罗非鱼耐高温性能评价技术指标的筛选方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于罗非鱼检测评价技术领域，尤其涉及一种罗非鱼耐高温性能评价技术 指标的筛选方法。
【背景技术】
[0002] 在全世界的热带、亚热带地区，罗非鱼已有几十年的养殖历史，可谓历史悠久。目 前中国已经成为世界上的罗非鱼生产大国，养殖年产量居世界第一。除了西藏和青海等高 原地区外，罗非鱼在我国30多个省市广泛养殖。
[0003] 罗非鱼作为一种变温水生动物，生长环境对其生长起着决定性的作用，其中水温 是影响罗非鱼摄食和生长的最重要环境因子之一。罗非鱼的生长性能一直以来都备受关 注。一股认为罗非鱼是热带鱼类，耐高温能力较强，温度越高对罗非鱼的生长和摄食越有 利。然而，实际生产过程中发现，水温过高对罗非鱼的生长有着较明显的负面影响，在高温 阶段罗非鱼的生长是受水温限制的。研究表明温度会影响鱼类的消化酶活性，在合适的温 度范围内，体内的消化酶活力随着温度的升高而活性增强，生长速率也随之加快，但超过某 一温度值，机体代谢会发生紊乱，生长速度变慢，鱼体内源性营养缺乏，存活率下降。而持续 性的高温应激使得鱼体的免疫力低下，对致病性链球菌的敏感性增强，抗病力下降。
【发明内容】
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[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种罗非鱼耐高温性能评价技术指标的筛选方 法，为评价罗非鱼的耐高温性能及指导夏季高温养殖提供理论依据。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：罗非鱼耐高温性能评价技术指 标的筛选方法，包括以下步骤：
[0006] (1)选取规格体重约50±2g的吉富罗非鱼120尾，随机分为两组，即胁迫组和空白 组，每组60尾，每组做三个平行，每个平行20尾罗非鱼，转移到六排可控温循环水族箱内饲 养，在28°C下暂养两天;暂养两天后，以28°C为起始温度，以0.5°C/h的升温速率加温，终点 温度设定为37.7°C;
[0007] (2)分别在高温胁迫试验他、1211、2411、481 1、7(1后，胁迫组和空白组每个平行各随机 选取3尾吉富罗非鱼，在冰盘上处死罗非鱼，将罗非鱼的肝脏组织取出并称重，按重量(g): 体积(ml ) = 1:9的比例加入9倍体积预冷的PBS(pH 7.4)，在冰水浴条件下，机械勾楽;，制备 10%的肝脏组织匀浆，4°C下3500rpm冷冻离心20min，取上清液用于测定罗非鱼肝脏的理化 指标；
[0008] (3)实验数据进行统计分析，若出胁迫组与空白组相比理化指标差异显著，则该理 化指标选定为罗非鱼耐高温性能评价技术指标。
[0009] 罗非鱼肝脏的理化指标包括肝脏丙二醛含量、谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物 酶活力、T-S0D、总抗氧化力。
[0010]统计分析中，实验数据用平均值土标准差(means土S.D.)表示，进行单因素方差分 析及Duncan多重比较。
[0011] 理化指标差异显著的判断规则是P<〇.05为差异显著，P<0.01为差异极显著，P> 0.05为差异不显著。
[0012] 针对目前罗非鱼养殖中对水温影响的疑惑，发明人设计了高温胁迫实验模式，研 究了罗非鱼在高温胁迫实验模式中生长性能、肠道消化酶活力、肝脏抗氧化力以及机体免 疫力等的变化，据此建立了一种罗非鱼耐高温性能评价技术指标的筛选方法，该法通过测 定高温胁迫下罗非鱼肝脏的一股理化指标，探究了高温应激对罗非鱼的影响，为评价罗非 鱼的耐高温性能及指导夏季高温养殖提供了有力的理论依据。
【附图说明】
[0013] 图1是不同高温胁迫时间下吉富罗非鱼T-S0D活力的变化图。
[0014] 图2是不同高温胁迫时间下吉富罗非鱼丙二醛含量的变化图。
[0015] 图3是不同高温胁迫时间下吉富罗非鱼谷胱甘肽含量的变化图。
[0016] 图4是不同高温胁迫时间下吉富罗非鱼谷胱甘肽过氧化物酶活力的变化图。
[0017] 图5是不同高温胁迫时间下吉富罗非鱼总抗氧化力的变化图。
【具体实施方式】
[0018] -、分析方法
[0019] (1)选取规格体重约50±2g的吉富罗非鱼120尾，随机分为两组，即胁迫组和空白 组，每组60尾，每组做三个平行，每个平行20尾罗非鱼，转移到六排可控温循环水族箱内饲 养，在28°C下暂养两天;暂养两天后，以28°C为起始温度，以0.5°C/h的升温速率加温，终点 温度设定为37.7°C;
[0020] (2)分别在高温胁迫试验他、1211、2411、481 1、7(1后，胁迫组和空白组每个平行各随机 选取3尾吉富罗非鱼，在冰盘上处死罗非鱼，将罗非鱼的肝脏组织取出并称重，按重量(g): 体积(ml ) = 1:9的比例加入9倍体积预冷的PBS(pH 7.4)，在冰水浴条件下，机械勾楽;，制备 10%的肝脏组织匀浆，4°C下3500rpm冷冻离心20min，取上清液用于测定罗非鱼肝脏的理化 指标(肝脏丙二醛含量、谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶活力、T-S0D、总抗氧化力）；
[0021] (3)实验数据用SPSS17.0统计软件进行统计分析，实验数据用平均值±标准差 (means土S.D.)表示，进行单因素方差分析及Duncan多重比较;若出胁迫组与空白组相比理 化指标差异显著，则该理化指标选定为罗非鱼耐高温性能评价技术指标;判断规则是P< 0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著，P>0.05为差异不显著。
[0022]二、实验结果
[0023] 〈a〉高温胁迫时间对吉富罗非鱼肝脏抗氧化力的影响(表1)
[0024]表1不同高温胁迫时间下吉富罗非鱼抗氧化力比较 [0025]
[0026] 〈 b〉肝脏T-S0D活力测定结果（图1)
[0027] 如图1所示，在37.7°C的高温应激下，升温过程及胁迫的前12h，吉富罗非鱼的肝脏 总超氧化物歧化酶的活力与常温对照组相比没有显著差别(P>〇.05)。在胁迫12h-24h时间 段，吉富罗非鱼的肝脏总超氧化物歧化酶的活力随着胁迫时间的增加而明显上升。胁迫组 (24h)T-S0D活力与常温对照组相比差异极显著(P<0.01)。在胁迫时间达到24h后，总超氧 化物歧化酶的活力开始出现短时下降。48h时总超氧化物歧化酶的活力由24h的106 · 86 土 17 · 91U/mgprot降低至71 · 38± 12 · 0