一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 疫苗接种是预防和控制传染性疾病最经济、有效的手段。DNA疫苗、重组疫苗和 合成肽疫苗等新型疫苗是近年来发展迅速的一类生物制剂，比常规疫苗具有抗原纯度高、 特异性强、安全性好等优势。然而，这些新型疫苗的免疫原性弱，免疫效力低下[Oyston P，RobinsoK.Thecurrentchallengesforvaccinedevelopment.JMedMicrobiol 2012; 61(7): 889 - 894h同此，当前疫苗研究正面临一些复杂病原如疟疾、结核、人免 疫缺陷病毒等的重要挑战[Leroux-RoelsG.Unmetneedsinmodernvaccinology: Adjuvantstoimprovetheimmuneresponse.Vaccine2010; 28(Supp. 3):C25 - 36]〇 佐剂是传统疫苗和当前新型疫苗必不可少的组成成分，不仅能影响机体对疫苗免疫应 答的强度，而且能针对特定病原体诱导最有效的免疫应答类型[MbowML，DeGregorio E，ValianteNM,etal.Newadjuvantsforhumanvaccines.CurrentOpinionin Immunology2010; 22(3): 411-416]。目前报道的免疫佐剂种类很多，如油佐剂、弗氏 佐剂、微生物及其代谢产物、核酸及其类似物、细胞因子、脂质体等[DeyAK，Srivastava IK.Noveladjuvantsanddeliverysystemsforenhancingimmuneresponses inducedbyimmunogens.ExpertRevVaccines2011; 10: 227 - 51]，但由于存在不 同程度的毒副作用或安全隐患等一些不可避免的缺陷而难以实际应用[MbowML，De GregorioE，ValianteNM,RappuoliR.Newadjuvantsforhumanvaccines.Curr OpinImmunol2010, 22(3): 411 - 6;Batista-DuharteA,LindbladEB,Oviedo-OrtaE.Progressinunderstandingadjuvantimmunotoxicitymechanisms.Toxicol Lett2011; 203(2): 97 - 105]。铝胶佐剂自1920s使用以来，直至最近由铝盐和TLR4激 动剂3-0 -去酰基-4' -单磷酰脂质A组成的AS04被批准之前一直是唯一通过FDA 批准的人用疫苗佐剂[MarrackP，McKeeAS，MunksMW.Towardsanunderstanding oftheadjuvantactionofaluminium.NatRevImmunol2009; 9: 287 - 293]。然 而，铝胶佐剂存在一些弊端：①主要通过诱导Th2型免疫应答产生抗体起保护作用，不 能诱生Thl型免疫应答和细胞介导的免疫反应，只适用于以抗体为主要保护性免疫的疫 苗（ExleyC，SiesjoP，ErikssonH.Theimmunobiologyofaluminiumadjuvants: howdotheyreallyworkTrendsImmunol2010; 31: 103 - 109);②对人免疫缺陷病 毒、丙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒、流感病毒以及血吸虫病、百日咳和伤寒等多种抗原无佐 剂作用[0'HaganDT，DeGregorioE.Thepathtoasuccessfulvaccineadjuvant- 'thelongandwindingroad' ?DrugDiscovToday2009; 14: 541 - 551];③可促 进IgE抗体产生，容易诱导机体产生过敏反应；④在局部形成肉芽肿，甚至发生局部无菌 性脓肿；⑤因其理化性质特点，含铝胶的疫苗怕冻，冻后铝胶容易变性；⑥对人、畜神经 系统可能有影响。因此，铝胶佐剂已远远不能满足新型疫苗发展的要求[KoolM，Fierens K，LambrechtBN.Alumadjuvant:someofthetricksoftheoldestadjuvant.J MedMicrobiol2012; 61 (7): 927 - 934]。寻找安全、有效、新型的免疫佐剂是当前疫 苗研究领域的一个热点[SchijnsVEJC，LavelleEC.Trendsinvaccineadjuvants. ExpertRevVaccines2011; 10(4): 539 - 550]。免疫佐剂研究已被列为疫苗研究的优先 令页域[HarandiAM,MedagliniD，ShattockRJ.Vaccineadjuvants:Apriorityfor vaccineresearch.Vaccine2010; 28(12): 2363 - 2366;HarandAM,BreweJ,Schijn V.ConferenceScene:Recentadvancementsinimmunopotentiatorsformodern vaccines.Immunotherapy2011; 3(11) : 1297 - 301] 〇
