利用秀丽隐杆线虫突变体株rb2612检测二氧化钛的方法
【专利摘要】利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，它涉及检测二氧化钛的方法，它要解决常规的纳米二氧化钛检测方法存在前处理复杂、仪器依赖度大、成本高、误差大的问题。方法：一、NaCl和KCl用去离子水定容后灭菌，获得试剂A；二、试剂A加入到培养皿中，再加待测液体；三、接入秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，若身体摆动频率低于30下/分钟，则表明待检液体中含有高于0.01mg/L的纳米二氧化钛。本发明利用秀丽隐杆线虫突变体RB2612的行为指标身体摆动频率检测纳米级二氧化钛，操作简单，成本低廉，不依赖于高端仪器与标准样品，误差小，结果直接可靠，适合推广使用。
【专利说明】
利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及检测二氧化钛的方法。
【背景技术】
[0002]纳米二氧化钛(Ti02)，亦称纳米钛白粉，是尺寸为I?100纳米以下的白色疏松细小微粒粉末。纳米二氧化钛因其优秀的光化学特性，在化妆品、汽车、纺织、造纸、塑料、涂料、油墨、电池、功能纤维、精细陶瓷、催化剂及环保领域等应用广泛。在卫生环保领域纳米二氧化钛在紫外线作用下可长久杀菌，被用于受污染水体、空气的净化处理。含有大量的表面活性剂的生活废水中，不但容易产生异味和泡沫，而且还会影响废水的生化。这类表面活性剂不但很难降解，还会产生有毒或不溶解的中间体。纳米二氧化钛可作为催化剂分解表面活性剂，而取得显著的污水净化效果。印染废水通常含有芳香基、胺基、偶氮基等致癌物质，而利用纳米二氧化钛可高效去除。将纳米二氧化钛用于垃圾填埋物渗滤液的深度处理，处理后的水质达到国家一级排放标准。
[0003]纳米二氧化钛以其无可比拟的光催化性能，引起了国内外环境材料、水处理等学科科学家的广泛研究，但纳米二氧化钛在净化污水的同时，不可避免的留存于水体中，进而因其本身的毒性在水体中产生二次污染。因此，检测处理后污水中的二氧化钛含量十分必要，而关于二氧化钛的检测尚无统一标准。
[0004]线虫由于易于保存和便于试验操作，作为一种典型模式生物在科研领域被广泛应用，而利用秀丽隐杆线虫进行物质检测已形成一系列国际标准化与规范化操作。秀丽隐杆线虫已经发展出多个突变体，一些突变体会对相应的环境胁迫具有特殊的耐受度和敏感度，通过突变体的特征指标进行可疑物质的检测，可弥补常规化学检测和仪器分析中存在操作复杂，仪器依赖度大，前处理步骤繁琐，缺乏特异标样而无法获得精确数值，检测成本尚等不足。
【发明内容】
[0005]本发明目的是为了解决常规的纳米二氧化钛检测方法存在前处理复杂、仪器依赖度大、成本高、误差大的问题，而提供一种利用秀丽隐杆线虫突变体RB2612检测纳米二氧化钛的方法。
[0006]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0007]一、称取0.1?0.2g NaCl和0.2?0.3g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌10?20min，获得试剂A;
[0008]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0009]三、向步骤二的培养皿中接入3?5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，若身体摆动频率低于3 O下/分钟，则表明待检液体中含有高于
0.01mg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0010]本发明优点:
[0011]本发明在前期研究中发现小于25nm的二氧化钛对线虫半数致死率剂量为77mg/L，因此利用秀丽隐杆线虫突变体RB2612的行为指标身体摆动频率检测纳米级二氧化钛，操作简单，成本低廉，不依赖于高端仪器与标准样品，误差小，结果直接可靠，适合推广使用。
【附图说明】
[0012]图1是本发明中纳米二氧化钛作用下秀丽隐杆线虫突变体RB2612的身体摆动频率的柱状图。
【具体实施方式】
[0013]本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意组合。
[0014]【具体实施方式】一:本实施方式利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0015]一、称取0.1?0.2g NaCl和0.2?0.3g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌10?20min，获得试剂A;
[0016]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0017]三、向步骤二的培养皿中接入3?5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，若身体摆动频率低于3 O下/分钟，则表明待检液体中含有高于
0.01mg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0018]本实施方式中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心Caenorhabditis Genetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0019]本实施方式步骤三中若身体摆动频率高于30下/分钟，则表明待检液体中含有的纳米二氧化钛低于0.01mg/L，不会对水体产生二次污染。
[0020]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是，步骤一中称取0.1gNaCl和0.3g KCl用去离子水定容至100ml。其它步骤及参数与【具体实施方式】一相同。
[0021 ]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是，步骤一中称取0.2gNaCl和0.2KC1用去离子水定容至100ml。其它步骤及参数与【具体实施方式】一相同。
[0022]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是，步骤一中称取0.14gNaCl和0.24g KCl用去离子水定容至10ml。其它步骤及参数与【具体实施方式】一相同。
[0023]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是，步骤一中称取0.16gNaCl和0.26g KCl用去离子水定容至10ml。其它步骤及参数与【具体实施方式】一相同。
[0024]【具体实施方式】六:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是，步骤一中称取0.18gNaCl和0.28g KCl用去离子水定容至10ml。其它步骤及参数与【具体实施方式】一相同。
[0025]【具体实施方式】七:本实施方式与【具体实施方式】一至六之一不同的是，步骤一中置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌15min。其它步骤及参数与【具体实施方式】一至六之一相同。
[0026]【具体实施方式】八:本实施方式与【具体实施方式】一至六之一不同的是，步骤一中置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌18min。其它步骤及参数与【具体实施方式】一至六之一相同。
[0027]【具体实施方式】九:本实施方式与【具体实施方式】一至八之一不同的是，步骤三中向步骤二的培养皿中接入4条秀丽隐杆线虫突变体RB2612。其它步骤及参数与【具体实施方式】一至八之一相同。
[0028]【具体实施方式】十:本实施方式与【具体实施方式】一至八之一不同的是，步骤三中向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612。其它步骤及参数与【具体实施方式】一至八之一相同。
[0029]采用以下实施例验证本发明的有益效果:
[0030]实施例1:
[0031 ]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0032]一、称取0.1g NaCl和0.2g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌15min，获得试剂A;
[0033]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0034]三、向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为30下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0035]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0036]本实施例检测后待检液体中含有高于0.01mg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0037]实施例2:
[0038]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0039]一、称取0.1g NaCl和0.2g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌15min，获得试剂A;
[0040]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0041 ] 三、向步骤二的培养皿中接入3条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为28下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0042]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0043]本实施例检测后待检液体中含有高于0.01mg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0044]实施例3:
