抗生素检测试纸的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗生素检测试纸，包括样品吸收垫、金标物结合垫、反应膜和吸收纸，在金标结合垫上包被有β?内酰胺特异性抗体?胶体金标记物、四环素特异性抗体?胶体金标记物、喹诺酮特异性抗体?胶体金标记物、大环内脂特异性抗体?胶体金标记物、磺胺特异性抗体?胶体金标记物、头孢特异性抗体?胶体金标记物。在反应膜上包被有大环内脂类抗生素检测线、β?内酰胺类抗生素检测线、四环素类抗生素检测线、喹诺酮类抗生素检测线、磺胺类抗生素检测线、头孢类抗生素检测线、羊抗鼠质控线。本发明的儿童尿液中多种抗生素的联合检测试纸使用方便，快速，不需要专业操作，适合家庭使用。
【专利说明】
抗生素检测试纸
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种具有尿液检测功能的儿童纸尿裤，以及一种尿液检测方法。
【背景技术】
[0002]复旦大学一项针对江苏、浙江、上海逾千名儿童尿液检验研究显示，79.6 %的上海学龄儿童尿液中检出21种抗生素中的一种或几种，I种以上抗生素在尿中被发现的频率为58.3%，至少两种及以上抗生素或抗生素类别在尿中同时发现的频率分别为26.7%和23.5%，而且在一份尿样中最多能同时检测出4类6种抗生素;尿中抗生素总浓度之和在每毫升0.1-20纳克之间的尿样占47.8%，部分尿样抗生素浓度超过每毫升1000纳克。这种广泛暴露状态可能加重细菌耐药，从而威胁临床治疗，也可能对儿童的生长发育与人群健康造成潜在的危害。世界卫生组织(WHO)曾发布报告表示，抗生素耐药性细菌正蔓延至全球各地。(4月17日《参考消息》)。抗生素耐药像糟糕的雾霾天气一样，会逐渐衍变成一种环境危机，威胁到每个人。药物使用不当引起和加剧细菌等微生物发生改变，最后导致使用于治疗感染的药物变得无效，这就是抗生素耐药性的来源。在畜牧业，广泛使用抗生素会造成抗生素耐药性的发展。抗生素耐药性在家畜中传播后，又会通过食源性疾病和其他感染途径在人群中蔓延。儿童的尿液中检测出畜牧业常用抗生素就是一个典型的例子。而在人体身上对药物使用不当，也会造成抗生素耐药性。目前没有便捷的方式检测孩子尿液的抗生素含量。
[0003]目前，对抗生素的检测主要在食品领域以及环境领域，用于抗生素检测的方法主要有高效液相色谱技术、微生物法、免疫分析法，这些方法需要昂贵的检测仪器或专业的检测人员，不适合家庭使用，还没有针对儿童尿液中抗生素的快速检测方法。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种抗生素检测试纸，能够对儿童尿液中多种抗生素的联合检测，使用方便、快速，不需要专业操作，适合家庭使用。
[0005]为了解决以上技术问题，本发明提供了一种抗生素检测试纸，包括样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫。
[0006]优选地，本发明的抗生素检测试纸，所述的样品吸水垫为滤纸块。
[0007]优选地，本发明的抗生素检测试纸，所述的样品结合垫包被有β-内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、四环素特异性抗体-胶体金标记物、喹诺酮特异性抗体-胶体金标记物、大环内脂特异性抗体-胶体金标记物、磺胺特异性抗体-胶体金标记物和头孢特异性抗体-胶体金标记物。
[0008]优选地，本发明的抗生素检测试纸，所述的反应膜为硝酸纤维素膜，其上面依此包被有大环内脂类抗生素检测线、内酰胺类抗生素检测线、四环素类抗生素检测线、喹诺酮类抗生素检测线、磺胺类抗生素检测线、头孢类抗生素检测线和羊抗鼠质控线。
[0009]进一步地，本发明的抗生素检测试纸，所述的大环内脂类抗生素检测线与所述的β-内酰胺抗生素检测线并排、所述的四环素类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗生素检测线并排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述的头孢类抗生素检测线并排。
[0010]进一步地，本发明的抗生素检测试纸，所述的大环内脂类抗生素检测线为大环内脂类抗生素-载体蛋白，所述的β-内酰胺类抗生素检测线为β-内酰胺类抗生素-载体蛋白，所述的四环素类抗生素检测线为四环素类抗生素-载体蛋白，所述的喹诺烷酮类抗生素检测线为喹诺烷酮类抗生素-载体蛋白，所述的磺胺类抗生素检测线为磺胺类抗生素-载体蛋白，所述的头孢类抗生素检测线为头孢类抗生素检测线。
[0011]更进一步地，本发明的抗生素检测试纸，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。
[0012]本发明的抗生素检测试纸，能够对儿童尿液中多种抗生素的联合检测，使用方便、快速，不需要专业操作，适合家庭使用。
【附图说明】
[0013]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明。
[0014]图1是本发明的结构示意图。
【具体实施方式】
[0015]本发明的抗生素检测试纸包括样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫。
[0016]所述的样品吸水垫为滤纸块。
[0017]所述的样品结合垫包被有β-内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、四环素特异性抗体-胶体金标记物、喹诺酮特异性抗体-胶体金标记物、大环内脂特异性抗体-胶体金标记物、磺胺特异性抗体-胶体金标记物和头孢特异性抗体-胶体金标记物。
