一种仁果类水果中544种农药残留lc-q-tof/ms侦测技术的制作方法
【专利摘要】本发明建立了一种仁果类水果中544种农药残留LC?Q?TOF/MS侦测技术。LC?Q?TOF/MS在TOF/MS模式下，分别测定每种农药标准物在指定色谱质谱条件下的保留时间，确定该化合物ESI源下的离子化形式及化学式，得到每种化合物母离子的精确质量数，形成TOF/MS数据库。在Q?TOF/MS模式下，分别采集每种农药标准物在3?5个不同碰撞能量下的碎片离子质谱图，并将采集信息导入PCDL软件，形成Q?TOF/MS数据库。通过比较仁果类水果样品中保留时间、一级质谱和二级质谱信息，确定样品中是否含有农药残留，并对一级得分较高的化合物进行二级确证，如果二级得分较高，即确认检出相关农药残留。本发明具有快速、高通量、高精度和高可靠性等优势，能够对仁果类水果中农药进行准确筛查。
【专利说明】
-种仁果类水果中544种农药残留LC-Q-TOF/MS侦测技术
技术领域
[0001] 本发明设及食品卫生、农产品安全检测领域，特别设及一种用于仁果类水果中544 种农药残留的侦测方法。
【背景技术】
[0002] 早在1976年世界卫生组织(WHO)、粮农组织(FA0)和联合国环境规划署(UNEP)共同 建立了全球环境检测系统/食品项目（Global Environment Monitoring System,GEMS/ 化od)，旨在掌握会员国食品污染状况，了解食品污染物摄入量，保护人体健康，促进贸易发 展。现在，世界各国都把食品安全提升到国家安全的战略地位。农药残留限量是食品安全标 准之一，也是国际贸易准入口槛。同时，对农药残留的要求呈现出品种越来越多，限量越来 越严格的发展趋势，也就是国际贸易设立的农药残留限量口槛越来越高。现在欧盟已制定 了839种农药的162248项Μ化标准，美国制定了351种农药的39147项Μ化标准，日本制定了 579种农药的51600多项MRL标准，我国2014年发布了381种农药的3650项MRL标准。目前，国 际上普遍采用的一律标准限量为l〇yg/kg。因此，食品安全和国际贸易都呼唤高通量快速农 药残留检测技术，运无疑也给广大农药残留分析工作者提供了机遇和挑战。在目前的众多 农药残留分析技术中，色谱质谱联用技术是实现高通量多残留快速检测的最佳分析手段。
[0003] 目前农药残留分析多W气相色谱、液相色谱、气相色谱-质谱和液相色谱-质谱联 用技术为主。运些检测技术都首先需要农药标准品对照进行定性。例如，对100种农药的检 测就需要准备相应的100种农药标准品对照，而运100种之外的农药都会被漏检。在农兽药 残留实验室的实际工作中，绝大多数实验室都不会储备数百种农药标准品，其原因是农药 标准品不仅价格昂贵，而且有效期只有2、3年，需要重复投资。一般实验室常备农药标准品 只有几十种，其日常监测的农药品种也就只限于运几十种，由此造成食品安全监测漏桐。
【发明内容】
[0004] 本发明在评价了世界常用1000多种农药的质谱行为特征的基础上，创新性地建立 了 544种农药T0F/MS和Q-T0F/MS精确质量数据库;创新性地建立了 W高分辨精确质量数、同 位素分布及同位素丰度等化合物质谱信息为识别标准的，依据T0F/MS和Q-T0F/MS精确质量 数据库对544种农药进行侦测和确证的LC-Q-T0F/MS技术方法;创新性地开发了与之配套的 水果蔬菜中农药残留高通量样品制备技术。实现了只需要一次样品制备、一次进样检测，就 可W对水果蔬菜中500多种农药的快速侦测，并且可对侦测出的农药进行Q-T0F/MS数据库 确证，彻底改变了原有W化合物标准物为参比的定性模式，是一种不需要标准物对照，快 速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术。
[0005] -、本发明创新性在于：
[0006] 1、创新性地建立了544种农药精确质量可达到O.OOOlm/z的精确质量数据库，包括 T0F/MS数据库和Q-T0F/MS数据库。