[0003] 天然药物用于防治疾病具有悠久的历史。当今，FDA批准的药物约30%来源于天 然药物。新的具有免疫活性的天然产物的发现日益成为研究重点，尤其在寻找新一代疫苗 佐剂方面[LicciardiPV,UnderwoodJR.Plant-derivedmedicines:Anovelclass ofimmunologicaladjuvants.IntImmunopharmaco1 2011; 11 (3): 390-398] 〇 阜苷 (saponin)是一类广泛存在于中药和天然药物中的重要免疫活性物质[RiosJL.Effects oftriterpenesontheimmunesystem.JEthnopharmacol2010; 128: 1-14]〇 自 1951年发现皂苷能增强机体对口蹄疫疫苗的免疫应答以来，其佐剂作用受到了广泛的关 注。研究最多的是南美阜树（)树皮中筛选到具有佐剂活性 总阜苷--QuilA及其活性成分QS-21[SkeneCDandSuttonP.Saponin-adjuvanted particulatevaccinesforclinicaluse.Methods2006; 40: 53-9]。QuilA和QS-21 对外源性抗原既能刺激Thl免疫应答，又能诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL)应答。这一 独特的特性使其成为亚单位疫苗、细胞内病原体疫苗及癌症疫苗的理想佐剂[Mbawuike I，ZangY，CouchRB.Humoralandcell-mediatedimmuneresponsesofhumansto inactivatedinfluenzavaccinewithorwithoutQS21adjuvant.Vaccine2007; 25(17): 3263-9]。但QuilA存在严重的缺陷：溶血性强、毒副作用大，可引起局部组织坏 死，甚至全身不良反应和中毒[WaiteDC，JacobsonEW，EnnisFA，EdelmanR，WhiteB， KammerR，etal.Threedouble-blind,randomizedtrialsevaluatingthesafety andtoleranceofdifferentformulationsofthesaponinadjuvantQS-21.Vaccine 2001; 19: 3957-7.]。目前除了用于为某些绝症设计的疫苗如癌症疫苗和人免疫缺陷病 重组疫苗等人用疫苗外，主要限用于口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗等兽用疫苗。因此，从天然药 物中寻找筛选高效、低毒的皂苷佐剂受到国内外学者高度的关注[SunHX，XieY，YeYP. Advancesinsaponin-basedadjuvants.Vaccine2009， 27(12): 1787-1796]〇
[0004] 我们以前的研究表明，合欢皮皂苷（AJS)对卵清蛋白（OVA)和多种商品疫苗(禽流 感重组鸡痘病毒载体活疫苗、新城疫活疫苗、猪伪狂犬gE基因缺失活疫苗、猪链球菌疫苗 等）均具有显著的佐剂作用，能同时诱生机体对抗原产生Thl和Th2免疫应答反应，其佐剂 作用优于QuilA，而溶血性和毒性远远低于后者，是一种理想的疫苗候选佐剂（SunHX，He Sff,ShiMH.Adjuvant-activefractionfromAlbizziajulibrissinsaponinsimproves immuneresponsesbyinducingcytokineandchemokineatthesiteofinjection. InternationalImmunopharmacology. 14(12)，2047-2056，2014.)D 合欢皮阜苷可以 从豆科（Leguminosae)植物合欢 ^Durazz?、山合欢A如/^ora( Roxb.)Prain、阔叶合欢AJeMd、羽状合欢A等中提取，是一类由齐墩果焼 型苷元与8~10个单糖分子以及1~4分子单萜烯酸（辛二烯酸衍生物）结合而成的三 萜皂苷。合欢皮皂苷虽然具有较好的佐剂活性，但其使用剂量相对较大，溶血性较强。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种新型通用型基质疫苗佐剂及其制备方法和用途。
[0006]本发明的合欢皮阜苷基质佐剂saponins-basedmatrixadjuvant, ASMA)含有合欢皮皂苷、胆固醇和卵磷脂，且三者的重量比为5~20:1:1。
[0007] 所述的合欢皮阜苷是合欢皮属植物中的阜苷，它可以从豆科（Leguminosae)植 物合欢 Ji/JiAriw/nDurazz.、山合欢A々a/feira(Roxb.)Prain、阔叶合欢A 々、羽状合欢A 等中提取，是一类由齐墩果烧型苷元、8~10个单糖分子以 及1~4单萜烯酸（辛二烯酸衍生物）分子结合而成的三萜皂苷。
[0008] 所述的卵磷脂为磷脂酰胆碱、大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。
[0009] 所述的佐剂是由长度为300~700nm片状和/或链状微粒构成，该片状或链状微 粒由粒径10