一种从松子油中纯化皮诺敛酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物提取技术领域，具体是涉及一种从松子油中纯化皮诺敛酸的方 法。
【背景技术】
[0002] 红松（Pinus koraiensis Sieb. et Zucc)又名果松，属于松科植物，主要分布在我 国东北长白山到小兴安岭一带。属珍稀植物。其果球大呈卵圆形，暗褐色，球内结子，大如 巴豆、故意称红松子。松子作为美味小食品，市场上售价很高，约为30元/公斤，其种仁油 中含有多种极具开发价值的生理活性物质，如维生素A、维生素E以及人体必需的多种不饱 和脂肪酸、磷脂、留醇、多糖、黄酮等，人们饮食结构和营养保健作用都具重要意义。我国传 统医学认为松子为味美食品，油可食，具有降高血脂作用。据李时珍《本草纲目》记载：松子 味甘，性小温，无毒。主治骨关节风湿、头眩、祛风湿、润五脏、充饥，逐风痹寒气、补体虚、滋 润皮肤，久服轻身延年不老。另有润肺功能，治燥结咳。
[0003] 现代药理研究表明松子油的主要功效都是其中的皮诺敛酸引起的，研究表明其不 仅能够降低胆固醇（TC)、甘油三酯（TG)，升高高密度脂蛋白（HDL)，而且还能抑制、消除其 他不饱和脂肪酸对机体的不利影响。同时，目前最新研究表明，它还具有抗炎、解热、镇痛， 对抗各种真菌、病毒感染，促进中老年人排泄功能等作用。它被专家誉为洗血因子，是刚刚 引起医学界重视的新功能因子。能够调节血脂异常，在美国已有以其为主要功能成分的减 肥食品出售。并且它只存在于松子油中。
[0004] 皮诺敛酸结构如下式所示：
[0005]
[0006] 其结构是含有三个不饱和键的不饱和脂肪酸，而松子油大部分都是饱和脂肪酸， 如何从脂肪酸中分离开饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸，一直是研究难点，一般非高压的制备 型液相色谱都很难分离开亚油酸和亚麻酸，目前方法有：低温结晶法、尿素包合法、银离子 吸附分离法、柱色谱法、精馏分离法、硝酸银络合萃取法、色谱分离法、脂肪酶分离法和冷冻 结晶法等。尿素包合法常用于分离不饱和脂肪酸，为得到高纯度产品需要配合低温结晶多 次包合，存在造成收率低、尿素回收困难等缺点。分子蒸馏法，需要低温高真空度下进行，虽 然能有效防止不饱和酸受热氧化分解，但需高真空设备，通过多级蒸馏处理后可获得不饱 和脂肪酸，但需要有专用的分子蒸馏设备，耗能较高，投入成本高，并且研究显示依靠单一 的分子蒸馏手段不能获得高纯度的不饱和脂肪酸。银离子吸附分离法具有选择性，能获得 高纯度的不饱和脂肪酸，但洗脱剂易造成环境污染且分离的规模较小，柱填料不能重复使 用。柱色谱法是现代分离检测方法，适用于少量定性分离不适用于大批量生产。硝酸银络 合萃取法具有高选择性，但此方法适用范围小，溶剂价格高且回收再利用比较难。脂肪酶分 离法利用脂肪酶对甘油三酯进行选择性水解从而达到分离目的，具有选择性，但脂肪酶价 格昂贵，固化效果不稳定。
【发明内容】
[0007] 本发明提供一种从松子油中纯化皮诺敛酸的方法，提供一种操作简便、安全、经 济、不饱和脂肪酸纯度和收率较高，并能适应工业生产需求的不饱和脂肪酸的分离方法。
[0008] 本发明采取的技术方案是，包括下列步骤：
[0009] A.松子油的皂化处理；B.萃取液的配制；C.络合皮诺敛酸；D.解离皮诺敛酸； E.皮诺敛酸洗脱。
[0010] 本发明一种实施方式是所述步骤A.松子油的皂化处理是指，取红松松子油，置于 4-8倍体积的60-100%乙醇溶液中，加入乙醇溶液质量分数10% -30%的氢氧化钠或氢氧 化钾，室温搅拌24-48h或加热回流0. 5-2h后，减压回收乙醇溶液至原体积的1/2-1/5,加入 蒸馏水至原体积的0. 5-2倍，调pH2-3,加入相同体积正己烷或石油醚萃取2-3次，减压回 收有机溶剂得皂化后的松子油脂肪酸。
