心外膜脂肪组织的生物标志物的制作方法

心外膜脂肪组织的生物标志物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了用于预测受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法，包括：(a)测定取自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的水平，其中所述生物标志物选自以下物质：(i)磷脂酰胆碱(PC)[16:1/16:1]，(ii)甘油二酯(DAG)[42:8]，(iii)磷脂酰乙醇胺?醚(PE?O)[32:5]，(iv)磷脂酰胆碱(PC)[18:0/22:5]，(v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]，(vi)磷脂酰甘油(PG)[20:3/20:3]，(vii)磷脂酰甘油(PG)[22:5/18:1]；(b)将所述样品中的所述生物标志物的水平与参考值比较；其中所述样品中的所述生物标志物的水平与所述参考值相比，指示了所述受试对象中EAT脂肪的水平。
【专利说明】
心外膜脂肪组织的生物标志物
技术领域
[0001] 本发明提供了可用于预测受试对象心外膜脂肪组织水平的多种脂质生物标志物 和生物标志物的组合。
【背景技术】
[0002] 内脏脂肪组织是预示心脏代谢性疾病的重要结构，相比一般脂肪堆积，引起的风 险更尚。
[0003] 有损代谢和危及生命程度的肥胖与脂肪堆积于内脏脂肪组织和器官的异位脂肪 沉积相关联(Graner et al · (2013)，98:1189-1197(Graner等人，2013年，第98卷，第1189-1197页）；Donahue and Abbott，（1987)，Lancet 2:1215(Donahue和Abbott，1987年，《柳叶 刀》第2卷，第 1215页）；Kalkhoff et al.(1983)，J Lab Clin Med 102:621-627(Kalkhoff 等人，1983年，《实验室与临床医学杂志》第102卷，第621-627页））。具体地讲，内脏脂肪含量 (VA)越高，发展动脉粥样硬化心血管疾病的可能性越高，这类疾病是由与内分泌和免疫系 统相互影响的复杂信号传导代谢功能介导的（Batra and Siegmund，（2012)，Dig Dis 30: 70-74(Batra和Siegmund，2012年，《消化性疾病》第30卷，第70-74页）；Fox et al. (2007)， Circulation 116:39-48(Fox等人，2007年，《循环》第 116卷，第39-48页））。
[0004] 内脏脂肪包括外形复杂的脂肪沉积，即肠系膜和心外膜脂肪组织，以及围绕其他 器官的外围脂肪库（Dulloo et al.(2010)，Int J 0bes(Lond)34 Suppl 2:Sl_S3(Dulloo 等人，2010年，伦敦《国际肥胖期刊》第34卷，增刊第2期，第S1-S3页））。这些内脏组织明显不 同的代谢差异以特殊的方式造就疾病病因。
[0005] 心外膜脂肪组织(EAT)是沉积在心脏周围的特殊形式的内脏脂肪。EAT出现在心脏 的表面，位于心肌和心外膜之间，并覆盖了心脏表面的一大部分。
[0006] EAT数量增加与冠状动脉疾病事件和主要的心脏不良事件相关联(Mahabadi et al.，2013，J Am Coll Cardiol.2013Apr 2;61(13):1388-95(Mahabadi等人，《美国心脏病 学会杂志》，2013年4月2日，第61卷第13期，第1388-1395页））。具体地讲，心外膜脂肪组织与 动脉粥样硬化、代谢综合征、空腹血糖受损、胰岛素抵抗、高血压和糖尿病密切相关。
[0007] 事实上，在健康方面，公众越来越关注儿童成长和儿童肥胖，其中EAT被认为是预 测代谢是否健康的重要指标。
[0008] 也有研究证实，银肩病患者与对照组相比，心外膜脂肪水平更高（Balci et al. (2013)，0ct 25，CED,12216)。
[0009] 心外膜脂肪组织可由多种成像技术测量，包括超声波心动描记术、计算机断层扫 描术(CT)和磁共振成像术(MRI)。然而，这些方法可能耗时较长、价格昂贵，因而不适宜常规 使用。
[0010]最近的应用已证明，将特定代谢物谱与体脂分布建立关联是可行的（Szymanska et al· (2012)0MICS 16:652-667(Szymanska等人，2012年，0MICS第 16卷，第652-667页）； Yamakado et al.(2012),Clinical Obesity 2:29_40(Yamakado等人，2012年，《临床肥胖 症》第2卷，第29-40页）），其中代谢物包括氨基酸和各种脂质种类(甘油三酯、甘油二酯、溶 血磷脂、鞘磷脂、神经酰胺）。但与心外膜脂肪相关的标志物尚未鉴别出来。
[0011] 因此，本发明的目的是提供既容易检测、又便于预测EAT的脂质生物标志物。利用 此类脂质生物标志物可识别需要降低EAT水平的受试对象，据此改变这类受试对象的生活 方式，从而促进其以健康的方式生活。

【发明内容】

[0012] 本发明研究了特定内脏脂肪库中的血浆脂质组，及其内部容纳的信息。鸟枪脂质 组学方法已被用于量化血浆脂质的分布，并评估与特定体脂沉积相关的复合代谢特征，尤 其注重心外膜脂肪组织(EAT)。
[0013] 因此，本发明一方面提供了一种用于预测受试对象中EAT水平的方法，包括：
[0014] (a)测定取自受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的水平，其中所述 生物标志物选自以下物质：
[0015] ⑴磷脂酰胆碱(PC)[16:1/16:1]
[0016] (ii)甘油二酯(DAG)[42:8]
[0017] (iii)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0)[32:5]
[0018] (iv)磷脂酰胆碱(PC) [ 18:0/22:5]
[0019] (v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]
[0020] (vi)磷脂酰甘油(PG) [20:3/20:3]
[0021] (vii)磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1]
[0022] (b)将样品中的生物标志物水平与参考值比较；
[0023] 其中样品中的生物标志物水平与参考值相比，指示了受试对象中EAT的水平。
