亚砷酸钠在制备治疗细粒棘球蚴病药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及亚砷酸钠的药学应用，属于药物化学领域。
【背景技术】
[0002]细粒棘球蝴病(echinococcosis)，即囊性包虫病(cysticechinococcosis，CE)，是一种主要流行于畜牧地区的人畜共患寄生虫病，由细粒棘球绦虫(echinococcosisgranulosus，Eg)的中绦期幼虫寄生于人体所致，可发生在全身各个脏器，临床上以肝棘球蝴病(echinococcosis of the liver)最为常见，约占75%，其次是肺包虫病；该病呈全球性分布，在我国以新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙古、陕西和四川西部等畜牧业发达地区常见。
[0003]目前，肝包虫病首选外科手术治疗，辅以药物治疗。传统术式主要有肝包虫内囊摘除术、肝包虫内囊摘除术+外囊部分摘除术及肝部分切除术，近年来所采用的肝包虫外膜内外囊完整摘除术，尽管能大大降低包虫病的复发率，最大程度地减少手术对肝实质的损伤，但当包虫囊肿体积较大或贴近重要脏器或管道(肝门或胆管)时，则需要选择肝包虫内囊摘除或肝包虫内囊摘除+外囊部分切除术。此种术式可能会有头节的外漏和残留，由于棘球蝴的生物学特性不同于一般的占位性病灶，手术后复发、播散转移、未完全摘除及过敏性休克等难以避免，故术中和术后需要药物辅助治疗预防包虫复发。因此，针对术中头节外溢及头节的处理不当的问题，寻找术中合适的局部化疗药物及口服抗包虫药对于肝包虫病的治疗至关重要。
[0004]基于此，本领域在体外进行了多种药物的尝试及筛选，临床常用的局部化疗药物有20%高渗盐水，15min可100%杀灭细粒棘球蝴原头节，但对周围正常肝组织有一定的破坏作用，仅限于灌洗外囊；也有研究现95%的乙醇同样可以有效杀死原头节，但因会导致一系列严重的肝胆并发症而限制其应用；目前而言，总体上此类药物都不同程度的存在治疗方面的缺陷。
[0005]因此，亟需寻找一种用时短、高效、安全的化疗药物用于肝包虫病的治疗。
【发明内容】
[0006]申请人研究过程中发现亚砷酸钠(sodium arsenite，NaAsO2)可以有效抑制和杀灭原头节的生长，从而可用于细粒棘球蝴病的临床治疗。
[0007]在本发明中，亚砷酸钠(NaAsO2)，是一种三价砷剂，其分子量为129.91，白色粉末状固体，微有潮解性，易溶于水，溶液呈弱碱性，亚砷酸钠具有诱导细胞增生及凋亡的作用。
[0008]首先，本发明公开了亚砷酸钠在制备治疗细粒棘球蝴病药物中的应用。
[0009]上述的药物，既可以是单纯的以亚砷酸钠作为活性成分原料，还可以是将亚砷酸钠作为活性成分与其他辅料做成的各种制剂，例如常见的片剂、胶囊、滴丸、输液、冻干粉针等，对于药物剂型及其相应辅料的选择，本领域技术人员可根据需要进行调整。
[0010]上述的细粒棘球蝴病，既可以是动物体上的，也可以是人体上的，根据该症的临床发病部位，通常指的是囊性肝包虫病。
[0011]因此，本发明还公开了亚砷酸钠在制备治疗囊性肝包虫病药物中的应用。
[0012]根据需要，可使用不同浓度的亚砷酸钠，一般来说，为了有效的杀灭病原，亚砷酸钠的浓度不低于8 μ mol/Lo
[0013]针对常见的原头节生长密度，优选的，亚砷酸钠的浓度为16-20 ymol/L。
[0014]优选的，连续用药时间不低于4天。
[0015]在上述浓度下，对细粒棘球蝴原头节具有比较理想的抑制和杀灭效果。
[0016]在此基础上，本发明还公开了亚砷酸钠作为细粒棘球蝴原头节抑制剂的应用。
[0017]本领域技术人员可以理解，在多种实验环境下，尤其是动物离体实验情况下，为了防止由于动物体内的细粒棘球蝴原头节在体外的生长和头节外溢，需要加入必要的抑制剂，例如20%高渗盐水等。
[0018]与上述类似，亚砷酸钠的浓度不低于8ymol/L，优选的，亚砷酸钠的浓度为16-20 μmol/Lo
【附图说明】
[0019]图1为亚砷酸钠对细粒棘球蝴原头节形态的影响，其中，A:对照组原头节；B:8 μ mol/L他八802作用4d的原头节；C:8 μ mol/L NaAsO 2作用8d的原头节；D: 16 μ mol/L他八802作用4d的原头节；Ε:16 μ mol/L NaAsO2作用8d的原头节。
[0020]图2为不同浓度的亚砷酸钠对细粒棘球蝴原头节活力的影响。
[0021]图3为亚砷酸钠对细粒棘球蝴原头节表面超微结构的影响，其中，A:对照组原头节；B:8 μ mol/L NaAs02 作用原头节 3d ；C: 16 μ mol/L NaAs02 作用原头节 3d。
[0022]图4为亚砷酸钠对细粒棘球蝴原头节内Caspase-3酶活性的影响。
【具体实施方式】
[0023]为了说明亚砷酸钠(NaAsO2)的应用效果，申请人进行了体外实验说明亚砷酸钠对细粒棘球蝴原头节的杀灭效果。
[0024]实验I 4&々802体外作用于细粒棘球蝴原头节的效果
[0025]取新鲜自然感染细粒棘球蝴的绵羊肝脏并将其带回实验室，用水冲洗干净肝脏表面，并用75%酒精消毒表面，用无菌方式抽取含有原头节的囊液置无菌培养瓶中。待原头节自然沉淀后弃去上清囊液，在无菌条件下，用PBS液(PH:7.2)清洗3-5次，0.1 %伊红染液做染液排斥实验，活力多98%，倒置显微镜下观察原头节虫体呈内陷型，散在密布，虫体结构饱满，呈椭圆形，结构清晰完整，内部结构清晰，钙颗粒清亮而明显。
[0026]收集细粒棘球蝴原头节，然后将原头节分装至含10%小牛血清的RPMI1640培养基中(青霉素100U/mL，链霉素100U/mL)，置37°C、5% CO2培养箱内培养，每3d换一次培养液，待用。
[0027]实验分组:履?1-1640培养基空白对照组、4“11101/1 NaAsO2组、8 μ mol/L NaAsO 2组、12 μ mol/L NaAsC^IL、16 μ mol/L NaAsO 2组、20 μ mol/L NaAsO 2组。取六孔板，每每孔均设5mL体系，按以上分组，配好相应的培养液。
[0028]将在体外培养5天并适应环境的细粒棘球蝴原头节用PBS (pH = 7.2)清洗3次，0.1 %伊红染色，倒置显微镜下观察其存活率(多98% )，每组培养液中加入约2000个原头节，置37°C，5% COJ?育箱内培养，在倒置显微镜下观察NaAsO 2对细粒棘球蝴原头节形态和活力的影响。
[0029]