一种金霉素的发酵培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于发酵培养的技术领域，涉及到发酵培养基的配置，具体涉及一种金霉 素的发酵培养基，本发明的发酵培养基用于生产金霉素可大幅提高效价。
【背景技术】
[0002] 金霉素属四环类抗生素，由金色链霉菌两级发酵后干燥制得。金霉素具有广谱抗 菌作用，其抗菌谱与四环素相似。金霉素预混料中的主要有效成分为金霉素韩盐，对多数 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抗菌作用。金霉素预混剂一般添加在家畜的饲料中饲 喂，用于抑制细菌的生长，提高饲料转化率。盐酸金霉素具有治疗作用，一般用于家畜的 饮水剂中。金霉素的药用机制是主要是干扰蛋白质的合成。金霉素在使用过程中直接添加 到动物饲料中，主要用于沙眼、肺炎、败血症、淋巴肉芽肿、斑疫伤寒及其它细菌性感染。
[0003] 我国是从上世纪50年代开始生产金霉素。上海第三制药厂是我国第一家生产金 霉素的企业，当时发酵单位不到l〇〇〇〇ug/ml。多年来，国内金霉素的发酵单位提高较缓 慢，但在产量、生产能力及系列产品的开发等方面发展较快。20世纪80年代后期，国内金 霉素平均发酵单位为18000ug/ml，单罐最高发酵单位为20000ug/ml左右，提炼总收率为 80-90%。20世纪末期，国内金霉素发酵水平小幅提高，平均达到22000ug/ml。近年来， 金霉素平均发酵单位提高到23000ug/ml以上，收率提高到95%以上，但是发酵单位还是远 低于其他四环类抗生素的发酵水平。
【发明内容】
[0004] 本发明为解决现有技术中金霉素发酵培养基发酵培养金霉素效价低的技术问题， 提供了一种可大幅提高发酵效价的金霉素发酵培养基。
[0005] 本发明为实现其目的采用的技术方案是：
[0006] -种金霉素的发酵培养基，所述的发酵培养基的成分和含量为：葡萄糖25_35g/ L、植物油50-70g/L、黄豆饼粉30-50g/L、碳酸钙5-7g/L、玉米浆20-30g/L、硫酸铵4-6g/L、 氯化钠3-5g/L、磷酸二氢钾0. 2-0. 3g/L、硫酸镁0. 2-0. 3g/L。
[0007] -种金霉素的发酵培养基，所述的发酵培养基的成分和含量为：葡萄糖28_32g/ L、植物油55-65g/L、黄豆饼粉36-44g/L、碳酸钙5. 5-6. 5g/L、玉米浆21-26g/L、硫酸铵 4. 5-5. 5g/L、氯化钠 3. 5-4. 5g/L、磷酸二氢钾 0· 23-0. 27g/L、硫酸镁 0· 23-0. 27g/L。
[0008] -种金霉素的发酵培养基，所述的发酵培养基的成分和含量为：葡萄糖26g/L、植 物油53g/L、黄豆饼粉32g/L、碳酸钙6g/L、玉米浆23g/L、硫酸铵4. 8g/L、氯化钠3. 6g/L、磷 酸二氢钾〇· 22g/L、硫酸镁0· 21g/L。
[0009] -种金霉素的发酵培养基，所述的发酵培养基的成分和含量为：葡萄糖30g/L、植 物油60g/L、黄豆饼粉40g/L、碳酸妈5. 7g/L、玉米楽；22g/L、硫酸铵5g/L、氯化钠4g/L、磷酸 二氢钾 0· 25g/L、硫酸镁 0· 25g/L。
[0010] 一种金霉素的发酵培养基，所述的发酵培养基的成分和含量为：葡萄糖34g/L、植 物油68g/L、黄豆饼粉47g/L、碳酸钙6. 7g/L、玉米浆28g/L、硫酸铵5. 8g/L、氯化钠4. 7g/L、 磷酸二氢钾〇· 28g/L、硫酸镁0· 29g/L。
[0011] 所述植物油为豆油、葵花籽油、花生油中的一种。
[0012] 本发明的有益效果是：本发明突破了发酵领域的传统观念，在发酵培养基中使用 了大量的油，既提高了菌株的碳源利用度，又解决了发酵过程中的产泡沫问题，同时大幅 提高了发酵效价，能使金霉素发酵120小时的摇瓶效价达到29000U/mL以上，最高能达到 31502U/mL。