[0024] 根据本发明，还提供了一种用于预测受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法， 包括：
[0025] (a)使用检测装置测定取自受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的水 平，其中所述生物标志物选自以下物质：
[0026] (i)磷脂酰胆碱(PC) [ 16:1/16:1 ]
[0027] (ii)甘油二酯（DAG)[42:8]
[0028] (iii)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0)[32:5]
[0029] (iv)磷脂酰胆碱(PC) [ 18:0/22:5]
[0030] (v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]
[0031 ] (vi)磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3]
[0032] (vii)磷脂酰甘油(PG)[22:5/18:1]
[0033] 然后根据样品中的生物标志物相对参考值的水平，预测受试对象中EAT的水平。 [0034]检测装置优选为质谱仪。
[0035] 优选的是，该方法包括测定取自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标 志物的水平，所述脂质生物标志物选自PC[ 16:1 /16:1 ]、DAG[42:8]和ΡΕ-0[ 32:5]。
[0036] 在一个实施方案中，该方法包括测定取自所述受试对象的样品中的两种或更多种 脂质生物标志物的水平，所述脂质生物标志物选自PC[ 16:1/16:1 ]、DAG[42:8]和PE-0[32: 5]〇
[0037] 在另一个实施方案中，该方法包括测定取自所述受试对象的样品中的PC[ 16 :1/ 16:1]、DAG[42:8]和 PE-0[32:5]每一种的水平。
[0038] 在一个实施方案中，测定了PC[ 16 :1/16 :1 ]的水平，取自受试对象的样品中的PC [16:1/16:1 ]水平相比参考样品降低，指示EAT水平较高。
[0039] 在另一个实施方案中，测定了DAG[42 : 8]的水平，取自受试对象的样品中的DAG [42:8 ]水平相比参考样品升高，指示EAT水平较高。
[0040] 在另一个实施方案中，测定了PE-0[32 :5]的水平，取自受试对象的样品中的ΡΕ-0 [32:5]水平相比参考样品升高，指示EAT水平较高。
[0041 ]在另一个实施方案中，测定了PC[ 18:0/22:5]的水平，取自受试对象的样品中的PC [18:0/22:5]水平相比参考样品升高，指示EAT水平较高。
[0042]在另一个实施方案中，测定了PI[18:0/16:1]的水平，取自受试对象的样品中的PI [18:0/16:1 ]水平相比参考样品升高，指示EAT水平较高。
[0043]在另一个实施方案中，测定了PG[20:3/20:3]的水平，取自受试对象的样品中的PG [20:3/20:3 ]水平相比参考样品升高，指示EAT水平较高。
[0044]在另一个实施方案中，测定了PG[22:5/18:1 ]的水平，取自受试对象的样品中的PG [22:5/18:1 ]水平相比参考样品升高，指示EAT水平较高。
[0045] 在另一个实施方案中，该方法包括测定取自受试对象的样品中的下列两种、三种、 四种、五种、六种或全部脂质生物标志物的水平:PC[16 :l/16:l]、DAG[42:8]、PE-0[32:5]、 PC[18:0/22:5]、PI[18:0/16:1]、PG[20:3/20:3]、PG[22:5/18:1]。
[0046] 在一个实施方案中，样品包括取自受试对象的血清或血浆。
[0047] 在另一个实施方案中，参考值以受试对象对照群体的生物标志物平均水平为基 础。
[0048] 在另一个实施方案中，采用脂质组学分析法测定生物标志物的水平。
[0049] 目前使用的大多数脂质组学分析平台以电喷雾电离(ESI)结合串联质谱(MS/MS) 为基础进行分析。基于ESI-MS的方法可分为两类，分类依据是在注入质谱仪之前，是否进行 液相色谱(LC)。
[0050] 液相色谱-质谱(LC-MS)或者HPLC-MS是一项把液相色谱(或HPLC)的物理分离能力 与质谱(MS)的质量分析能力结合起来的分析化学技术。
[0051] 将样品（如有机提取物)直接注入离子源的方法被统称为鸟枪脂质组学。
[0052]鸟枪脂质组学采用直接注入的办法，避免了因浓度变化、色谱异常和离子配对变 化带来的分析困难。
[0053]在另一个实施方案中，采用非靶向鸟枪脂质组学分析法测定生物标志物的水平。 [0054]鸟枪分析法用于快速定量地提供给定生物基质分子组成的快照。通常情况下，月旨 质从细胞、体液或组织中提取后被直接注入质谱仪，完全不必进行色谱预分离。超过1〇〇， 〇〇〇的质量分辨率与混合型Orbitrap仪器的亚ppm级质量精度相结合，使得能够从MS全谱图 和脂质种类各自的MS/MS谱图中识别出各脂质种类并加以量化。
[0055]这种方法与传统的三重四极杆质谱靶向分析相比，主要优点是可在不对分子组成 施加任何限制的情况下从多个脂质类别中非靶向、快速并可靠地识别出单独脂质种类并加 以量化。
[0056]在一个实施方案中，所述样品中生物标志物的水平与参考值相比，指示与EAT水平 升高相关联的患病风险，所述疾病例如心血管障碍或代谢障碍。
[0057]在另一个实施方案中，所述样品中生物标志物的水平与参考值相比，指示与EAT水 平升高相关联的患病风险，所述疾病例如动脉粥样硬化、冠心病、代谢综合征、空腹血糖受 损、胰岛素抵抗、高血压和糖尿病。
[0058]在另一个实施方案中，所述样品中生物标志物的水平与参考值相比，指示心血管 障碍或代谢障碍正在发展。
[0059] 在另一个实施方案中，所述样品中生物标志物的水平与参考值相比，指示动脉粥 样硬化、冠心病、代谢综合征、空腹血糖受损、胰岛素抵抗、高血压和糖尿病正在发展。
[0060] 在另一个实施方案中，所述样品中生物标志物的水平与参考值相比，指示健康受 试对象中的EAT水平降低，有失去心肌保护作用的风险;或指示含有过多EAT的不健康受试 对象有恢复心肌保护作用的可能。
[0061] 在本发明另一方面，提供了一种调节受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法， 包括:如果此前使用上述方法已确定受试对象具有指示EAT水平不健康的生物标志物水平， 则改变受试对象的生活方式，从而调节EAT水平。