[0007] 2、T0F/MS数据库包含544种农药的英文名称、化学分子式、保留时间、精确质量数、 同位素分布、同位素丰度w及母离子和碎片离子的全扫描质谱图信息，信息量大，准确全 面。
[0008] 3、Q-T0F/MS数据库中每种农药碎片离子的全扫描质谱图信息，是通过对八个不同 碰撞能量下全扫描质谱图优选，得到的离子信息丰富的四个不同碰撞能量下碎片离子全扫 描图。
[0009] 4、创新性地建立了 W高分辨精确质量数、同位素分布及同位素丰度等化合物质谱 信息为识别标准的，依据T0F/MS和Q-T0F/MS精确质量数据库对544种农药进行侦测和确证 的LC-Q-T0F/MS技术方法，彻底改变了原有W化合物标准物为参比的定性模式，是一种不需 要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术。
[0010] 5、本发明建立的残留侦测技术方法能够依据目标化合物的保留时间、精确质量 数、同位素分布W及同位素丰度等信息，通过与T0F/MS数据库中化合物的对应信息检索比 对，给出目标化合物的匹配度得分值。依据目标化合物的得分值，实现对农药的定性侦测。
[0011] 6、本发明建立的残留侦测技术方法能够依据目标化合物碎片离子的全扫描质谱 图信息，通过与Q-T0F/MS数据库中化合物碎片离子的全扫描质谱图信息检索比对，给出目 标化合物的匹配度得分值，实现对目标化合物的定性确证。相比传统的检测定性确证方法， 由于采用了全扫描质谱图信息比对，具有更高的定性准确度。
[0012] 7、开发了与残留侦测技术方法配套的农产品中农药残留高通量样品制备技术。实 现了只需要一次样品制备、两次进样检测，就可W对农产品中500多种农药的快速侦测和确 证。
[0013] 8、LC-Q-T0F/MS主要侦测技术指标：扫描范围50-1600m/z;测定的精确质量可达 0.0 OOlm/z;质量精度可控制在分子质量的lOppmW内；扫描速度在50-1600m/z范围为每秒4 次。LC-Q-T0F/MS主要侦测技术特点：样品一次制备，可在1小时内完成544种农药侦测、定性 与确证;80% W上农药确证点达到10个W上;在同时侦测的544种农药中，327种农药侦测灵 敏度低于一律标准10微克/千克，占比64.1%，基本满足各国农药残留ML水平筛查的要求。
[0014] 二、本发明采用的技术方案：
[0015] 1、建立精确质量数据库
[0016] 1.1 T0F/MS数据库的建立
[0017] 在T0F/MS模式下，分别测定每种农药标准物在指定色谱质谱条件下的保留时间， 确定该化合物ESI源下的离子化形式(+H，+NH4，+Na)及化学式，得到每种化合物母离子的精 确质量数，同位素峰分布和丰度比。将544种农药的名称、保留时间、分子式、精确质量数、同 位素峰分布和丰度比等信息导入到数据库CSV软件文件中，形成T0F/MS数据库。
[001引 1.2 Q-T0F/MS数据库的建立
[0019] 在Agilent Mass化nter数据采集界面依次输入T0F/MS数据库中544种农药的母离 子，在Q-T0F/MS模式下，对544种农药分别在8个碰撞能量下，进行碎片离子全扫描质谱图采 集。优选其中离子信息丰富的3-5个不同碰撞能量下碎片离子全扫描质谱图导入数据库软 件文件中，并与对应的农药信息相关联，建成Q-T0F/MS数据库。
[0020] 2、建立W高分辨精确质量数、同位素分布及同位素丰度等化合物信息为识别标准 的，544种农药LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术方法，技术步骤包括：
[0021] 2.1样品制备：仁果类水果样品经1%醋酸乙腊提取，Carbon/N此柱净化，乙腊+甲 苯(3+1，v/v)洗脱残留农药，经浓缩、溶解和过滤后制成待测样液；
[0022] 所述仁果类水果包括苹果、梨、批把和山植；
[0023] 2.2色谱质谱检测：采用配有反相色谱柱（Z0RBAXSB-C18columnof2.1mmX 100mm，3.5皿)的液相色谱分离待测样液中的农药，配有电喷雾离子源的LC-Q-T0F-MS检测；