[0045]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0046]一、称取0.1g NaCl和0.3g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌lOmin，获得试剂A;
[0047]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0048]三、向步骤二的培养皿中接入4条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为25下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0049]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0050]本实施例检测后待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0051 ] 实施例4:
[0052]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0053]一、称取0.2g NaCl和0.2g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌20min，获得试剂A;
[0054]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0055]三、向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为23下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0056]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0057]本实施例检测后待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0058]实施例5:
[0059]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0060]一、称取0.2g NaCl和0.3g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌lOmin，获得试剂A;
[0061 ] 二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0062 ] 三、向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为22下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0063]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0064]本实施例检测后待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0065]实施例6:
[0066]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0067]一、称取0.15g NaCl和0.25g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌15min，获得试剂A;
[0068]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0069 ] 三、向步骤二的培养皿中接入4条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为22下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0070]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0071]本实施例检测后待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0072]实施例7:
[0073]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0074]一、称取0.14g NaCl和0.24g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌16min，获得试剂A;
[0075]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0076]三、向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为21下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0077]本实施例中秀_隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0078]本实施例检测后待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0079]实施例8:
[0080]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0081 ] 一、称取0.16g NaCl和0.26g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌18min，获得试剂A;
[0082] 二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0083 ] 三、向步骤二的培养皿中接入4条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为20下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0084]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0085]本实施例检测后待检液体中含有高于0.0lmg/L的纳米二氧化钛，会对水体产生二次污染。
[0086]实施例9:
[0087]利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，按以下步骤进行:
[0088]一、称取0.18g NaCl和0.28g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌20min，获得试剂A;
[0089]二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体；
[0090]三、向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，身体摆动频率为53下/分钟，表明待检液体中含有高于0.0 lmg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。
[0091]本实施例中秀丽隐杆线虫突变体RB2612取自美国线虫遗传中心CaenorhabditisGenetics Center，本领域技术人员通过购买可获得。
[0092]本实施例检测后待检液体中含有的纳米二氧化钛低于0.0lmg/L，不会对水体产生二次污染。
[0093]将上述实施例1-9中的结果绘制成柱状图，如图1所示，可见纳米二氧化钛作用下秀丽隐杆线虫突变体RB2612的身体摆动频率。
【主权项】
1.利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于它按以下步骤进行: 一、称取0.1?0.2gNaCl和0.2?0.3g KCl用去离子水定容至10ml，置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌10?20min，获得试剂A; 二、取1mL试剂A加入到3cm培养皿中，再加入10yL待测液体； 三、向步骤二的培养皿中接入3?5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612，培养4h时后肉眼观测虫子的身体摆动，若身体摆动频率低于30下/分钟，则表明待检液体中含有高于0.01mg/L的纳米二氧化钛，即完成利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛。2.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中称取0.1g NaCl和0.3g KCl用去离子水定容至10ml。3.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中称取0.2g NaCl和0.2KC1用去离子水定容至10ml。4.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中称取0.14g NaCl和0.24g KCl用去离子水定容至10ml。5.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中称取0.16g NaCl和0.26g KCl用去离子水定容至10ml。6.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中称取0.18g NaCl和0.28g KCl用去离子水定容至10ml。7.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌15min。8.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤一中置于高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌18min。9.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤三中向步骤二的培养皿中接入4条秀丽隐杆线虫突变体RB2612。10.根据权利要求1所述的利用秀丽隐杆线虫突变体株RB2612检测二氧化钛的方法，其特征在于步骤三中向步骤二的培养皿中接入5条秀丽隐杆线虫突变体RB2612。
【文档编号】G01N33/18GK105911238SQ201610227494
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月13日
【发明人】王云彪, 侯晓丽
【申请人】中国科学院东北地理与农业生态研究所