[0062] 在又一方面，本发明提供了一种调节受试对象中EAT水平的方法，包括：
[0063] (a)采用上述方法测定生物标志物的水平，
[0064] (b)如果受试对象具有指示EAT水平不健康的生物标志物水平，则改变受试对象的 生活方式，从而调节EAT水平。
[0065] 在再一方面，本发明提供了一种选择改变受试对象的生活方式，从而调节所述受 试对象的心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法，该方法包括：
[0066] (a)采用上述方法测定生物标志物的水平，
[0067] (b)根据步骤(a)测定的生物标志物水平，选择生活方式的适当改变。
[0068] 优选的是，"调节EAT水平"包括减少EAT或防止EAT增多。
[0069] 在一个实施方案中，改变受试对象的生活方式包括改变饮食。改变饮食优选地包 括向所述受试对象施用至少一种营养产品，构成饮食的一部分，所述营养产品用于调节EAT 水平，例如促使EAT减少或防止EAT增多。
[0070] 例如，改变饮食可包括减少脂肪摄入和/或增加低脂食物摄入。
[0071 ]仅举例来说，低脂食物可包括全麦面粉和面包、燕麦粥、高纤维早餐谷类食物、全 粒大米和全麦面食、蔬菜和水果、干制豆类和扁豆、烤马铃薯、干果、核桃、白鱼、鲱鱼、鲭鱼、 沙丁鱼、腌鱼、皮尔彻德鱼、鲑鱼和瘦白肉。
[0072] 在一个实施方案中，该方法还包括在改变受试对象的生活方式之后，重复预测受 试对象中EAT水平的步骤。
[0073] 根据本发明的另一方面，提供了一种预测受试对象发展心血管障碍或代谢障碍的 风险的方法，包括：
[0074] (a)测定取自受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的水平，其中所述 生物标志物选自以下物质：
[0075] (i)磷脂酰胆碱(PC) [ 16:1/16:1 ]
[0076] (ii)甘油二酯（DAG)[42:8]
[0077] (iii)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0)[32:5]
[0078] (iv)磷脂酰胆碱(PC) [ 18:0/22:5]
[0079] (v)磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1]
[0080] (vi)磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3]
[0081] (vii)磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1]
[0082 ] (b)将样品中的生物标志物水平与参考值比较；
[0083] 其中样品中的生物标志物水平与参考值相比，指示发展代谢障碍或心血管障碍的 风险。
[0084] 在一个实施方案中，心血管障碍是动脉粥样硬化或冠心病。
[0085] 在另一个实施方案中，代谢障碍是空腹血糖受损、胰岛素抵抗或糖尿病。
【附图说明】
[0086] 图1是用于预测心外膜脂肪、胰岛素抵抗和内脏脂肪含量的相关变量的汇总。图 例:EF为心外膜脂肪;Η0ΜΑ为H0MA-IR; R2为内脏脂肪含量。表中列出了代谢物在预测心外膜 脂肪、内脏脂肪和H0MA-IR方面的重要性和稳健性(采用随机森林分析法评估）。11=10000之 后随机森林分析法产生的合并平均值的精度降低。
【具体实施方式】
[0087] 预测受试对象中EAT水平
[0088] 本发明一方面涉及预测受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法。在特定实施 方案中，该方法可用于诊断不健康的EAT水平、监测一段时间内EAT的水平，或识别有患上与 EAT相关疾病的风险的受试对象。
[0089] 例如，该方法可用于预测受试对象患有或染上与EAT相关疾病的可能性，或评估受 试对象当前的EAT水平。该方法也可用于评估干预方案促进调节(特别是降低)EAT水平的功 效。例如，本发明可用于监测改变生活方式或改变饮食的效果。
[0090] 与EAT水平升高相关联的典型疾病是本领域技术人员已知的，包括心血管障碍和 代谢障碍。
[0091] 与EAT相关联的典型障碍包括动脉粥样硬化、冠心病、代谢综合征、空腹血糖受损、 胰岛素抵抗、高血压和糖尿病。
[0092] 受试对象
[0093] 本发明的方法可应用于任何受试对象，包括非人类或人类受试对象。在一个实施 方案中，受试对象是哺乳动物，优选人。或者，受试对象可以是非人类的哺乳动物，包括例如 马、牛、羊或猪。在一个实施方案中，受试对象是伴侣动物如狗或猫。
[0094] 昼显
[0095] 本发明的方法包括测定取自受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的 水平这一步骤。因此，本发明的方法通常在人或动物的身体外部实施，例如，使用先前从待 检测受试对象取得的体液样品实施。样品优选地来源于血液，也就是说，样品包括全血或血 液的成分。最优选地，样品包含血浆或血清。
[0096]收集血液样品和分离血液成分的技术是本领域众所周知的。例如，可使用针从患 者采集静脉血液样品并收集入塑料管。收集管可(例如)包含喷涂的硅胶和聚合物凝胶，用 于分离血清。可在室温下以1300RCF离心分离血清10分钟，然后存放在小塑料管内，-80 °C保 存。 _7] 测定样品中脂质生物标志物的水平
[0098] 样品中单独脂质种类的水平可通过任何合适的方法测量或测定。例如，可使用质 谱法(MS)。可在替代实施方案中使用其他的光谱方法、色谱方法、标记技术或定量化学方 法。最优选的是，用质谱法(特别是鸟枪质谱法)测量样品中的脂质水平。通常使用同一种分 析方法测定样品中的脂质水平和参考值。
[0099] ||M
[0100] 本发明的方法包括测定脂质生物标志物的水平，所述脂质生物标志物选自磷脂酰 胆碱(PC)、甘油二酯(DAG)、磷脂酰乙醇胺-醚(ΡΕ-0)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰甘油(PG)。 [0101 ]所述方法包括测量至少一种生物标志物的水平。通过合并测量生物标志物，可用 脂质生物标志物更好地表征EAT。
[0102] 磷脂酰胆碱