[0024] 2.3 T0F/MS数据库定性侦测方法:在Agilent Mass化nter定性软件中调用已建立 的T0F/MS数据库，依据T0F/MS数据库对目标化合物定性检索，检索参数保留时间偏差限定 为± 0.5min，精确质量偏差限定为± lOppm，离子化形式选择+H，+NH4，+化模式，软件会依据 每种化合物保留时间、精确质量等要素的实测值与T0F/MS数据库中理论值的偏差，W及同 位素分布和同位素比例四个参数，通过科学地设定各个要素在匹配度得分计算中的权重 (其中精确质量数偏差的权重最高），给出检索匹配得分值，检索匹配得分值较高的化合物， 为疑似检出化合物，依据T0F/MS数据库定性侦测农产品中农药残留的方法准确度，达到 90%W 上；
[00巧]2.4 Q-T0F/MS数据库定性确证方法：在化rgeted MS/MS采集模式下，输入疑似检 出化合物的母离子，保留时间和最佳的碰撞能量，对待测样液再次检测，将检测质谱图与Q- T0F/MS数据库中化合物碎片离子的全扫描质谱图，在镜像对比条件下匹配，根据特征离子 分布与谱库是否一致，二级碎片精确质量数偏差和碎片离子的比例给出得分，其匹配得分 值较高，即确认检出该目标化合物。该确证方法采用全扫描质谱图匹配确证，使80% W上农 药确证点可W达到10个W上，比标准的4个确证点要求，具有更高的定性准确度。
[0026] Ξ、本发明的技术内容：
[0027] 本发明提供二种544种农药的精确质量数据库W及一种用于检测水果蔬菜中544 种农药残留侦测技术。
[002引1、本发明提供的二种精确质量数据库为T0F/MS数据库和Q-T0F/MS数据库。
[0029] 1.1 T0F/MS数据库技术内容包括:544种农药的化学式，精确质量数，保留时间W 及农药英文名称等信息。T0F/MS数据库中巧中化合物技术内容示例如下：
[0030]
[0032] 1.2 Q-T0F/MS数据库技术内容包括:544种农药在4个碰撞能量下的碎片离子信息 质谱图。
[0033] 2、本发明提供了一种水果蔬菜中544种农药LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术方法。侦 测和确证技术方法内容包括如下：
[0034] 2.1样品制备
[0035] 2.1.1仁果类水果样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记。
[0036] 2.1.2称取10旨仁果类水果样品（精确至0.01旨），于801^离屯、管中，加入40血1%醋 酸乙腊，用高速匀浆机1350化/min,匀浆提取Imin，加入Ig氯化钢，4g无水硫酸儀，振荡 5111；[]1，在420〇1'/111；[]1下离屯、5111；[]1，取上清液2〇1]1]^，在40"€水浴中旋转蒸发浓缩至约11]11^，待净 化。
[0037] 2.1.3在Ca;rbon/NH2柱中加入约2cm高无水硫酸钢。先用4mL乙腊+甲苯（3+1，v/v) 淋洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱 上，下接新鸡屯、瓶接收。再每次用2mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移 入S阳柱中。在柱上连接50mL胆液器，再用25mL乙腊+甲苯(3+l，v/v)洗脱农药，合并于鸡屯、 瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0038] 2.1.4将浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腊+0.1 %甲酸水(2+8，v/v)混匀，经 0.2μπι滤膜过滤后定容，得到待测样品溶液a。
[0039] 2.2 LC-Q-T0F/MS检测
