一种可高压灭菌的菌落显色培养基、制备方法及用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及菌落书面鉴定领域，尤其涉及一种可高压灭菌的菌落显色培养基、制 备方法及用途。
【背景技术】
[0002] 菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等） 每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污 染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出 适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
[0003] 目前国内对食品中菌落总数的的标准检验方法（GB4789. 2-2010)中所使用的培 养基是平板计数琼脂（复配食品添加剂中菌落总数检测方法并没有详细规定，一般按照标 准《GB4789. 2》中的方法检测）。经过笔者多年的微生物检测工作，用普通的平板计数琼脂 来检测复配食品添加剂中的菌落总数往往会出现下面的结果，第一因某些细菌菌落太小或 菌落形态与样品颗粒十分相似，导致菌落与样品颗粒不易区分，特别是颗粒多时会使计数 结果出现较大误差，影响了菌落计数结果的准确性；第二在复配食品添加剂均质后倒入平 板培养后，因试样本身的颗粒与菌落形态很像，使得计数出现误差，而影响实验结果。
[0004] 有研究表明，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)是一种氧化剂，细菌在其新陈代谢 过程中会产生琥珀酸脱氢酶，在琥珀酸脱氢酶的作用下，TTC接受氢（H)成为红色而稳定的 三苯甲臢（TPF)从而使菌落呈现红色或浅红色，故在平板计数琼脂中添加 TTC，可使菌落 与食品均质样中的固体小颗粒区分开，从而提高检测数据的准确性。但是TTC不能直接加 入到培养基中与培养基一同灭菌，否则灭菌后会使培养基变成褐色而导致TTC显色反应失 效，进而不能用于实验。
[0005] 中国专利申请CN103725744A公开了一种显色培养基，除了琼脂等必要营养物质 外还加入了 TTC及吐温80,但吐温80是一种油状物质，不能同其他琼脂等粉末状物质共同 存在，所以不能制备为最终可售的平板计数琼脂。
[0006] 故开发一种能够最终可市售的菌落显色培养基就成为必要。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种边界清晰，菌落显色明显，易于计数的可售平板计数 琼脂培养基。
[0008] 为实现上述目的，本发明提供一种可高压灭菌的菌落显色培养基，其特征在于，该 培养基每升中包含琼脂23. 5g，蔗糖脂肪酸酯SE-110. 005-0. 015g，2, 3, 5-氯化三苯基四氮 唑0. 005-0. 015g。所述琼脂是市售平板计数琼脂。
[0009] 进一步，将各组分按照配比溶于蒸馏水中，煮沸溶解，用lmol/L HCL或lmol/L NaOH调节其pH值为7· 0±0· 2,115°C高压灭菌15min后制备得到。pH值为7· 0±0· 2,适于 微生物培养，同时满足国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数 测定》中的要求。
[0010] 本发明还保护所述菌落显色培养基用于测定食品、食品添加剂中菌落数的用途。
[0011] 所述的食品添加剂包括所有的食品添加剂，比如复配食品添加剂。
[0012] 蔗糖脂肪酸酯是非离子表面活性剂，可作用于细菌细胞膜某些受体，使休眠状态 的细菌迅速感知外界适宜的生长环境，快速生长，同时降低细菌表面和培养基的表面张力， 使营养物质更易吸收。蔗糖脂肪酸酯SE-Il是粉末状，与2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑TTC、 琼脂等其他营养物质物理状态一致，可以按比例充分混合后制成菌落总数显色计数琼脂出 售，而且可与2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑TTC、琼脂等物质共同灭菌而不破坏2, 3, 5-氯化 三苯基四氮唑TTC的显色反应，其加入量少，成本低，并且研究表明蔗糖脂肪酸酯为一种环 境友好型的非离子表面活性剂。本发明的发明人进行了大量的前期试验，最后将加入的蔗 糖脂肪酸酯（SE-Il)加入量的范围缩小到0. 005g-0. 020g，将2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)加入量的范围缩小到0. 005g-0. 020g，并以0. 005g为单位递增做试验，确定最后蔗糖 脂肪酸酯（SE-Il)以及2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)加入量，及菌落显色培养基的组分 确定。
[0013] 本发明的有益效果：2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑TTC、蔗糖脂肪酸酯SE-Il可与该培 养基的其它组分一起经高温高压灭菌后备用而不影响TTC的显色效果；该培养基成本低， 易推广，操作简便；菌落显色明显，易于计数。
[0014] 本发明的实施例3-实施例6分别选取了食品添加剂单体（胶体黄原胶、乳化剂 蔗糖脂肪酸酯（SE-Il))、复配蛋白饮料稳定剂（复配食品添加剂）以及植物蛋白饮料（食 品）为试样进行了显色菌落总数对比实验，从4个实施例的数据比对结果可知，本发明的菌 落显色培养基在运用中所得的菌落总数结果与国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食 品微生物学检验菌落总数测定》中所规定使用的平板计数琼脂培养基（对照组）所得的结 果差异不显著，其菌落显色为红色或浅红色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数。因为本发 明中在原有的市售平板计数琼脂中加入了蔗糖脂肪酸酯SE-11，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)，而实施例4中的样品为蔗糖脂肪酸酯SE-Il与培养基中的蔗糖脂肪酸酯为同一型 号，根据实施例4的结果对比可知，本发明的菌落显色培养基虽然加入蔗糖脂肪酸酯但也 不影响对试样蔗糖脂肪酸酯中菌落总数的检测。
[0015] 综上所述，本发明一种可高压灭菌的菌落显色培养基，其菌落显色为红色或浅红 色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数，可用于食品，食品添加剂（包括复配食品添加剂） 中的菌落总数的测定。由于其相对于平板计数器的低成本以及环保角度考虑，建议其推广， 并制成市售菌落显色培养基。
【具体实施方式】
[0016] 下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能 理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述 的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通 过市购获得的常规广品。
[0017] 实施例1 :菌落显色培养基的制备方法及组分含量确定
[0018] 在大量前期试验中，最后将加入的蔗糖脂肪酸酯（SE-Il)加入量的范围缩小到 0. 005g-0. 020g，将2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)加入量的范围缩小到0. 005g-0. 020g， 并以0.005g为单位递增做试验，确定最后蔗糖脂肪酸酯（SE-Il)以及2, 3, 5-氯化三苯基 四氮唑（TTC)加入量，及菌落显色培养基的组分确定。
[0019] 试验如下：
[0020] 培养基制备：
[0021] 第一组，该培养基每升中包含市售平板计数琼脂23. 5g，蔗糖脂肪酸酯 (SE-ll)0.00 5g，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)0.00 5g ;按上述各组分称量后，无先后顺 序溶于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH值为7. 0±0. 2,高压灭菌后备用，高压灭菌条件为： 115。。，15min〇
[0022] 第二组，该培养基每升中包含市售平板计数琼脂23. 5g，蔗糖脂肪酸酯 (SE-ll)0.00 5g，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)O. OlOg ;按上述各组分称量后，无先后顺 序溶于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH值为7. 0±0. 2,高压灭菌后备用，高压灭菌条件为： 115。。，15min〇
[0023] 第三组，该培养基每升中包含市售平板计数琼脂23. 5g，蔗糖脂肪酸酯 (SE-ll)0.00 5g，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)0.0 15g ;按上述各组分称量