[0103] 在一个实施方案中，测定了结构为PC[ 16:1/16:1 ]和/或PC[ 18:0/22: 5]的磷脂酰 胆碱(PC)的水平。在命名法(X:Y)中，X指分子中脂肪酸部分的碳原子总数，Y指分子中脂肪 酸部分的双键总数。命名法(XI :Υ1/Χ2:Υ2)指的是PC种类的第一（1)脂肪酸链和第二(2)月旨 肪酸链中的碳原子数(X)和双键数(Y)。因此，PC(18:0/22:5)的第一脂肪酸链包含18个碳原 子且不含双键，第二脂肪酸链包含22个碳原子和5个双键。
[0104] 甘油二酯
[0105] 在一个实施方案中，测定了结构为[42:8](使用上文定义的(X:Y)命名法）的甘油 二酯(DAG)的水平。
[0106] 磷脂酰乙醇胺-醚
[0107] 在一个实施方案中，测定了结构为[32:5](用上文定义的(Χ:Υ)命名法）的磷脂酰 乙醇胺-醚(PE-Ο)的水平。
[0108] 磷脂酰肌醇
[0109] 在一个实施方案中，测定了结构为[18:0/16:1](用上文定义的(Χ:Υ)命名法)的磷 脂酰肌醇(ΡΙ)的水平。
[0110] 磷脂酰甘油 在一个实施方案中，测定了结构为[20:3/20:3]和/或[22:5/18:1](用上文定义的 (Χ:Υ)命名法）的磷脂酰甘油(PG)的水平。
[0112] 生物标志物的组合
[0113] 虽然各种脂质生物标志物在本发明的方法中可具有预测值，但可通过合并多个脂 质生物标志物的值来提高本发明方法的质量和/或预测能力。
[0114] 因此，本发明的方法可包括测定至少两种上文定义的脂质生物标志物的水平。例 如，本发明的方法可包括测定上述2、3、4、5、6或7种脂质种类的水平。
[0115] 特别优选的是检测包括PC[16:l/16:l]、DAG[42 :8]和PE-0[32:5]的组合的方法。
[0116] 同对照比较
[0117] 本发明的方法还包括将试验样品中单独脂质种类的水平与一个或多个参考值或 对照值比较这一步骤。通常对于本发明方法所测定的每个单独的脂质种类使用一个特定的 参考值。参考值可以是某脂质种类的正常水平，例如，取自正常受试对象的同一类型样品 (如血清或血浆)的脂质水平。参考值可(例如)基于受试对象对照群体中某脂质种类的平均 值或中值水平，所述受试对象对照群体包含(例如）5、10、100、1000个或更多个正常受试对 象(可与试验受试对象的年龄和/或性别匹配或不匹配）。
[0118] 受试对象的脂质生物标志物水平与相应参考值的差异程度，也有助于确定哪类受 试对象将从特定干预方案受益最多。试验样品中脂质的水平与参考值相比，可增大或减小 (例如）至少1 %、至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少50%或至少100%。
[0119] 在某些实施方案中，参考值是先前从同一受试对象获得的值。这允许直接比较受 试对象当前生活方式与之前生活方式对与EAT相关联的脂质生物标志物水平的影响，所以 可直接评估多方面的改善。
[0120] 参考值可通过使用相应的方法测定试验样品（例如，一个或多个取自正常受试对 象的样品）中的脂质水平来测定。例如，在某些实施方案中，对照样品中的脂质水平可在与 试验样品平行的测定法中确定。或者，在某些实施方案中，特定类型样品（如血清或血浆）中 单独脂质种类的水平的参考值可能是现成的，例如可从已公布的研究数据获得。因此在某 些实施方案中，参考值可能已预先确定，或可计算得出或外推得到，不必通过对与每一个试 验样品相关的对照样品执行对应的测定来获得。
[0121] 将脂质水平与EAT关联
[0122] 通常情况下，试验样品中上述脂质种类的水平相比参考值增大或减小，可指示EAT 水平较高或较低。EAT的总体水平和/或与EAT相关联的疾病的风险可通过测定上述不同脂 质生物标志物的水平来评估。例如，受试对象可依据单独脂质种类的数量，按EAT水平预测 值被划分为低、中、高和/或非常高这些级别，其中单独脂质种类被相对于对照值和/或其升 高的程度进行调节。
[0123] 或者，受试对象可依据单独脂质种类的数量，按患上与EAT相关联疾病的风险被划 分为低、中、高和/或非常高这些组，其中单独脂质种类被相对于对照值和/或其升高的程度 进行调节。
[0124] 促进EAT保持健康水平的方法
[0125] 在一方面，本发明提供了一种调节受试对象中EAT水平的方法。该方法尤其可用于 降低受试对象患上EAT相关病症或疾病的风险，或延长受试对象的寿命。
[0126] 该方法的第一步为通过上述方法确定受试对象中EAT水平不健康的可能性。确定 受试对象中EAT水平不健康的可能性之后，可基于评估的风险水平，为受试对象选择适当的 干预策略(例如改变生活方式和/或饮食）。
[0127] 通常情况下，如果预测受试对象的EAT水平低，则可能不必要加以干预。例如，如果 受试对象的预测EAT水平等于或低于阈值水平，则可能不需要药物或营养治疗。阈值水平可 对应(例如)普通群体的正常或平均EAT水平。
[0128] 或者，如果预测受试对象的EAT水平高，该方法还可包括改变受试对象的生活方式 这一步骤。受试对象生活方式的改变可以是本文描述的任何变化，例如，饮食改变、运动量 增大、工作和/或生活环境改变，等等。
[0129] 优选地，所述改变是使用至少一种营养产品实现的，受试对象之前未摄入过该营 养产品或之前摄入该营养产品的量与当前不同，所述营养产品例如有影响EAT水平的效果 并且/或者有避免EAT相关障碍的效果(包括食物产品、饮品、宠物食物产品、食物补充剂、保 健营养品、食物添加剂或营养配方产品）。在特别优选的实施方案中，饮食改变包括脂肪摄 入水平降低。
[0130] 改变受试对象的生活方式还包括向受试对象指明其需要改变生活方式，例如，嘱 咐、督促和/或建议受试对象作出上述的生活方式改变。例如，该方法可包括向受试对象施 用或提供至少一种上述营养产品的步骤。
[0131] 选择的生活方式改变要能有效调节与EAT相关联的特定脂质种类的水平。一般情 况下，由于各种各样的因素比如遗传变异和环境因素，不同的生活方式改变(例如服用个人 营养产品）可能对受试对象个体的单独脂质种类的分布产生不同影响。
[0132] 生活方式的改变可为受试对象量身定制，从而将监测脂质水平与有针对性地调节 受试对象中单独脂质种类的特定方案结合起来。例如，该方法可包括进一步(重新)测定受 试对象中的脂质水平(也就是在最初的生活方式或饮食调节干预之后），以评估治疗方案的 效果。例如，如果受试对象在初步干预阶段之后显示EAT水平降低，则可继续干预，以保持这 种降低的趋势。
[0133] 然而，如果受试对象未能充分响应初始干预(例如，特定的脂质水平未出现明显变 化），则可为该受试对象选择替代方案，例如不同的生活方式改变、饮食或营养制剂。例如， 如果受试对象对最初的营养疗法响应不佳，则可向该受试对象施用替代的营养产品。可重 复该方法，包括选择不同剂量的各种制剂，直到EAT水平发生期望的改变为止。通常情况下， 可用特定的疗法(如上文定义的营养制剂)持续治疗受试对象至少一周、两周、一个月或三 个月，再重复测定脂质水平。该方法可用于监测生活方式改变(例如饮食、运动量、吸烟、饮 酒等方面的改变)对与EAT相关联的脂质水平的影响，还可用于识别可有效调节EAT水平的 因素组合。