[0040] 2.2.1液相色谱分离:待测样品溶液a通过配有反相色谱柱(Z0RBAX SB-C18column of2.1mmX 100mm，3.5皿)的液相色谱系统分离;流动相A为5mM的乙酸锭-0.1 %甲酸-水;流 动相B为乙腊;液相色谱梯度洗脱程序为：Omin: 1 % B，3min: 30 % B，6min: 40 % B，9min: 40 % B，15min: 60 % B，19min: 90 %B，23min: 90 % B，23. Olmin: 1 % B，后运行 4min;流速为 0.4mL/ min;柱溫:40°C ;进样量：lOyL。
[0041 ] 2.2.2质谱检测:4旨116111 653化(：-9-1'0。/]\15在电喷雾电离正离子模式化51+);毛 细管电压:4000V;干燥气溫度:325°C ;干燥气流量lOL/min，銷流气流速1 IL/min，銷流气溫 度为325°C;雾化气压力40psi，锥孔电压60V，碎裂电压140V。全扫描质核比范围为50- 1600m/z，并采用内标参比溶液对仪器质量精度进行实时校正。通过Agilent Mass化nter Workstation Software(version B.05.00)对质谱数据采集与处理。
[0042] 2.3 T0F/MS数据库定性侦测
[0043] 在Agilent Mass化nter定性软件中调用已建立的T0F/MS数据库，设置检索参数保 留时间偏差为± 0.5min，精确质量偏差为± lOppm，离子化形式选择+H，+畑4，+化模式;依据 T0F/MS数据库对上述采集的样品溶液质谱数据进行定性检索，通过软件计算出每种化合物 检索匹配得分值，检索匹配得分值>70的化合物，为疑似检出化合物。
[0044] 2.4 Q-T0F/MS数据库定性确证
[0045] 在化rgeted MS/MS采集模式下，输入疑似检出化合物的母离子，保留时间和最佳 的碰撞能量，对待测样品溶液a再次检测，将检测质谱图与Q-T0F/MS数据库中化合物碎片离 子的全扫描质谱图，在镜像对比条件下匹配确证。其匹配得分值>70,即确认检出该目标化 合物。
[0046] 本发明相比现有技术所具有的有益效果为：
[0047] 1、本发明W高分辨精确质量数、同位素分布及同位素丰度等化合物信息为识别标 准，建立的500多种农药侦测和确证技术方法，彻底改变了原有W化合物标准物为参比的定 性模式，是一种不需要标准物对照，快速、高通量、准确可靠的农药残留检测新技术；
[0048] 2、本发明在不需标准物对照的前提下，实现了500多种农药残留的定性侦测和确 证，可W大大节省购买标准物的成本，也更加环保、安全；
[0049] 3、本发明可在1小时内完成500多种农药侦测、定性与确证，与传统检测方法相比 较，可W提高工作效率数百倍；
[0050] 4、本发明能够做到对仁果类水果样品中500多种农药残留一次性提取净化，一次 进样检测，与传统检测方法相比较，可W节省检测成本、提高工作效率数百倍；
[0051] 5、本发明同时侦测的544种农药中，有327种农药侦测灵敏度低于10微克/千克，占 比64.1 %，基本满足各国农药残留ML水平筛查的要求；
[0052] 6、本发明在不需农药标准物对照的前提下，依据精确质量数据库对目标化合物的 定性和确证，使80% W上农药确证点达到10个W上，全部农药满足欧盟对化合物4个确证点 的要求，定性结果更加准确可靠；
[0053] 7、本发明可W测试的仁果类水果样品中农药包括W下物质中的一类或几类:有机 憐类农药，氨基甲酸醋类农药，苯并咪挫类农药，横酷脈类农药，烟碱类农药，除虫菊醋类农 药及其他类型的农药及代谢物；
[0054] 8、本发明建立的侦测技术指标：扫描范围50-1600m/z ;测定的精确质量可达 0.0 OOlm/z ;质量精度可控制在分子质量的lOppmW内；扫描速度在50-600m/z范围为每秒4 次；
[0055] 9、本发明提供的二种544种农药的精确质量数据库W及一种用于检测水果蔬菜中 544种农药残留侦测技术已经在7个农药残留分析实验室得到推广和应用，经过对30省市 500多个市售水果蔬菜样品的侦测验证，取得了重要的残留侦测数据。
【附图说明】
[0056] 图1苹果样品全扫描模式T0F得分图；