[0018]所述的反应膜为硝酸纤维素膜，其上面依此包被有大环内脂类抗生素检测线、β-内酰胺类抗生素检测线、四环素类抗生素检测线、喹诺酮类抗生素检测线、磺胺类抗生素检测线、头孢类抗生素检测线和羊抗鼠质控线。
[0019]所述的大环内脂类抗生素检测线与所述的β-内酰胺抗生素检测线并排、所述的四环素类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗生素检测线并排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述的头孢类抗生素检测线并排。
[0020]所述的大环内脂类抗生素检测线为大环内脂类抗生素-载体蛋白，所述的β-内酰胺类抗生素检测线为内酰胺类抗生素-载体蛋白，所述的四环素类抗生素检测线为四环素类抗生素-载体蛋白，所述的喹诺烷酮类抗生素检测线为喹诺烷酮类抗生素-载体蛋白，所述的磺胺类抗生素检测线为磺胺类抗生素-载体蛋白，所述的头孢类抗生素检测线为头孢类抗生素检测线。所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。
[0021 ] 一种胶体金的制备方法:
[0022]用双蒸去离子水将质量分数5%氯金酸稀释成质量分数至0.01%，置磁力加热棒搅拌器上搅拌煮沸，煮沸后每10ml氯金酸加入5ml质量分数3%柠檬酸三钠，溶液的颜色会由浅黄变兰色，然后变深兰，最后变为红色，当溶液的颜色完全变为透明的红色时，继续回流，1min后停止加热，冷却至室温后用双蒸去离子水补充至原体积并于4°C避光保存。
[0023]—种β-内酰胺类抗生素特异性抗体-胶体金标记物制备方法:
[0024](I)以目测法确定胶体金与待标记抗体用量比例，用0.lmol/L的碳酸钾调节胶体金溶液至7.2，将抗体用pH为7.6，0.lmol/L的磷酸盐缓冲液逐级稀释为5?40yg/ml，各取
0.1ml按顺序加入一系列装有Iml胶体金的试管中，5min后在上述试管内分别加入0.1ml质量分数1%氯化钠，混匀，静置2h后观察结果。从加入抗体浓度为lOyg/ml的试管开始，胶体金溶液的颜色基本一致，因此稳定Iml胶体金最适抗体量是I Oyg/ml。
[0025](2)在磁力搅拌下，在1ml胶体金中加入β-内酰胺类抗生素特异性隆抗体10ml，继续搅拌混匀lOmin，加入0.2mll0%BSA，静置离心30min，弃上清液，沉淀物用含质量分数0.1 %的牛血清白蛋白、0.5 %的表面活性剂，pH为7.2的0.2mol/L磷酸盐缓冲液洗涤两次，即可得到已纯化的金标抗体溶液，置4°C备用。按同样的方法制备其他金标抗体溶液。
[0026]抗生素检测试纸条的灵敏度试验
[0027]大环内脂类抗生素、β-内酞胺类抗生素、四环素类抗生素、喹诺烷酮类抗生素、头孢类抗生素和磺胺类抗生素分别用PH为7的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液稀释成不同浓度，然后用本发明的试纸条进行检测，将不同浓度的抗生素滴加到试纸条的样品垫。结果表明，本试纸条的检测灵敏度分别为:红霉素10yg/L、螺旋霉素8yg/L、青霉素G 4yg/L，阿莫西林4μg/L、金霉素15yg/L、土霉素30yg/L、诺氟沙星60yg/L、氧氟沙星100yg/L、磺胺多辛100yg/L、磺胺嚓咤100yg/L、头抱哇诺20yg/L、头抱洛宁20yg/L。
[0028]本发明的抗生素检测试纸，能够对儿童尿液中多种抗生素的联合检测，使用方便、快速，不需要专业操作，适合家庭使用。
【主权项】
1.一种抗生素检测试纸，其特征在于，包括样品吸收垫、样品结合垫、反应膜和样品吸水垫。2.如权利要求1所述的抗生素检测试纸，其特征在于，所述的样品吸水垫为滤纸块。3.如权利要求1所述的抗生素检测试纸，其特征在于，所述的样品结合垫包被有β_内酰胺特异性抗体-胶体金标记物、四环素特异性抗体-胶体金标记物、喹诺酮特异性抗体-胶体金标记物、大环内脂特异性抗体-胶体金标记物、磺胺特异性抗体-胶体金标记物和头孢特异性抗体-胶体金标记物。4.如权利要求1所述的抗生素检测试纸，其特征在于，所述的反应膜为硝酸纤维素膜，其上面依此包被有大环内脂类抗生素检测线、β-内酰胺类抗生素检测线、四环素类抗生素检测线、喹诺酮类抗生素检测线、磺胺类抗生素检测线、头孢类抗生素检测线和羊抗鼠质控线。5.如权利要求4所述的抗生素检测试纸，其特征在于，所述的大环内脂类抗生素检测线与所述的内酰胺抗生素检测线并排、所述的四环素类抗生素检测线与所述的喹诺酮类抗生素检测线并排、所述的磺胺类抗生素检测线与所述的头孢类抗生素检测线并排。6.如权利要求4所述的抗生素检测试纸，其特征在于，所述的大环内脂类抗生素检测线为大环内脂类抗生素-载体蛋白，所述的内酰胺类抗生素检测线为内酰胺类抗生素-载体蛋白，所述的四环素类抗生素检测线为四环素类抗生素-载体蛋白，所述的喹诺烷酮类抗生素检测线为喹诺烷酮类抗生素-载体蛋白，所述的磺胺类抗生素检测线为磺胺类抗生素-载体蛋白，所述的头孢类抗生素检测线为头孢类抗生素检测线。7.如权利要求6所述的抗生素检测试纸，其特征在于，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白。
【文档编号】G01N33/543GK106093380SQ201610528012
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年7月6日
【发明人】徐佳
【申请人】哈尔滨贝贝凯尔科技发展有限公司