[0134] 在另一方面，本发明提供了一种如上文所定义的营养制剂(例如，选自食物产品、 饮品、宠物食物产品、食物、保健营养品、食物添加剂或营养配方产品），该营养制剂用于调 节受试对象中EAT水平(或预防或治疗与EAT相关联的疾病），其中受试对象中不健康的EAT 水平已由上述方法预测。
[0135] 在另一方面，本发明涉及使用如上文所定义的营养制剂，来制造用于调节受试对 象中EAT水平(或预防或治疗与EAT相关联的疾病）的药物，其中受试对象中不健康的EAT水 平已由上述方法预测。
[0136] 试剂盒
[0137] 在另一方面，本发明提供了一种预测受试对象中EAT水平的试剂盒。该试剂盒可 (例如)包含一种或多种试剂、标准品和/或对照样品，以用于本文所述的方法。举例来说，在 一个实施方案中，该试剂盒包含一种或多种参考样品和试剂盒使用说明，所述参考样品包 含预定水平的（i)PC[16:l/16:l]、（ii)DAG[42:8]、（iii)PE-0[32:5]、（iv)PPC[18:0/22: 5]、（￥汗1[18 :0/16:1]、（￥1汗6[20:3/20:3]和/或(￥^汗6[22 :5/18:1]，使用说明指示了预 测受试对象中EAT的方法，即把参考样品的预定水平与取自受试对象的样品的脂质水平比 较。
[0138] 本领域技术人员将理解，在不脱离本文所公开的本发明范围的前提下，他们可以 自由地组合本文所述的本发明的所有特征。现在结合下列具体实施方案，仅以举例的方式 对本发明进行描述。
[0139] 实施例
[0140] 实施例1-材料和方法
[0141] 参与者和实验设计。
[0142] 在收到瑞士洛桑大学医学院(CHUV)适当伦理审查委员会的知情同意书之后，我们 观察研究了CHUV肥胖门诊的40名健康的肥胖白人妇女。参与者的BMI (身体质量指数)在28 至40之间，年龄在25岁至45岁之间，未表现代谢疾病特征。额外的排除标准是患有糖尿病、 怀孕、开始研究前一个月内接受过抗生素治疗、在访视日前一周的磨合期内接受过任何治 疗(避孕除外），以及进食障碍。在过去3个月内减重超过3公斤的受试对象也被排除。受试对 象都未患有下列疾病：高血压、葡萄糖耐受不良、多囊卵巢综合征、甲状腺功能不全和肾上 腺障碍。基线（V0)时，受试对象接受标准医疗访视，此时收集隔夜空腹血浆样品。一周后 (VI )，用CT(在CHUV)和iDXA(瑞士洛桑雀巢研究中心（Nestl^Research Center，Lausanne， Switzerland)代谢科室)检测身体组成，通过间接测热法测量了静息时能量消耗，并进行了 标准的口服葡萄糖耐量试验(〇GTT，75g葡萄糖）。一周后(V2)，收集隔夜空腹血浆和24小时 的尿样，对其进行代谢组学和脂质组学分析。
[0143] 化学物质和标准品
[0144] 乙醇、氯仿、异丙醇(HPLC级）购自Biosolve公司（荷兰范肯斯沃德(Valkenswaard, the Netherlands))。甲醇、水和醋酸铵购自默克公司（Merck)(德国达姆施塔特 (Darmstadt,Germany))。合成的脂质标准品购自Avanti Polar Lipids公司，纯度高于 99%。用甲醇制备单独脂质化合物的储备溶液，制好后在-20°C下储存。用异丙醇/甲醇/氯 仿的4:2:1 (体积比）溶液稀释储备溶液，制备所需浓度的工作溶液。
[0145] 临床测量、人体测量与身体组成测量
[0146] 这些参数按之前报道的方式测量(Martin et al. (2013))。简言之，临床测量和人 体测量(体重、身高、腰围、臀围）依据标准的临床操作规范进行。执行全身扫描，来确定腹部 脂肪分布和整个身体的组成。全身扫描采用GE Lunar iDXA系统（软件版本：enCORE 12.10.113版)执行，由设备自动确定扫描模式，使用之前报道过的程序(Martin et al. (2013))。
[0147] 使用64层螺旋CT扫描仪(VCT Lightspeed，美国密尔沃基通用电气医疗系统(GE Medical Systems，Milwaukee，USA))对腹部区域进行CT扫描，用测量结果来量化腹膜内脂 肪和皮下脂肪，如此前所述(Martin et al.(2013))。受试对象以仰卧位平躺，双臂举过头 顶，用垫子垫高双腿。在脊椎L4-L5位置单次扫描（10_)腹部，分析脂肪组织的横截面积，用 平方厘米表示。使用下列采集参数：120Kv，100至200mA，带Z轴剂量调制，视野500mm。使用标 准内核重建5mm层面厚度的轴向断层图像。该量化过程以Advantage Window工作站(通用电 气医疗系统(GE Medical Systems))为载体，采用市售的半交互式算法，分割皮下脂肪和腹 内脂肪。使用Deltatrak II(Datex Instruments公司），通过开路间接测热法测量静息代谢 率。
[0148] 进一步CT扫描心包内脂肪、心包外脂肪和纵隔脂肪，由40名受试对象中的28名产 生了高分辨率心脏脂肪沉积图像。
[0149] 鸟枪脂质组学分析
[0150]我们自行开发了一种全自动的高通量液/液萃取法，该方法利用汉密尔顿 Microlabstar机器人(瑞士博纳杜茨汉密尔顿公司（Hamilton，Bonaduz，Switzerland))，用 于脂质组学提取，是对之前的方法稍作修改得到的（之前的方法参见Matyash et al.， (2008)J Lipid Res 49:1137-1146(Matyash 等人，2008 年，《脂质研究杂志》第 49 卷，第 1137-1146页））。在3小时内提取了96份样品。简言之，用5yL血清来清理样品。使用700yL MTBE/Me0H(10/3)来提取脂质，该MTBE/MeOH溶液含有的内标为下列物质的混合物:5μΜ TAG 44:1、0.5μΜ DAG 24:0、5μΜ PC 28:0、1μΜ LPC 14:0、1μΜ ΡΕ 28:0、0.5μΜ LPE 14:0、1μΜ PS 28:0、0·5μΜ LPS 17:1、1μΜ PI 32:0、0·5μΜ LPI 17:1、0·5μΜ PA 28:0、0·5μΜ LPA 14: 0、1μΜ PG 28:0、0·5μΜ LPG 14:0、2μΜ SM 35:1、1μΜ Cer 32:1。4。(：下涡旋混合样品 1 小时， 然后添加150yL水，引起相分离。5，000g离心10分钟后，取500yL上层有机相转移到96孔深孔 板(德国汉堡艾本德公司（Eppendorf，Hamburg，Germany))内，用错箱密封好，-20°C保存，分 析时取出。MS分析之前，取10yL总脂质提取物，最后用90yL包含7.5mM醋酸铵的MS运行缓冲 液(异丙醇/甲醇/氯仿，体积比4:2:1)稀释。