[0057] 图2苹果样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0058] 图3苹果样品中检出农药二级T0F/MS确证得分图；
[0059] 图4梨样品全扫描模式T0F得分图；
[0060] 图5梨样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0061 ]图6梨样品中检出农药二级T0F/MS确证得分图；
[0062] 图7山植样品全扫描模式T0F得分图；
[0063] 图8山植样品中疑似农药二级采集方法示例图；
[0064] 图9山植样品中检出农药二级T0F/MS确证得分图。
【具体实施方式】 [00化]实施例1
[0066] 仁果类水果（W苹果为例）中544种农药(见表1) LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术实施 实例，包括如下步骤：
[0067] 1、样品前处理技术的具体步骤：
[0068] 1.1苹果样品取可食部分切碎，混匀，密封，标明标记；
[00例 1.2称取lOg苹果样品（精确至O.Olg)，于80血离屯、管中，加入40血1 %醋酸乙腊，用 高速匀浆机1350化/min，匀浆提取Imin，加入Ig氯化钢，4g无水硫酸儀，振荡5min，在42001·/ min下离屯、5min，取上清液20mL，在40 °C水浴中旋转蒸发浓缩至约ImL，待净化。
[0070] 1.3在化rbon/NHs柱中加入约2cm高无水硫酸钢。先用4mL乙腊+甲苯（3+1，v/v)淋 洗SPE柱，并弃去流出液，当液面到达硫酸钢的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至SPE柱中， 下接新鸡屯、瓶接收。再每次用2mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗涂样液瓶Ξ次，并将洗涂液移入 SPE柱中。在柱上连接50mL胆液器，用25mL乙腊+甲苯(3+1，v/v)洗脱农药及相关化学品，合 并于鸡屯、瓶中，并在40°C水浴中旋转浓缩至约0.5mL。
[0071] 1.4将浓缩液置于氮气下吹干，加入2mL的乙腊+水(化8，v/v)混匀，经0.2皿滤膜过 滤后定容，得到待测样品溶液。
[0072] 2、LC-Q-T0F/MS 操作条件
[0073] 色谱条件:液相色谱流动相A为5mM的乙酸锭-0.1 %甲酸-水;流动相B为乙腊;梯度 洗脱程序为：0min:l%B，3min:30%B，6min:40%B，9min:40%B，15min:60%B，19min:90% B，23min: 90 % B，23. Olmin: 1 % B，后运行4min;流速为0.4mL/min;柱溫：40 °C ;进样量：lOyL。
[0074] 质谱条件:Agilent 6530LC-Q-T0F/MS质谱仪的毛细管电压:4000V;干燥气溫度： 325°C ;干燥气流量lOL/min，銷流气流速1 IL/min，銷流气溫度为325°C ;雾化气压力40psi， 锥孔电压60V，碎裂电压140V。全扫描质核比范围为50-1600m/z，并采用内标参比溶液对仪 器质量精度进行实时校正。通过Agilent MassHunter Workstation Software(version B. 05.00)对质谱检测结果采集与处理。
[0075] 3仁果类水果苹果为例)样品中农药残留侦测
[0076] 3.1在全扫描模式下测定样品溶液，将侦测结果与T0F数据库进行比对，得出1级 T0F得分，见图1。
[0077] 3.2对于得分满足要求的化合物，在软件中建立二级采集方法，详见图2。
[0078] 3.3在MS/MS模式下，重新运行样品溶液，获得样品碎片离子全扫描数据，将其与二 级质谱图库中碎片离子信息进行比对，得到二级QT0F得分，见图3。
[0079] 4某地区苹果样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果
