蛋分别随机各取50枚，准备用于实验。
[0041 ]将上述两组鸡蛋进行处理，测定其中的营养成分参数，具体参数包括:灰分、微量 元素(钙、磷）、蛋白质、氨基酸、脂肪、卵磷脂、维生素B2和维生素A，检测方法如下：
[0042]灰分检测方法:参考国家标准"GB/T5009.4-2010食品中灰分的测定"方法。
[0043] 微量元素（钙、磷)检测方法:参考国家标准"GB5413.21 -2010婴幼儿食品和乳品 中钙、铁、锌、钠、钾、镁、铜和锰的测定"方法。
[0044]蛋白质检测方法:参考国家标准"GB5009.5-2010食品中蛋白质的测定"方法。 [0045]氨基酸分析仪：参考国家标准"GB/T5009.124-2003食品中氨基酸的测定"方法 (Beckmanl21MB型）
[0046] 脂肪检测方法:参考国家标准"GB5009.6-2010食品中脂肪的测定"方法。
[0047]卵磷脂含量检测方法:磷钒钼酸铵比色法(尤尼柯UV-2802H型紫外可见分光光度 计)。
[0048]维生素B2含量检测方法:高效液相色谱法(Waters高效液相色谱仪）。
[0049]维生素A含量检测方法:三氯化锑比色法（尤尼柯UV-2802H型紫外可见分光光度 计)。
[0050]将两组鸡蛋(共计100枚)分别检测上述参数，检测结果采用SPSS12.0软件进行t检验分析，结果表明，灰分、微量元素(钙、磷）、蛋白质、氨基酸、脂肪、卵磷脂、维生素B2和维 生素A在粗放型养殖条件下鸡蛋(C组）中含量均优于规模养殖条件下鸡蛋(P组），因此可以 判定，粗放型养殖条件下鸡蛋营养价值优于规模养殖条件下鸡蛋。
[0051 ] 1.3寻找新型评估营养价值的标志物
[0052] 1.3.1样品前处理
[0053]从两组鸡蛋分别再随机取各50枚，鸡蛋打碎并搅匀，置于冰箱中冷藏保存，待测。 称取试样2.0g，置于50ml离心管中，加入1%的甲酸乙腈溶液6ml，祸旋混勾5min，高速离心 后，取上清液置于另一50.0ml离心管中；提取两次并合并提取液，提取液氮气吹干，加入流 动相2.0ml溶解，高速离心后，0.45μπι微孔滤膜过滤，供UPLC-MS/MS测定。
[0054] 1.3.2色谱分析
[0055] 色谱柱为WatersAcquityUPLCBEHC18柱（100mmX2 · 1mm，1 · 7μηι);流动相:A相 为甲醇，B相为0 · 05 %甲酸水-5mM醋酸铵溶液，梯度洗脱：0-0.111^11:0%8-0.0%8;0.1- 3.Omin： 0.0 %Β-0.0%B； 3.0-15.Omin： 0.0 %B-100.0 %B； 15.0-23.Omin： 100.0 %B- 100·0%Β;23·0-23·lmin:100.0%B-0.0%B;23.卜26.0min:0.0%B-0.0%B;流速为 0 · 25mL·min-1;柱温为30〇C;进样量为5yL〇
[0056] h3.3质谱分析
[0057]采用TripleT0F-4600型MS/MS质谱仪（QSTARTMElite，ABSciex)，配有ESI源及 AnalystQS2.0数据处理系统。采用正离子检测模式，ESI离子源，使用的气体均为氮气。质 谱扫描方式及其测定条件如下：
[0058]
[0059] 1.3.4数据分析
[ΟΟ?Ο]在上述条件下，对质谱分析中所获得的离子通过MarkerView?软件进行分析，最终 发现m/z265.1118(保留时间加=1.611^11)于两组鸡蛋中存在显著差异，在(：组中含量显著 较高，其二级碎片离子峰为:m/z122.0713和m/z144.0478;根据上述质谱数据，通过质谱 数据检索与分析，初步推测该物质为维生素B1。
[0061 ] 1.3.5差异离子的结构验证
[0062]为了对上述结构进行评估，从中国药品生物制品检定研究院购买维生素B1对照 品，并通过快速超高效液相色谱分离系统与Q-TOF型MS/MS仪进行比对分析，最终确认该化 合物为为维生素B1，分子式为C12H16N4OS·HC1，结构式如下：
[0063]
[0064] 维生素B1
[0065] 1.3.6标志物的确定
[0066]通过上述方法，我们发现了一个新型的可用于营养价值评估的标志物-维生素B1， 该标志物可以快速、准确地评价鸡蛋营养价值。
[0067]下面通过具体的实施例说明维生素B1评估鸡蛋的营养价值。
[0068]实施例[0069]实施例1:
[0070]取山地地区（河北省保定市易县)散养的鸡产下的鸡蛋20枚，称为"A组"，同时与上 述相同的时间里，从河北某人工饲料喂养方式养殖场购得的鸡蛋20枚，称为"B组"，从哈尔 滨某人工饲料喂养方式的养殖场购得的鸡蛋20枚，称为"C组"。从鸡蛋来源与营养价值判定 分析，明显地，放养型A组鸡蛋(俗称柴鸡蛋)营养价值优于人工喂养型B组和C组鸡蛋。
[0071]从鸡蛋外观（体积、重量、色泽）观察，可以发现A组鸡蛋体积较小，重量一般不足 50g，B组鸡蛋体积较大，重量一般大于50g;C组鸡蛋在外观上与A组基本相同，从体积和重量 上看，B组优于A、C组。打开到容器中，A组的颜色特别是鸡蛋黄的颜色较其他两组明显要黄， 其他两组的蛋黄颜色没有区别，由此，A组优于B、C组。通过上述分析可以看出，难以通过外 观对其营养价值进行区分。