[0151]基于之前发表的研究成果（Schuhmann et al ·，（2012)J Mass Spectrom 47:96-104(Schuhmann等人，2012年，《质谱杂志》第47卷，第96-104页）；Schuhmann et al · (2011) Anal Chem 83:5480-5487(Schuhmann等人，2011年，《分析化学》第83卷，第5480-5487页））， 自行开发了鸟枪脂质组学方法。采用连接到Nanomate纳升注入(nanoinfusion)离子源（英 国艾塞克斯哈洛镇Advion生物科学股份有限公司（Advion Bioscience Ltd,Harlow, Essex，UK))的LTQOrbitrapVelos质谱系统（瑞士赖纳赫赛默飞世尔科技公司（The;rmo Fisher Scientific，Reinach,Switzerland))进行分析。对于每份样品提取物，连续进样两 次，分别采用负离子化模式和正离子化模式分析。在DDA模式下采集质心高能碰撞解离 (HCD)负MS/MS。每个DDA周期包括一个MS全谱图，该谱图以100，000的目标分辨率R m/Z4〇o采 集，然后以30，000的分辨率Rm/Z4QQ采集20个Η⑶FT MS/MS谱图。一次DDA实验在25分钟内完 成。前体离子只有在其m/z与预先编制的包含列表的质量相匹配(精度为5ppm)的情况下，才 能被MS/MS检测到。在正离子化模式下，以100，000的目标分辨率R m/Z4QQ采集MS谱图，不再进 行MS/MS实验。激活锁定质量选项，使用LPA 17:0(m/z 424.492;负离子模式)和(118:1/17: 0Cer(m/z 551.528;正尚子模式)作为参考峰。
[0152]采用LipidXplorer，遵循Herzog及其同事开发的方案（Herzog et al · (2011)， Genome Biol 12:R8(Herzog等人，2011年，《基因组生物学》第12卷，第R8页））鉴定脂质种 类。然后导出数据，采用自行开发的软件工具进一步处理。该程序合并了数据集，通过将被 分析物前体离子的丰度与提取前加标的内标的丰度对比，生成了包含归一化值（内标与被 分析物的比值)和绝对浓度的Exce 1输出文件。
[0153]依据脂质图分类和命名系统(http://www. lipidmaps.org)，注释了脂质:PC，磷脂 酰胆碱;PC-0，磷脂酰胆碱-醚;LPC，溶血磷脂酰胆碱;PE，磷脂酰乙醇胺;ΡΕ-0，磷脂酰乙醇 胺-醚;LPE，溶血磷脂酰乙醇胺;PS，磷脂酰丝氨酸;LPS，血磷脂酰丝氨酸;PI，磷脂酰肌醇； LPI，溶血磷脂酰肌醇;PG，磷脂酰甘油;Cer，神经酰胺;SM，鞘磷脂;DAG，甘油二酯;TAG，甘油 三酯;PA，磷脂酸。通常，单独脂质种类注释如下：[脂质类别][碳原子总数]:[双键总数]。
[0154] 化学计量
[0155] 化学计量分析使用软件包SIMCA-P+(13.0版，瑞典乌默奥Umetrics AB公司 (Umetrics AB，U.melSweden))和自行开发的MATLAB程序(美国马萨诸塞州纳蒂克迈斯沃 克公司（1'116]\^11:11￥〇^8 111(3.，他1:;[01<:，]\^，1]3厶））进行。使用主成分分析（？〇厶）（￥〇1(13， Esbensen K,Geladi P(1987)Principal Component Analysis.Chemom Intell Lab Syst 2:37-52(Wold S、Esbensen K、Geladi P，1987年，"主成分分析"，《化学计量学和智能实验 室系统》第2卷，第37-52页））、潜结构投影（PLS)(Wold S，Hellberg S，Lundstedt T， Sjostrom M(1987)PLS Modeling with Latent Variables in Two or More Dimensions.PLS Meeting,Frankfurt(ffold S、Hellberg S、Lundstedt T、Sjostrom M， 1987年，"用潜在变量进行二维或更高维PLS建模"，法兰克福PLS会议））和潜结构正交投影 (〇-PLS)(Trygg J，Wold S(2003)J Chemom 17:53-64(Trygg J、Wold S，2003年，《化学计量 杂志》第17卷，第53-64页）），来研究心外膜和内脏脂肪与脂质组学分布之间的关系。使用7 倍交叉验证来评估模型的有效性（Cloarec et al.(2005),Anal Chem 77:517-526 (Cloarec等人，2005年，《分析化学》第77卷，第517-526页））。
[0156] 此外，通过随机森林算法分析脂类组学数据，利用了"随机森林(randomForest)" (RF?)软件包（Liaw et al.，2002，R News 3:18-22(Liaw等人，2002年，R News第3卷，第 18-22页））（设置500棵树，以=5的树分裂进行随机变量采样），并利用在RF?中实施的变量重要 性特征(精度/结点不纯度的平均降低量)来测定与内脏脂肪和心外膜脂肪的状态关联得更 好（由绝对值或体脂肪率评估)的变量。
[0157] 使用统计学计算软件环境R计算了Spearman自相关矩阵，并使用软件包Rgraphviz v. 1.32.0生成了相应的图形。还在R内执行了单变量显著性检验，来验证计量结果。
[0158] 实施例2
[0159] 研究了特定内脏脂肪库中的血浆脂质组，及其内部容纳的信息。具体地讲，基于磁 共振(MRI)和CT的现代成像技术可生成内脏脂肪库的准确区域特异性量化，包括EAT(Wang et al.(2009)J Clin Endocrinol Metab 94:662-669(Wang等人，2009年，《临床内分泌与 代谢杂志》第94卷，第662-669页））。在对健康的肥胖女性进行的同一同期群研究中，应用鸟 枪脂质组学方法来量化血浆脂质的分布，并评估与特定体脂沉积相关的复合代谢特征，尤 其注重VA、EAT和胰岛素抵抗。因此，本研究在内脏肥胖的外形如何与健康肥胖女性的血浆 脂质组建立不同关联方面，提供了补充性和全新的见解。
[0160] 心外膜脂肪测量值、临床参数与身体组成参数之间的关系