[0080] 采集某地区市售苹果样品19个，应用LC-Q-T0F/MS技术进行544种农药残留侦测， LC-Q-T0F/MS技术检出8种农药残留，共计28频次，设及样品19个，具体结果见表2。
[0081 ] 表1 544种农药LC-Q-T0F/MS侦测参数表
[0082]
[0098] 实施例2
[0099] 仁果类水果m梨为例）中544种农药(见表1)LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术实施实 例。
[0100] 样品前处理步骤、LC-Q-T0F/MS操作条件均参照实施例1中的处理条件。
[0101] 仁果类水果梨为例)样品中农药残留侦测
[0102] 在全扫描模式下测定样品溶液，将侦测结果与T0F数据库进行比对，得出1级T0F得 分，见图4;对于得分满足要求的化合物，在软件中建立二级采集方法，详见图5;在MS/MS模 式下，重新运行样品溶液，获得样品碎片离子全扫描数据，将其与二级质谱图库中碎片离子 信息进行比对，得到二级QT0F得分，见图6。
[0103] 某地区梨样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果:采集某地区市售梨样品19个，应用LC-Q- T0F/MS技术进行544种农药残留侦测，LC-Q-T0F/MS技术检出11种农药残留，共计26频次，设 及样品19个，具体结果见表3。
[0104] 表3某地区梨样品中LC-Q-TOF/MS侦测结果
[0105]
[0106] 实施例3
[0107] 仁果类水果山植为例)样品中544种农药(见表1)LC-Q-T0F/MS侦测和确证技术 实施实例，包括如下步骤：
[0108] 样品前处理步骤、LC-Q-T0F/MS操作条件均参照实施例1中的处理条件。
[0109] 仁果类水果山植为例)样品中农药残留侦测
[0110] 在全扫描模式下测定样品溶液，将侦测结果与T0F数据库进行比对，得出1级T0F得 分，见图7;对于得分满足要求的化合物，在软件中建立二级采集方法，详见图8;在MS/MS模 式下，重新运行样品溶液，获得样品碎片离子全扫描数据，将其与二级质谱图库中碎片离子 信息进行比对，得到二级QT0F得分，见图9。
[0111] 某地区山植样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果:采集某地区市售山植样品8个，应用LC- Q-T0F/MS技术进行544种农药残留侦测，LC-Q-T0F/MS技术检出14种农药残留，共计32频次， 设及样品8个，具体结果见表4。
[0112] 表4某地区山植样品中LC-Q-T0F/MS侦测结果
[0113]
【主权项】
1. 一种用于检测仁果类水果中544种农药残留的侦测方法，其特征在于：通过建立544 种农药的TOF/MS数据库和Q-TOF/MS数据库，将目标化合物的色谱质谱信息与TOF/MS数据库 和Q-TOF/MS数据库的信息检索匹配，实现了无需标准物作对照，同时对农产品中500种以上 农药进行定性侦测与确证;所述的544种农药为表1中编号为1-544的农药。2. -种如权利要求1所述的TOF/MS数据库，其特征在于:通过以下方法构建数据库：在 TOF/MS模式下，分别测定每种农药标准物在指定色谱质谱条件下的保留时间，确定该化合 物ESI源下的离子化形式，选择+!1，+顯 4，+似，及化学式，得到每种化合物母离子的精确质量 数，同位素峰分布和丰度比，将544种农药的名称、保留时间、分子式、精确质量数、同位素峰 分布和丰度比信息导入到数据库CSV软件文件中，形成TOF/MS数据库。3. -种如权利要求1所述的Q-TOF/MS数据库，其特征在于:通过以下方法构建数据库： 在数据采集界面依次输入如权利要求2中所述TOF/MS数据库中544种农药的母离子，在Q-T0F/MS模式下，对544种农药分别在8个碰撞能量下，进行碎片离子全扫描质谱图采集，优选 其中离子信息丰富的3-5个不同碰撞能量下碎片离子全扫描质谱图导入数据库软件文件 中，并与对应的农药信息相关联，建成Q-TOF/MS数据库。