[0013] 本发明金霉素的发酵培养基用于发酵培养金霉素时，实现发酵效价提高的关键在 于加入了大量的植物油，植物油在发酵过程中发挥着多重作用，主要发挥碳源、消沫剂、氧 载体等作用，能够有效提高金霉素产量。植物油在微生物代谢的不同阶段发挥不同的作用， 不仅能够降低抗生素生产成本，而且能有效提高金霉素的产量。本发明培养基中葡萄糖在 发酵前期发挥作用，植物油是在发酵的中后期作为缓效碳源提供能量，此外植物油还起到 了消泡作用，其解决了现有技术中淀粉发酵液粘度大，产泡沫等负面影响。
[0014] 植物油提高金霉素效价的原理可通过两点说明：一是油脂是作为缓慢利用碳源可 避免迅速利用碳源引起的分解代谢物的阻遏作用；二是油脂是短链脂肪酸产物的主要来 源，可为聚酮体途径抗生素合成提供大量前体物质。具体来说，油脂作为碳源被利用，主要 是脂肪酸发挥作用，油脂中的长链脂肪酸先被乙酰辅酶A硫酯活化，进入氧化途径， 每循环一次脂肪酸链掉下两个碳碎片为乙酰辅酶Α，剩余的脂酰辅酶A化合物重新进入降 解循环，降解产物乙酰辅酶A可以作为产物合成的前体。
【具体实施方式】
[0015] 本发明为解决现有技术中金霉素发酵培养基发酵培养金霉素效价低的技术问题， 提供了一种可大幅提高发酵效价的金霉素发酵培养基，下面结合具体实施例对本发明作进 一步的说明。
[0016] 实施例1
[0017] 培养基配置：按照表1的配方称取各组分，分别加纯化水溶解、定容至lOOOmL，调 节pH至6. 8 ;编号分别为实验组1、2、3、4、5、6、7、8、9、对照组。
[0018] 表 1
[0019] CN 105177099 A I兄明书 3/8 页
[0020] 分装灭菌：将实验组1-9和对照组中各自的1000 mL培养基分别分装到3个容积为 250mL的摇瓶中，分别记作摇瓶1、摇瓶2、摇瓶3,每瓶装量50mL，剩余料液弃之，加6g棉塞， 两层纱布，一层牛皮纸包头，于121°C灭菌30分钟，冷却至室温，得到发酵培养基。接种：按 10%的接种量向本实施例制备的发酵培养基中接入金霉素产生菌金色链霉菌的种子培养 物，于温度29-31Γ下培养120小时后检测效价，结果见表2。
[0021] 表 2
[0023] 由表2可知，本发明的发酵培养基发酵的金霉素效价远高于现有技术培养基发酵 的金霉素效价，基于此，植物油的大量加入与其他成分的相结合实现了金霉素效价的提高， 植物油由于油价格较高和代谢需消耗大量的氧使供养能耗上升等原因，现有技术中植物 油的用量的加入只能使植物油作为一种优良的消泡剂，普遍认为植物油的加入量在21g/L， 本发明大胆尝试，将植物油的用量提高1倍以上用量，并通过与其他组分的用量和成分的 结合解决了供氧能耗的问题，而且使金霉素的发酵效价有了大幅度的提升。
[0024] 实施例2.
[0025] 培养基配置：按照表3的配方称取各组分，分别加纯化水溶解、定容至lOOOmL，调 节pH至6. 8 ;编号分别为实验组1、2、3、对照组。
[0026]表 3
[0029] 分装灭菌：将实验组1-3和对照组中各自的1000 mL培养基分别分装到5个容积为 250mL的摇瓶中，每瓶装量50mL，剩余料液弃之，加6g棉塞，两层纱布，一层牛皮纸包头，于 121°C灭菌30分钟，冷却至室温，得到发酵培养基。
[0030] 接种：按10%的接种量向本实施例制备的发酵培养基中接入金霉素产生菌金色 链霉菌的种子培养物，于温度29-31°C下培养120小时后检测效价，结果见表4。
[0031] 表 4
[0033] 实施例3.
[0034] 培养基配置：按照表5的配方称取各组分，分别加纯化水溶解、定容至lOOOmL，调 节pH至6. 8 ;编号分别为实验组1、2、3、对照组。
[0035] 表 5
[0036] CN 105177099 A 说明书 5/8 页
[0037] 分装灭菌：将实验组1-3和对照组中各自的1000 mL培养基分别分装到3个容积为 250mL的摇瓶中，每瓶装量50mL，剩