[0161]所述同期群的人体测量数据和临床数据记录在表1和表2中。初始的PCA和 spearman相关分析表明，心包内脂肪、纵隔脂肪和心外膜脂肪参数与下列诸项密切相关:其 他内脏脂肪估计值(例如，腹膜内脂肪（IPVF)的Logio值(r = 0.56，p = 0.002;r = 0.65，p〈 0.001；r = 0.66,p<0.001),VAT/SAT(r = 0.49,p = 0.008；r = 0.50,p = 0.006；r = 0.40,p = 0 · 031)，VAT/腹部脂肪总量的比值(r = 0 · 49，p = 0.008 ;r = 0 · 49，p = 0 · 006 ;r = 0 · 39，p = 0.037)，BMI(r = 0.45，p = 0.016;r = 0.54，p = 0.003;r = 0.60，p〈0.001)，腹部脂肪（r = 0·39，p = 0.040;r = 0·51，p = 0.005;r = 0.56，p = 0.002)，皮下脂肪(r = 0·62，p〈0·001 ;r = 0.70印〈0.001# = 0.71印〈0.001)，以及脂肪总量（『=0.44印=0.019# = 0.52印=0.004; r = 0.55，p = 0.002)，但与男性型/女性型脂肪不相关（图1)。此外，纵隔脂肪和心包内脂肪 与几个瘦体质参数相关联。类似于其他内脏脂肪估计值，心包内脂肪和纵隔脂肪与下列诸 项密切相关:ALAT(r = 0 · 38，p = 0 · 045 ;r = 0 · 42，p = 0 · 025)，ALAT/ASAT比值(r = 0 · 49，p = 0.007# = 0.56，？ = 0.002)，血液甘油三酯（1 = 0.48，？ = 0.009# = 0.45，？ = 0.016)。心外 膜脂肪主要与ALAT/ASAT比值相关联(r = 0.47，p = 0.011)，然而所有的心脏脂肪参数与GGT 密切相关(r = 0.54，ρ = 0· 039; r = 0.57，p = 0.001 ;r = 0.47，ρ = 0· 011)。有趣的是，相比其 他内脏脂肪估计值，在空腹或OGTT期间测得的心脏脂肪参数与葡萄糖和胰岛素参数并没有 统计相关性。比值Α和Β不依赖于大多数其他参数，只与BMI(r = 0.41，p = 0.028;r = 0.41，p =0.028)和心外膜脂肪(r = 0.42, p = 0.025; r = 0.42，p = 0.025)正相关，并与区域特异性 的骨量分布负相关(例如相对女性型骨量，r = -0.46，p = 0.015)。
[0162] 心外膜脂肪、内脏脂肪含量和H0MA-IR同特定的血浆脂质组成重构相关联
[0163] 使用经过验证的鸟枪脂质组学方法表示40名受试对象的血浆脂质组的特征，得到 14种不同类别脂质中的252种脂质种类的相对定量值。分析对象涵盖甘油三酯TG(n = 50)、 甘油二酯DAG(n = 18)、鞘磷脂SM(n = 24)、神经酰胺Cer(n = 17)、磷脂酰肌醇PI(n=12)、溶 血磷脂酰肌醇LPI(n = 2)、磷脂酰甘油PG(n = 6)、磷脂酰乙醇胺PE(n = 23)、磷脂酰乙醇胺-醚PE-0(n=15)、溶血磷脂酰乙醇胺 LPE(n = 4)、磷脂酰胆碱PC(n = 45)、磷脂酰胆碱-醚PC-0 (n = 29)、溶血磷脂酰胆碱LPC(n = 6)和磷脂酸PA(n = l)。
[0164] 通过0PLS分析法，使用1个预测分量和1个正交分量生成了三个模型，分别为内脏 脂肪模型(VAT/腹部脂肪的l〇g 1Q比值，的=0.16，的=0.87,0吟=0.59)、心外膜脂肪模型 (1^( = 0.32，1?2￥ = 0.81，02￥ = 0.59，图2)、!1〇嫩-1財莫型（1^( = 0.32，1?2￥ = 0.55,02￥ = 0.21)。
[0165] 使用Volcano绘图法，基于VIP和相关系数值，研究了影响变量。与此同时，使用在 RF?中实施的变量重要性特征，可测定与内脏脂肪、H0MA-IR和心外膜脂肪最佳关联的代谢 读出值。
[0166] EAT的代谢特征示于表3。此外，表3总结了以RF?指标为基础，就VA、EAT和H0A-IR而 言的各影响变量的相似性和差异性。
[0167] 最可判别的变量是PC[16:1/16:1]、DAG[42:8]、PE-0[32:5]。根据这些分析，我们 可以定义 PC[16:1/16:1]、DAG[42:8]、PE-0[32:5]、PC[18:0/22:5]、PI[18:0/16:1]、PG[20: 3/20:3]和PG[22:5/18:1]。
[0168] 表1:受试对象的描述性身体组成

[0170]^关键词：SAT =皮下脂肪组织，VAT=内脏脂肪组织。
[0171]表2:受试对象的描述性人体测量参数与临床参数
[0173]关键词：BMI =身体质量指数，HDL-C =高密度脂蛋白胆固醇，H0MA-IR =胰岛素抵 抗稳态模型评估法，LDL-C =低密度脂蛋白胆固醇，TG =甘油三酯，MAP =平均动脉血压， ALAT =丙氨酸转氨酶，ASAT =天冬氨酸转氨酶，GGT= γ-谷氨酰转肽酶，0GTT= 口服葡萄糖 耐量试验。
[0174] 表3代谢物在预测EAT、VAT和H0MA-IR方面的重要性和稳健性(采用随机森林分析 法评估）
[0177]图例:报告的数值与n = 10000之后随机森林分析法产生的合并平均值的精度降低 相对应。变量的重要性越高，合并平均值精度下降的值越大。
【主权项】
1. 用于预测受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法，包括： (a) 测定取自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的水平，其中所述 生物标志物选自以下物质： (i) 磷脂酰胆碱(PC)[16:1/16:1] (ii) 甘油二酯(DAG)[42:8] (i i i)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0) [ 32:5 ] (i v)磷脂酰胆碱(PC) [ 18:0/22:5 ] (v) 磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1] (vi) 磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3] (vii) 磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1] (b) 将所述样品中的所述生物标志物的水平与参考值比较； 其中所述样品中的所述生物标志物的水平与所述参考值相比，指示了所述受试对象中 EAT的水平。