4. 根据权利要求1所述的侦测技术方法，其特征在于:对于农药残留的侦测不需要农药 标准物作对照。5. 根据权利要求1所述的侦测方法，其特征在于，所述方法包括以下程序： (a) 样品制备：仁果类水果样品经醋酸乙腈匀浆提取，经脱水和离心、浓缩后，再经 Carbon/NH2柱净化，乙腈+甲苯洗脱残留农药，经浓缩、过滤后制成待测样液a; (b) 色谱质谱检测:采用配有反相色谱柱的液相色谱，在特定色谱条件下，分离待测样 液a中的农药;采用配有电喷雾离子源的LC-Q-TOF/MS-MS，在特定质谱条件下，检测农药残 留； (c) TOF/MS数据库筛查：在定性软件中调用已建立的如权利要求2所述的TOF/MS数据 库，依据TOF/MS数据库对质谱检测结果中目标化合物定性检索，检索参数保留时间偏差限 定为± 0.5min，精确质量偏差限定为± lOppm，离子化形式选择+H，+順4，+Na模式，依据每种 化合物各要素的实测值与TOF/MS数据库中理论值的偏差，给出检索匹配得分值，检索匹配 得分值> 70的化合物，为疑似检出化合物； (d) Q-T0F/MS数据库确证:在Targeted MS/MS采集模式下，输入疑似检出化合物的母离 子，保留时间和最佳的碰撞能量，对待测样液a再次检测，将检测谱图与如权利要求3所述的 Q-TOF/MS数据库中谱图，在镜像对比条件下匹配确证，其匹配得分值>70,即确认检出该目 标化合物。6. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于：步骤(a)中，所述仁果类水果包括苹 果、梨、枇杷和山楂。7. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于:步骤(a)中，所述Carbon/NH2柱净化步 骤如下：在Carbon/NH 2柱中加入无水硫酸钠，先用乙腈+甲苯混合液淋洗SPE柱，并弃去流出 液，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上，下接新鸡心瓶接收； 再乙腈+甲苯混合液洗涤样液瓶三次，并将洗涤液移入SPE柱中；再用乙腈+甲苯混合液洗脱 农药，合并洗脱液于鸡心瓶中。8. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于：步骤(a)中，所述经浓缩、过滤后制成 待测样液a是指权利要求7所得到的洗脱液，在40°C水浴中旋转浓缩，并将浓缩液置于氮气 下吹干，加入乙腈+甲酸水混匀，经滤膜过滤后定容，得到待测样品溶液a。9. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于：步骤(b)中，所述特定色谱条件是指： 液相色谱流动相A为5mM的乙酸铵-0.1 %甲酸-水;流动相B为乙腈;梯度洗脱程序为:Omin: l%B,3min：30%B,6min：40%B,9min：40%Ba5min；60%Ba9min：90%B,23min：90%B, 23.01min: 1%B，后运行4min;流速为0.4mL/min;柱温:40°C ;进样量：10yL。10. 根据权利要求5所述的侦测方法，其特征在于:步骤(b)中，所述特定质谱条件是指： Agilent 6530LC-Q-T0F/MS质谱仪的毛细管电压：4000V;干燥气温度：325°C ;干燥气流量 10L/min，鞘流气流速1 lL/min，鞘流气温度为325 °C ;雾化气压力40psi，锥孔电压60V，碎裂 电压140V，全扫描质核比范围为50-1600m/z，并采用内标参比溶液对仪器质量精度进行实 时校正，通过Agilent MassHunter Workstation Software对质谱检测结果采集与处理。
【文档编号】G01N30/02GK105823832SQ201510987796
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年12月28日
【发明人】庞国芳, 范春林, 曹亚飞, 常巧英
【申请人】中国检验检疫科学研究院