购得鸡蛋200枚作为一组,称为"P组", 两组鸡蛋均新鲜且保存条件一致。
[0039] 1.2不同饲养方式下鸡蛋营养成分的测定
[0040] 从两组鸡蛋分别随机各取50枚,准备用于实验。
[0041 ]将上述两组鸡蛋进行处理,测定其中的营养成分参数,具体参数包括:灰分、微量 元素(钙、磷)、蛋白质、氨基酸、脂肪、卵磷脂、维生素B2和维生素A,检测方法如下:
[0042]灰分检测方法:参考国家标准"GB/T5009.4-2010食品中灰分的测定"方法。
[0043] 微量元素(钙、磷)检测方法:参考国家标准"GB5413.21 -2010婴幼儿食品和乳品 中钙、铁、锌、钠、钾、镁、铜和锰的测定"方法。
[0044]蛋白质检测方法:参考国家标准"GB5009.5-2010食品中蛋白质的测定"方法。 [0045]氨基酸分析仪:参考国家标准"GB/T5009.124-2003食品中氨基酸的测定"方法 (Beckmanl21MB型)
[0046] 脂肪检测方法:参考国家标准"GB5009.6-2010食品中脂肪的测定"方法。
[0047]卵磷脂含量检测方法:磷钒钼酸铵比色法(尤尼柯UV-2802H型紫外可见分光光度 计)。
[0048]维生素B2含量检测方法:高效液相色谱法(Waters高效液相色谱仪)。
[0049]维生素A含量检测方法:三氯化锑比色法(尤尼柯UV-2802H型紫外可见分光光度 计)。
[0050]将两组鸡蛋(共计100枚)分别检测上述参数,检测结果采用SPSS12.0软件进行t检验分析,结果表明,灰分、微量元素(钙、磷)、蛋白质、氨基酸、脂肪、卵磷脂、维生素B2和维 生素A在粗放型养殖条件下鸡蛋(C组)中含量均优于规模养殖条件下鸡蛋(P组),因此可以 判定,粗放型养殖条件下鸡蛋营养价值优于规模养殖条件下鸡蛋。
[0051 ] 1.3寻找新型评估营养价值的标志物
[0052] 1.3.1样品前处理
[0053]从两组鸡蛋分别再随机取各50枚,鸡蛋打碎并搅匀,置于冰箱中冷藏保存,待测。 称取试样2.0g,置于50ml离心管中,加入1%的甲酸乙腈溶液6ml,祸旋混勾5min,高速离心 后,取上清液置于另一50.0ml离心管中;提取两次并合并提取液,提取液氮气吹干,加入流 动相2.0ml溶解,高速离心后,0.45μπι微孔滤膜过滤,供UPLC-MS/MS测定。
[0054] 1.3.2色谱分析
[0055] 色谱柱为WatersAcquityUPLCBEHC18柱(100mmX2 · 1mm,1 · 7μηι);流动相:A相 为甲醇,B相为0 · 05 %甲酸水-5mM醋酸铵溶液,梯度洗脱:0-0.111^11:0%8-0.0%8;0.1- 3.Omin: 0.0 %Β-0.0%B; 3.0-15.Omin: 0.0 %B-100.0 %B; 15.0-23.Omin: 100.0 %B- 100·0%Β;23·0-23·lmin:100.0%B-0.0%B;23.卜26.0min:0.0%B-0.0%B;流速为 0 · 25mL·min-1;柱温为30〇C;进样量为5yL〇
[0056] h3.3质谱分析
[0057]采用TripleT0F-4600型MS/MS质谱仪(QSTARTMElite,ABSciex),配有ESI源及 AnalystQS2.0数据处理系统。采用正离子检测模式,ESI离子源,使用的气体均为氮气。质 谱扫描方式及其测定条件如下:
[0058]
[0059] 1.3.4数据分析
[ΟΟ?Ο]在上述条件下,对质谱分析中所获得的离子通过MarkerView?软件进行分析,最终 发现m/z265.1118(保留时间加=1.611^11)于两组鸡蛋中存在显著差异,在(:组中含量显著 较高,其二级碎片离子峰为:m/z122.0713和m/z144.0478;根据上述质谱数据,通过质谱 数据检索与分析,初步推测该物质为维生素B1。
[0061 ] 1.3.5差异离子的结构验证
[0062]为了对上述结构进行评估,从中国药品生物制品检定研究院购买维生素B1对照 品,并通过快速超高效液相色谱分离系统与Q-TOF型MS/MS仪进行比对分析,最终确认该化 合物为为维生素B1,分子式为C12H16N4OS·HC1,结构式如下:
[0063]
[0064] 维生素B1
[0065] 1.3.6标志物的确定
[0066]通过上述方法,我们发现了一个新型的可用于营养价值评估的标志物-维生素B1, 该标志物可以快速、准确地评价鸡蛋营养价值。
[0067]下面通过具体的实施例说明维生素B1评估鸡蛋的营养价值。
[0068]实施例[0069]实施例1:
[0070]取山地地区(河北省保定市易县)散养的鸡产下的鸡蛋20枚,称为"A组",同时与上 述相同的时间里,从河北某人工饲料喂养方式养殖场购得的鸡蛋20枚,称为"B组",从哈尔 滨某人工饲料喂养方式的养殖场购得的鸡蛋20枚,称为"C组"。从鸡蛋来源与营养价值判定 分析,明显地,放养型A组鸡蛋(俗称柴鸡蛋)营养价值优于人工喂养型B组和C组鸡蛋。
[0071]从鸡蛋外观(体积、重量、色泽)观察,可以发现A组鸡蛋体积较小,重量一般不足 50g,B组鸡蛋体积较大,重量一般大于50g;C组鸡蛋在外观上与A组基本相同,从体积和重量 上看,B组优于A、C组。打开到容器中,A组的颜色特别是鸡蛋黄的颜色较其他两组明显要黄, 其他两组的蛋黄颜色没有区别,由此,A组优于B、C组。通过上述分析可以看出,难以通过外 观对其营养价值进行区分。
