一种高性价比的人血液免疫球蛋白g检测试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及的是生物技术领域，具体涉及的是一种胶乳免疫比浊法人血液免疫球 蛋白G检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 免疫球蛋白G(简称IGG)是血清中免疫球蛋白主成分，约占血清中免疫球蛋白总含 量的75%，正常值为9.5~12.5g/L。分子量约为150000道尔顿。
[0003] 当患变态反应性疾病、自身免疫性疾病、各种感染以及多发性骨髓瘤等时，免疫球 蛋白可异常增高。患获得性免疫缺陷综合征等免疫缺损病时，免疫球蛋白可异常降低。
[0004] 目前市场上最常见的贝克曼库尔特(下文简称BC)的免疫球蛋白G检测试剂盒(免 疫比浊法），国食药监械(进）字2012第2401557号，抗体为IGG抗体(经过处理的山羊血清）， 其产品性能如下:线性范围2.0~36. Og/L，抗原过剩范围达到216. Og/L。BC在该项目检测中 占据市场绝对主流，超半数三甲医院采用其产品。绝大多数国产试剂虽然价格便宜，但因技 术水平等多种原因试剂性能均无法与BC抗衡，多数试剂说明书并未标注抗原过剩范围，目 前无国产试剂抗原过剩范围能超越l〇〇g/L。虽然BC的免疫球蛋白G检测试剂非常昂贵，但医 院为了保证临床可靠性，不得不采用其试剂。市面急需性价比优秀的替代产品。
【发明内容】
[0005] 为了改善上述存在问题，本发明提供了一种高性价比的人血液免疫球蛋白G检测 试剂盒。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下： 一种高性价比的人血液免疫球蛋白G检测试剂盒，包括试剂2，所述试剂2为标记有兔抗 人免疫球蛋白G多克隆抗体的胶乳颗粒溶液。其中，试剂1可选用常规的磷酸盐缓冲液、 Good ' s缓冲液或甘氨酸缓冲液等。
[0007] 值得说明的是，本发明是针对试剂盒中的试剂2进行改进，然而试剂1选用市面上 的常用试剂均可。
[0008] 由于过低的抗体使用量，在满足样本抗体比例不变的情况下，需要样本稀释比例 提高，导致过低的样本量，试剂灵敏度无法满足临床使用。抗体量过大，在标记过程中容易 导致胶乳凝聚，试剂批间差异难以控制，并且试剂成本过高，无法接受。胶乳粒径过小，试剂 灵敏度无法保证，胶乳粒径过大，胶乳微球颗粒悬浮受到影响，容易沉降，故而，本发明的胶 乳颗粒粒径范围为40nm~120nm，每升试剂2中抗体的用量为20ml~30ml 〇
[0009] 具体地，本发明是采用化学偶联方法将兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体标记在胶 乳颗粒上。
[0010]作为一种优选，所述试剂盒对样本进行检测时，样本与抗体的重量比为1:48~1: 32。通过上述限定，能够避免样本与抗体比例过高或过低，因为样本与抗体比例过高，将导 致反应体系中抗原过多，降低试剂的抗原过剩范围甚至线性范围;过低时，将导致反应体系 中抗原量太少，试剂灵敏度无法满足临床使用。
[0011] 所述试剂盒是基于胶乳免疫比浊法检测人血液免疫球蛋白G，其线性范围为2g/L ~60g/L，抗原过剩范围达到400g/L。
[0012] 具体地，所述兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体为Dako公司生产的兔抗人免疫球蛋 白G多克隆抗体，或为深圳菲鹏生物生产的兔抗人免疫球蛋白G多克隆抗体。
[0013] 另外，所述试剂盒适用于具有自动样本稀释功能的全自动分析仪器，如迪瑞、迈 瑞、Roche、Hitachi、01ympus等多种全自动生化分析仪，以及多种特定蛋白分析仪，如国赛 特定蛋白分析仪，贝克800特定蛋白分析系统等。
[0014] 本发明具有以下优点及有益效果： 1、使用本发明的试剂盒对人血液中的免疫球蛋白G进行测定，因线性范围较进口试剂 提高67%，使用时大幅度减少了需要人工稀释复测的样本数量，大幅度节约了人力和试剂， 极大地提高了检测效率，并节约了成本。
[0015] 2、本发明的试剂盒抗原过剩范围广，相比BC试剂提高85%，能够在该性能上超越市 场最主流的BC试剂，相比BC试剂更能够有效避免临床结果被低估甚至假阴性结果的出现， 满足临床使用的需求。