[0011] 本发明一种实施方式是所述步骤B.萃取液的配制是指：
[0012] 配制硫酸铜2m〇l/l-4m〇l/l的无机离子水液，并添加体积比1/8-1/3的甲醇；有机 相为含质量分数为10-30%的季戊四醇四油酸酯的石油醚。
[0013] 本发明一种实施方式是所述步骤C.络合皮诺敛酸是指，将皂化后的松子油脂肪 酸用正己烷或石油醚溶解配成0. 2-1. Og/ml有机溶液，按1:1-1:3配比加入步骤B配好 的无机离子水液，和含质量分数为10-30%的季戊四醇四油酸酯的石油醚，搅拌均匀放置0 度-零下15度的反应釜中，并搅拌低温萃取30-60min。
[0014] 本发明一种实施方式是所述步骤D.解离皮诺敛酸是指，将萃取液倒入分液漏斗 里静置30min-60min，待液体完全静置分层后，倾放出下层水液，转移至反应釜加入等量的 正己烧，加热至50度-70度，搅拌萃取30min_60min。
[0015] 本发明一种实施方式是所述步骤E.皮诺敛酸洗脱是指，将上步萃取液静置，分层 后，放出正己烷部位，加入饱和NaCl溶液体积是正己烷的2-5倍，然后分层保留正己烷部 位，后用蒸馏水洗脱，体积是正己烷的10-20倍，分层后正己烷部位加无水硫酸钠放置过夜 除水后，减压蒸馏除去正己烷得产品。
[0016] 本发明选择与银离子同族的铜离子为无机水相离子，并选含季戊四醇四油酸酯为 有机相，选择性的萃取了含三个不饱和键的皮诺敛酸。这里的季戊四醇四油酸酯起到两个 作用，一是能结合饱和脂肪酸进入有机相，二是能起到一种极化作用促进铜离子与含三个 不饱和键的皮诺敛酸络合。一般银离子能够与三个双键以上的不饱和脂肪酸络合进入水 相，其原理是不饱和键的电子进入银离子的空d轨道发生络合，但由于银离子比较昂贵 限制了其应用，本发明选择了价格便宜的铜离子也能提供一个空轨道，在促极化剂的作用 下不饱和脂肪酸的双键变形从而易于提供电子，铜离子与不饱和的脂肪酸络合进入水 相，达到分离的目的。
[0017] 采用本发明方法最终得到的松子油不饱和酸达到99. 5%以上，其中皮诺敛酸达到 75 %以上，并且所使用的萃取剂容易配制，成本低廉，本方法适合产业规模化生产松子油中 的皮诺敛酸。
【附图说明】
[0018] 图1是松子油不饱和脂肪酸的HPLC测定图。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1
[0020] 包括下列步骤：
[0021] A.松子油的皂化处理；
[0022] 取红松松子油，置于4倍体积的60%乙醇溶液中，加入乙醇溶液质量分数10%的 氢氧化钠或氢氧化钾，室温搅拌24h或加热回流0. 5h后，减压回收乙醇溶液至原体积的 1/5,加入蒸馏水至原体积的0. 5倍，调pH2,加入相同体积正己烷或石油醚萃取2次，减压 回收有机溶剂得皂化后的松子油脂肪酸；
[0023] B?萃取液的配制；
[0024] 萃取液的配制是指，配制一种含无机离子的水液及能够与饱和脂肪酸结合的含季 戊四醇四油酸酯的有机相，其中无机离子能够与松子油中的皮诺敛酸络合成水相进而与 松子油中其它脂肪酸分尚的液体；
[0025] 配制硫酸铜2mol/l的无机离子水液，并添加体积比1/8的甲醇；
[0026] 有机相为含质量分数为10-30%的季戊四醇四油酸酯的石油醚；
[0027] C?络合皮诺敛酸；
[0028] 将皂化后的松子油脂肪酸用正己烷或石油醚溶解配成0. 2g/ml有机溶液，按1 : 1配比加入步骤B配好的无