[0072]将上述样品按照实验例中1.2-1.5的方法进行样品前处理、色谱分析、质谱分析和 数据分析,结果如下:
[0073]A组中的维生素B1的平均含量为3.261ppm,B组鸡蛋维生素B1的平均含量为 0.287ppm;A组明显高于B组,C组鸡蛋维生素B1的平均含量为0.80lppm;经过统计分析,发现 A组的维生素B1平均含量明显高于B组和C组,B组与C组无显著性差别,C组鸡蛋的营养价值 稍高于A组。
[0074]实施例2:
[0075]取山地地区(河北省保定市易县)散养的鸡产下的鸡蛋10枚,称为"A组",同时与上 述相同的时间里,从北京沃尔玛超市购得的普通鸡蛋10枚,称为"D组",从集贸市场购得鸡 蛋10枚,称为"E组"。
[0076]从鸡蛋外观、色泽观察,可以发现A组鸡蛋比较小,一般不足50g,大部分为皮为白 色,D组鸡蛋比较大,一般大于50g,大部分为鸡蛋皮为红棕色;E组鸡蛋在外观上与D组基本 相同。打开到容器中,A组的颜色特别是鸡蛋黄的颜色较其他两组明显要黄,其他两组的蛋 黄颜色没有区别。
[0077]将上述样品按照实验例中1.2-1.5的方法进行样品前处理、色谱分析、质谱分析和 数据分析,结果如下:
[0078]A组中的维生素B1的含量为3.524ppm,D组鸡蛋维生素B1的含量为1.061ppm;A组明 显高于D组,E组鸡蛋维生素B1的含量为0.953ppm,A组品质最高,D组与E组区别不大,较A组 明显低。
[0079]通过上述实施例可以看出,通过外观判断鸡蛋的营养价值是不可靠的。本发明的 物质和方法可以用于评估鸡蛋的营养价值,并且简单,迅速,准确,而且可以进行定量。
【主权项】
1. 一种评估鸡蛋营养价值的方法,其特征在于,检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维 生素B1含量高低。2. 如权利要求1所述评估鸡蛋营养价值的方法,该方法是通过超高效液相色谱分离系 统(UPLC)与Q-TOF型质谱仪(Q-TOFMS/MS)的联用技术对鸡蛋进行检测。3. -种评估鸡蛋营养价值的方法,其特征在于,通过超高效液相色谱分离系统(UPLC) 与Q-TOF型质谱仪(Q-TOFMS/MS)的联用技术在如下条件下对鸡蛋进行检测: 所述超高效液相色谱测定条件为:色谱柱为WatersAcquityUPLCBEHC18柱;流动 相:A相为甲醇,B相为0.05 %甲酸水-5mM醋酸铵溶液,梯度洗脱,梯度洗脱的方案如下:0_ 0.1min:0%B-0.0%B;0.1-3.0min:0.0%B-0.0%B;3.0-15.0min:0.0%B-100.0%B; 15.0-23.0min:100.0%B-100.0%B;23.0-23.1min: 100.0 %B-0.0%B; 23.1-26.0 min:0.0%B-0.0%B; 所述Q-TOF型MS/MS测定采用正离子检测模式,ESI离子源;检测到质谱离子特征峰m/z265.1118,其保留时间为tR=1.6min;二级碎片离子峰为:m/z122.0713 和m/z144.0478。4. 维生素B1在评估鸡蛋营养价值中的应用。5. 如权利要求4所述的应用,其中所述应用是通过检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者 维生素B1含量高低来实现的。6. 如权利要求4或5所述的应用,其中通过超高效液相色谱分离系统(UPLC)与Q-T0F型 质谱仪(Q-TOFMS/MS)的联用技术检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维生素B1含量高低。7. -种评估鸡蛋营养价值的物质,其特征在于,所述物质为维生素B1。8. -种评估鸡蛋营养价值的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有能够鉴定或定量维 生素B1的试剂。
【专利摘要】本发明提供一种评估鸡蛋营养价值的方法,检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维生素B1含量高低。该方法是通过超高效液相色谱分离系统(UPLC)与Q-TOF型质谱仪联用技术对鸡蛋进行检测。本发明还提供了维生素B1在评估鸡蛋营养价值中的应用;所述应用是通过检测鸡蛋中是否含有维生素B1或者维生素B1含量高低来实现的。一种评估鸡蛋营养价值的物质,所述物质为维生素B1。进一步地,本发明还提供一种评估鸡蛋营养价值的试剂盒,所述试剂盒含有能够鉴定或定量维生素B1的试剂。该方法简单,迅速,准确,而且可以进行定量。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105424861
【申请号】CN201510944031
【发明人】田亚平, 贾静辉, 陈洋, 侯东军, 刘勇军, 王亚姗, 刘洪斌, 王海
【申请人】中国动物疫病预防控制中心
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月16日