[0016] 3、本发明的试剂盒采用成熟的化学偶联胶乳标记方法，能够规模化生产，且能够 配套市面上绝大多数自动化分析仪器使用，便于推广使用。
[0017] 4、采用本发明的试剂盒进行检测人血液免疫球蛋白G，可替代进口试剂，节约病患 开支。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明-实施例1的线性稀释图。
[0019]图2为本发明-实施例2的线性稀释图。
[0020]图3为本发明-实施例3的线性稀释图。
[0021]图4为本发明-实施例4的线性稀释图。
[0022]图5为本发明-实施例5的线性稀释图。
[0023]图6为本发明-实施例6的线性稀释图。
[0024]图7为本发明-实施例7的线性稀释图。
[0025]图8为本发明-实施例8的线性稀释图。
[0026]图9为本发明-实施例9的线性稀释图。
[0027]图10为本发明-实施例10的线性稀释图。
[0028]图11为本发明-实施例11的线性稀释图。
【具体实施方式】
[0029] 下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于下列实施 例。
[0030] 免疫检测(包括免疫比浊和胶乳免疫比浊）需要遵循海登博格原理，可见百度百科 抗原抗体反应原理，抗原抗体的比例在检测过程中尤为重要，反应体系中抗体浓度一定时， 随着抗原浓度的增加，抗原抗体复合物沉淀增加，逐渐达到平衡，当抗原浓度过高时，将出 现沉淀解聚甚至不产生沉淀的情况，即HOOK效应或抗原过剩现象(Antigen excess)，在免 疫检测系统中，该现象将导致被测物浓度被低估甚至假阴性结果出现。所有的免疫检测，包 括免疫比浊和胶乳免疫比浊，都必须避免高浓度样本出现HOOK效应。比如检测免疫球蛋白G 就需要避免变态反应性疾病、自身免疫性疾病、各种感染以及多发性骨髓瘤的病患出现测 定值被低估甚至假阴性结果。在样本与试剂2比例一定的情况下，试剂2中抗体的使用量以 及效价对于试剂抵抗HOOK效应的能力（即抗原过剩范围）至关重要。在免疫诊断技术领域， 兔多克隆抗体在免疫诊断中尤其是免疫比浊和胶乳免疫比浊中，因其具有其他种属抗体所 不具备的非常高的效价(titre)，是提高检测试剂线性及抗原过剩范围较为理想的选择。
[0031] 免疫比浊法测定IGG时，样本中的IGG与抗IGG抗体反应，形成抗原抗体复合物，在 检测试剂的线性范围与抗原过剩范围一定的情况下，因抗原抗体比例性关系，加入样本的 多少直接决定了检测试剂中抗IGG抗体的使用量。虽然减少样本加入量可以成比例的减少 检测试剂中抗IGG抗体的使用量，从而降低检测试剂成本，但是，降低样本量将同时成比例 的降低检测试剂的灵敏度。
[0032] 胶乳免疫比浊法可以大幅度提高检测试剂灵敏度，将免疫比浊法的极限检测灵敏 度从5mg/L提升到5yg/L，发明人在人血液IGG检测中，采用胶乳免疫比浊法能够有效抵消降 低样本量带来的检测试剂灵敏度降低影响;而市面上绝大多数全自动分析仪器都有样本自 动预稀释功能，如迪瑞、迈瑞、Roche、Hitachi、Olympus等全自动生化分析仪以及多种特定 蛋白分析仪，如国赛特定蛋白分析仪，贝克曼I_age 800特定蛋白分析系统等，可以由仪器 预先稀释样本再加入到反应体系中。发明人研究发现，通过调节样本自动稀释比例，能够在 大幅度降低IGG抗体使用量的同时，保证试剂的线性和抗原过剩范围，达到甚至超过BC的试 剂性能。故而本发明的发明人研究出了如下试剂盒。
[0033] 实施例1 本实施例的胶乳颗粒粒径为90nm，每升试剂2标记25ml丹麦Dako公司生产的兔抗人免 疫球蛋白G多克隆抗体(货号:Q0331)，使用胶乳免疫比浊中最常规的磷酸盐缓冲液作为试 剂1，采用自动分析仪最常见参数试剂1:试剂2比例180μ1:60μ1，样本预先稀释80倍后加入3 μL稀释过的样本到反应体系中（即样本与抗体比例为1:40)。
[0034]使用Hitachi7170全自动生化分析仪，波长为600nm单波长，两点终点法18-34读点 计算，数据如下：
具体如图1所示，图中方程为线性回归方程，R2为线性系数，估计值根据稀释比例带入 回归方程计算，R> 0.99，估计值和实测值偏差&