等来选择样品的稀释度。本实 验由于样品粘度较高，有一定污染，所以选择1:100稀释度的样品匀液，做成对照组和试验 组。吸取ImL样品匀液于相应组别的无菌平皿内，及时将15mL~20mL冷却至46°C的培养 基（可放置于46°C ±1°C恒温水浴箱中保温）倾注到相应的平皿中，对照组内倾注对照组 培养基，实验组倾注实施例1所得培养基；并转动平皿使其混合均匀。每组做二十个平行测 定，每组都有空白对照。
[0087] 培养：待琼脂凝固后，将平皿翻转，于36°C ±1°C下培养48h±2h。
[0088] 计数、结果：依据国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落 总数测定》中6. 3菌落计数和7结果与报告进行计数与报告。两组琼脂组检测结果和数据 比对分别如下表7、表8所不：
[0089] 表7 :两组琼脂组的检测结果表
[0092] 表8 :两组琼脂组的数据比对结果表
[0094] 备注：采用数理统计学中的成组数据t检验对试验均值进行显著性差异检验，首 先进行方差齐性 F 检验，= (4. 2 X IO4V (2· 3X IO4) =0. 546<Fw.w =2. 464,说明两 组数据方差具备齐性；在α = 5%的水平下，t = 0. 321〈t3S/2，Q.Q5= 2. 024,所以两组数据 (即菌落报告数）在95%置信度下差异不显著。
[0095] 从表7和表8可以看出，本发明的菌落显色培养基在原有的市售平板计数琼脂中 加入了蔗糖脂肪酸酯SE-11，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)后，在运用中所得的菌落总数 结果与国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中所规 定使用的平板计数琼脂培养基（对照组）所得的结果差异不显著，其菌落显色为红色或浅 红色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数。
[0096] 实施例6 :
[0097] 对照组培养基（也即国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检 验菌落总数测定》中所规定使用的平板计数琼脂培养基）：将市售平板计数琼脂23. 5g溶 于1000 mL蒸馏水中，加热溶解，调节pH为7. 0±0. 2,高压灭菌后备用，高压灭菌条件为： 115。。，15min〇
[0098] 实验组：实施例2所得。
[0099] 样品稀释：称取25. Og植物蛋白饮料（液体）置盛有225mL生理盐水的无菌均质 杯内，10000r/min均质lmin，制成1:10重量体积比的样品勾液。用ImL无菌微量移液器吸 取所得样品匀液lmL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端 不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的 样品匀液。以此类推，制成相应10倍系列稀释样品匀液。
[0100] 倒平板：根据样品的物理性质（如粘度）、污染程度等来选择样品的稀释度。本实 验由于样品粘度较高，有一定污染，所以选择1:100稀释度的样品匀液，做成对照组和试验 组。吸取ImL样品匀液于相应组别的无菌平皿内，及时将15mL~20mL冷却至46°C的培养 基（可放置于46°C ±1°C恒温水浴箱中保温）倾注到相应的平皿中，对照组内倾注对照组 培养基，实验组倾注实施例1所得培养基；并转动平皿使其混合均匀。每组做二十个平行测 定，每组都有空白对照。
[0101] 培养：待琼脂凝固后，将平皿翻转，于36°C ±1°C下培养48h±2h。
[0102] 计数、结果：依据国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落 总数测定》中6. 3菌落计数和7结果与报告进行计数与报告。两组琼脂组检测结果和数据 比对分别如下表9、表10所不：
[0103] 表9 :两组琼脂组的检测结果表
[0105] 表10 :两组琼脂组的数据比对结果表
[0106] CN 105177108 A 说明书 16/17 页
[0107] 备注：采用数理统计学中的成组数据t检验对试验均值进行显著性差异检验，首 先进行方差齐性 F 检验，F=f = (1.4X lOl/ (7, 7 X 10) =OSiCF 19,19,:0.'Q5 ：(?Ι：Μ；) 464,说明两 组数据方差具备齐性；在α =5%的水平下，七=1.4\103〈七38/2，。.。5= 2.024，所以两组数 据（即菌落报告数）在95%置信度下差异不显著。
[0108] 从表9和表10可以看出，本发明的菌落显色培养基在原有的市售平板计数琼脂中 加入了蔗糖脂肪酸酯SE-11，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)后，在运用中所得的菌落总数 结果与国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中所规 定使用的平板计数琼脂培养基（对照组）所得的结果差异不显著，其菌落显色为红色或浅 红色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数。
[0109] 从实施例3-实施例6分别选取了食品添加剂单体（胶体黄原胶、乳化剂蔗糖脂肪 酸酯（SE-Il))、复配蛋白饮料稳定剂（复配食品添加剂）以及植物蛋白饮料（食品）为试 样进行了显色菌落总数对比实验，从4个实施例的数据比对结果可知，本发明的菌落显色 培养基在运用中所得的菌落总数结果与国标GB4789. 2-2010《食品安全国家标准食品微生 物学检验菌落总数测定》中所规定使用的平板计数琼脂培养基（对照组）所得的结果差异 不显著，其菌落显色为红色或浅红色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数。因为本发明中在 原有的市售平板计数琼脂中加入了蔗糖脂肪酸酯SE-11，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑（TTC)， 而实施例4中的样品为蔗糖脂肪酸酯SE-Il与培养基中的蔗糖脂肪酸酯为同一型号，根据 实施例4的结果对比可知，本发明的菌落显色培养基虽然加入蔗糖脂肪酸酯但也不影响对 试样蔗糖脂肪酸酯中菌落总数的检测。
[0110] 综上所述，本发明一种可高压灭菌的菌落显色培养基，其菌落显色为红色或浅红 色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数，可用于食品，食品添加剂（包括复配食品添加剂） 中的菌落总数的测定。由于其相对于平板计数器的低成本以及环保角度考虑，建议其推广， 并制成市售菌落显色培养基。
[0111] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨 的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种可高压灭菌的菌落显色培养基，其特征在于，该培养基每升中包含琼脂23. 5g， 蔗糖脂肪酸酯SE-Il0. 005-0. 015g，2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑0. 005-0. 015g。2. 权利要求1所述菌落显色培养基，其特征在于，将各组分按照配比溶于蒸馏水中，煮 沸溶解，用lmol/LHCL或lmol/LNaOH调节其pH值为7. 0±0. 2，115°C高压灭菌15min后 制备得到。3. 权利要求1所述菌落显色培养基用于测定食品、食品添加剂中菌落数的用途。
【专利摘要】本发明公开了一种可高压灭菌的菌落显色培养基、制备方法及用途。该培养基每升中包含市售平板计数琼脂23.5g，蔗糖脂肪酸酯SE-11？0.005-0.015g，2,3,5-氯化三苯基四氮唑0.005-0.015g。可用于测定食品、食品添加剂中的菌落数，其菌落显色为红色或浅红色，边界清晰，菌落显色明显，易于计数，可以将其推广至实际检测中，方便试剂检测工作。
【IPC分类】C12Q1/06
【公开号】CN105177108
【申请号】
【发明人】蒋东晋, 范婷婷, 洪春梅, 孙金玉
【申请人】厦门欧凯科技有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月15日