[0072]将上述样品按照实验例中1.2-1.5的方法进行样品前处理、色谱分析、质谱分析和 数据分析，结果如下：
[0073]A组中的维生素B1的平均含量为3.261ppm，B组鸡蛋维生素B1的平均含量为 0.287ppm;A组明显高于B组，C组鸡蛋维生素B1的平均含量为0.80lppm;经过统计分析，发现 A组的维生素B1平均含量明显高于B组和C组，B组与C组无显著性差别，C组鸡蛋的营养价值 稍高于A组。
[0074]实施例2:
[0075]取山地地区（河北省保定市易县)散养的鸡产下的鸡蛋10枚，称为"A组"，同时与上 述相同的时间里，从北京沃尔玛超市购得的普通鸡蛋10枚，称为"D组"，从集贸市场购得鸡 蛋10枚，称为"E组"。
[0076]从鸡蛋外观、色泽观察，可以发现A组鸡蛋比较小，一般不足50g，大部分为皮为白 色，D组鸡蛋比较大，一般大于50g，大部分为鸡蛋皮为红棕色;E组鸡蛋在外观上与D组基本 相同。打开到容器中，A组的颜色特别是鸡蛋黄的颜色较其他两组明显要黄，其他两组的蛋 黄颜色没有区别。
[0077]将上述样品按照实验例中1.2-1.5的方法进行样品前处理、色谱分析、质谱分析和 数据分析，结果如下：
[0078]A组中的维生素B1的含量为3.524ppm，D组鸡蛋维生素B1的含量为1.061ppm;A组明 显高于D组，E组鸡蛋维生素B1的含量为0.953ppm，A组品质最高，D组与E组区别不大，较A组 明显低。
[0079]通过上述实施例可以看出，通过外观判断鸡蛋的营养价值是不可靠的。本发明的 物质和方法可以用于评估鸡蛋的营养价值，并且简单，迅速，准确，而且可以进行定量。
【主权项】
1. 一种评估鸡蛋营养价值的方法，其特征在于，检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维 生素B1含量高低。2. 如权利要求1所述评估鸡蛋营养价值的方法，该方法是通过超高效液相色谱分离系 统(UPLC)与Q-TOF型质谱仪(Q-TOFMS/MS)的联用技术对鸡蛋进行检测。3. -种评估鸡蛋营养价值的方法，其特征在于，通过超高效液相色谱分离系统(UPLC) 与Q-TOF型质谱仪(Q-TOFMS/MS)的联用技术在如下条件下对鸡蛋进行检测： 所述超高效液相色谱测定条件为：色谱柱为WatersAcquityUPLCBEHC18柱；流动 相:A相为甲醇，B相为0.05 %甲酸水-5mM醋酸铵溶液，梯度洗脱，梯度洗脱的方案如下：0_ 0.1min：0%B-0.0%B；0.1-3.0min：0.0%B-0.0%B；3.0-15.0min：0.0%B-100.0%B； 15.0-23.0min：100.0%B-100.0%B；23.0-23.1min： 100.0 %B-0.0%B； 23.1-26.0 min：0.0%B-0.0%B； 所述Q-TOF型MS/MS测定采用正离子检测模式，ESI离子源;检测到质谱离子特征峰m/z265.1118,其保留时间为tR=1.6min;二级碎片离子峰为:m/z122.0713 和m/z144.0478。4. 维生素B1在评估鸡蛋营养价值中的应用。5. 如权利要求4所述的应用，其中所述应用是通过检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者 维生素B1含量高低来实现的。6. 如权利要求4或5所述的应用，其中通过超高效液相色谱分离系统(UPLC)与Q-T0F型 质谱仪(Q-TOFMS/MS)的联用技术检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维生素B1含量高低。7. -种评估鸡蛋营养价值的物质，其特征在于，所述物质为维生素B1。8. -种评估鸡蛋营养价值的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有能够鉴定或定量维 生素B1的试剂。
【专利摘要】本发明提供一种评估鸡蛋营养价值的方法，检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维生素B1含量高低。该方法是通过超高效液相色谱分离系统(UPLC)与Q-TOF型质谱仪联用技术对鸡蛋进行检测。本发明还提供了维生素B1在评估鸡蛋营养价值中的应用；所述应用是通过检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维生素B1含量高低来实现的。一种评估鸡蛋营养价值的物质，所述物质为维生素B1。进一步地，本发明还提供一种评估鸡蛋营养价值的试剂盒，所述试剂盒含有能够鉴定或定量维生素B1的试剂。该方法简单，迅速，准确，而且可以进行定量。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105424861
【申请号】CN201510944031
【发明人】田亚平, 贾静辉, 陈洋, 侯东军, 刘勇军, 王亚姗, 刘洪斌, 王海
【申请人】中国动物疫病预防控制中心
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月16日