2. 根据权利要求1所述的方法，包括测定取自所述受试对象的所述样品中的一种或多 种脂质生物标志物的水平，所述生物标志物选自以下物质： (i) PC[16:l/16:l] (ii) DAG[42:8] (iii) PE-0[32:5]。3. 根据权利要求2所述的方法，包括测定取自所述受试对象的所述样品中的两种或更 多种脂质生物标志物的水平，所述生物标志物选自以下物质： (i) PC[16:l/16:l] (ii) DAG[42:8] (iii) PE-0[32:5]。4. 根据权利要求3所述的方法，包括测定取自所述受试对象的所述样品中的下列每一 种的水平： (i) PC[16:l/16:l] (ii) DAG[42:8] (iii) PE-0[32:5]。5. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中测定了 PC[16:1/16:1]的水平，并且取自 所述受试对象的所述样品中的PC[ 16:1/16:1 ]的水平相比所述参考样品降低，指示EAT水平 较高。6. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中测定了 DAG[42:8]的水平，并且取自所述 受试对象的所述样品中的DAG[42:8]的水平相比所述参考样品升高，指示EAT水平较高。7. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中测定了 PE-0[32:5]的水平，并且取自所 述受试对象的所述样品中的PE-〇[ 32:5]的水平相比所述参考样品升高，指示EAT水平较高。8. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中： 测定了PC[ 18:0/22:5]的水平，并且取自所述受试对象的所述样品中的PC[ 18:0/22:5] 的水平相比所述参考样品升高，指示EAT水平较高，和/或 测定了PC[ 20:3/20:3 ]的水平，并且取自所述受试对象的所述样品中的PC[ 20:3/20:3 ] 的水平相比所述参考样品升高，指示EAT水平较高，和/或 测定了 PG[22:5/18:1 ]的水平，并且取自所述受试对象的所述样品中的PG[22:5/18:1 ] 的水平相比所述参考样品升高，指示EAT水平较高，和/或 测定了 PG[22:5/18:1 ]的水平，并且取自所述受试对象的所述样品中的PG[22:5/18:1 ] 的水平相比所述参考样品升高，指示EAT水平较高。9. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述样品包括取自所述受试对象的血清 或血浆。10. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述参考值基于受试对象对照群体的 所述生物标志物的平均水平。11. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述生物标志物的水平是通过质谱法 测定的。12. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述生物标志物的水平是通过鸟枪脂 质组学方法测定的。13. 根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述样品中的所述生物标志物的水平 与所述参考值相比，指示发展心血管障碍或代谢障碍的风险。14. 根据权利要求13所述的方法，其中所述心血管障碍是冠状动脉疾病。15. 用于调节受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法，包括： 如果此前使用前述任一项权利要求所述的方法已确定所述受试对象具有指示EAT水平 不健康的所述生物标志物的水平，则改变所述受试对象的生活方式，从而调节EAT水平。16. 用于调节受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法，包括： (a) 执行权利要求1至14中任一项所述的方法；以及 (b) 如果所述受试对象具有指示EAT水平不健康的所述生物标志物的水平，则改变所述 受试对象的生活方式，从而调节EAT水平。17. 用于选择受试对象的生活方式的改变从而调节所述受试对象的心外膜脂肪组织 (EAT)水平的方法，所述方法包括： (a) 执行权利要求1至14中任一项所述的方法， (b) 根据步骤(a)测定的生物标志物水平，选择生活方式的适当改变。18. 根据权利要求15至17中任一项所述的方法，其中调节EAT水平包括降低EAT水平。19. 根据权利要求15至18中任一项所述的方法，其中所述受试对象的所述生活方式的 改变包括饮食改变。20. 根据权利要求19所述的方法，其中所述饮食改变包括向所述受试对象施用至少一 种营养产品，所述营养产品是防止EAT增多的饮食的一部分。21. 根据权利要求19所述的方法，其中所述饮食改变包括向所述受试对象施用至少一 种营养产品，所述营养产品是促使EAT减少的饮食的一部分。22. 根据权利要求19所述的方法，其中所述饮食改变包括减少脂肪摄入。23. 根据权利要求16至22中任一项所述的方法，还包括在改变所述受试对象的所述生 活方式之后重复步骤(a)。24. 用于预测受试对象心外膜脂肪组织(EAT)水平的方法，包括： (a)使用检测装置测定取自所述受试对象的样品中的一种或多种脂质生物标志物的水 平，其中所述生物标志物选自以下物质： (i) 磷脂酰胆碱(PC)[16:1/16:1] (ii) 甘油二酯(DAG)[42:8] (i i i)磷脂酰乙醇胺-醚(PE-0) [ 32:5 ] (i v)磷脂酰胆碱(PC) [ 18:0/22:5 ] (v) 磷脂酰肌醇(PI)[18:0/16:1] (vi) 磷脂酰甘油（PG) [20:3/20:3] (vii) 磷脂酰甘油(PG) [22:5/18:1] 以及根据所述样品中的所述生物标志物相对所述参考值的水平，预测所述受试对象中 EAT的水平。
【文档编号】G01N33/92GK105874335SQ201480072250
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2014年12月9日
【发明人】F·C·贝格兰, S·科里诺, F-P·马丁, I·蒙托柳鲁拉, M·舍雷尔
【申请人】雀巢产品技术援助有限公司