电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂胶中五种化学污染物的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及蜂胶中化学污染物的检测方法，具体地指一种电喷雾萃取电离质谱直 接检测蜂胶中五种化学污染物的方法。
【背景技术】
[0002 ]蜂胶(Propo 1 i s)是蜜蜂从杨属、桦属、柳属、栎树、马栗及针叶树等胶源植物上采 集的树脂，并由蜜蜂混入蜂蜡，经腺体分泌物形成的的粘性物质。蜂胶是蜜蜂用于维持整个 群体健康的有效物质，一个5万~6万只的蜂群，一年只能生产蜂胶70~100g，因此有"紫色 黄金"之称。蜂胶因其多样化的生物和药理活性，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗癌、美容养颜 和促进细胞再生等特性，被广泛应用于医药、化妆品和食品工业。
[0003]蜂胶中化学污染物的残留，使得我国蜂胶出口屡屡受阻，进口国纷纷采取了封关、 扣留甚至销毁产品等措施，给我国养蜂业造成巨大的影响与损失。蜂箱喷洒杀螨剂等化学 防护是蜂胶化学污染物的主要来源，此外，蜜蜂采集含有化学污染物的胶原植物、鲜花等也 会带入化学污染物。为保护消费者健康和保证蜂胶质量，对蜂胶中化学污染物的分析是必 要的。目前蜂胶中化学污染物的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效 液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)等，它们有较高的灵敏度，但是前期复 杂的样品预处理耗时长，不能满足快速高通量检测的需要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的就是要克服现有技术所存在的不足，提供一种电喷雾萃取电离质谱 直接检测蜂胶中五种化学污染物的方法，无需复杂样品预处理的条件下，能对蜂胶中的五 种化学污染物进行直接、快速检测。
[0005] 为实现上述目的，本发明所设计的电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂胶中五种化学 污染物的方法，包括以下步骤：
[0006] 1)标准品溶液的配制:分别准确称取敌敌畏、乐果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒磷溶 解在甲醇中，配成浓度为l〇〇yg/mL的含有单一化学污染物的标准溶液，于_4°C避光保存；
[0007] 2)蜂胶酊的配制:准确称取6.00g蜂胶浸膏，溶于100mL质量分数为70%乙醇中，过 滤，密封、避光常温保存，再用质量分数为70%乙醇稀释20倍，得到蜂胶酊，备用；
[0008] 3)加标蜂胶酊的配制：取五种标准品溶解在蜂胶酊中，配成浓度为lOyg/mL含有五 种化学污染物的混标溶液，所述五种化学污染物为敌敌畏、乐果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒 磷，取l〇yg/mL的混标溶液，用蜂胶酊稀释成浓度为lyg/mL的混标蜂胶酊;在定性和优化实 验时，用蜂胶酊稀释成浓度为500ng/mL的混标蜂胶酊溶液；
[0009] 4)电喷雾萃取电离质谱检测:将EESI-MS设置为正离子检测模式，质谱扫描范围m/ z 50~400;萃取剂为甲醇：甲酸，体积比为9:1，萃取剂流速5yL/min;电离电压3.5kV;雾化 气为N2，纯度为99.999%，压力为1.2MPa;样品流速7yL/min;样品端辅助气压为1.4MPa;离 子传输管温度为150°C;碰撞诱导解离实验时，敌敌畏母离子隔离宽度为l.ODa，碰撞持续时 间为30ms;两喷雾通道夹角保持60°，样品通道口与质谱口水平夹角保持150°，两喷雾通道 口与质谱口距离为0.5cm，其它参数采用LTQ-MS系统自动优化；
[00?0] 5)定性分析:如果在m/z 223的二级碎片离子中有m/z 109和m/z 145离子信号峰， 说明待测蜂胶样品中含有敌敌畏;如果在m/z 230的二级碎片离子中有m/z 182和m/z 199 离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有乐果；如果在m/z 324的二级碎片离子中有m/z 125 和m/z 292离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有甲基毒死蜱;如果毒死蜱(m/z 352)的二 级碎片离子中有m/z 296和m/z 324离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有毒死蜱;如果在 m/z 363的二级碎片离子中有m/z 307和m/z 335离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有绳 毒磷；
[0011] 6)定量分析:分别选择m/z 223的二级特征离子m/z 109、m/z 230的二级特征离子 m/z 199、m/z 324的二级特征离子m/z 292、毒死蜱(m/z 352)二级特征离子m/z 324、m/z 363的二级特征离子m/z 335作为定量离子，进行定量分析，以加标蜂胶羾的浓度为横坐标， 以五种化学污染物定量离子的净响应信号平均值为纵坐标绘制标准曲线;根据标准方程， 及待测蜂胶样品中定量离子的平均信号强度，计算待测蜂胶样品中五种化学污染物的含 量。
[0012] 本发明的有益效果在于:本发明借助电喷雾萃取电离(Extractive electrospray ionization)源和LTQ-XL型线性离子阱质谱仪进行蜂胶样品化学污染物的检测。具有以下 优点：
[0013] (1)采用电喷雾萃取电离质谱同时检测蜂胶中五种化学污染物，样品用量少；
[0014] (2)分析速度快，可实现高通量和在线检测。对常见蜂胶中五种化学污染物直接分 析检测，无需复杂样品预处理，单个样品检测时间不到lmin;
[0015] (3)绿色技术。对产品、操作人员和工作环境无毒无污染；
[0016] (4)灵敏度高。采用五种化学污染物的二级定量离子进行定量分析，避免假阳性， 大大提高了检测的准确性，化学污染物的检测限为ng级。
[0017] 本发明无需对待测样品进行复杂预处理，能够承受蜂胶复杂基体的影响，实现对 蜂胶中化学污染物的直接快速检测，改善现有分析技术中繁琐的样品预处理、分析耗时长 等缺陷，有望为蜂胶中化学污染物检测分析提供一种新的检测途径。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明500ng/mL的混标蜂胶酊溶液的一级谱图。
[0019]图2a为本发明敌敌畏分别在甲醇溶液和蜂胶酊溶液中的EESI_MSn二级质谱图。 [0020]图2b为本发明乐果分别在甲醇溶液和蜂胶酊溶液中的EESI-MSn二级质谱图。
[0021]图2c为本发明甲基毒死蜱分别在甲醇溶液和蜂胶酊溶液中的EESI-MSn:级质谱 图。
[0022]图2d为本发明毒死蜱分别在甲醇溶液和蜂胶酊溶液中的EESI_MSn二级质谱图。 [0023]图2e为本发明蝇毒磷分别在甲醇溶液和蜂胶酊溶液中的EESI-MS"二级质谱图。 [0024]图3为本发明萃取剂的优化图。
[0025]图4a为本发明电喷雾电压优化图。
[0026]图4b为本发明样品端辅助气压优化图。
[0027]图4c为本发明雾化气压力优化图。
[0028]图4d为本发明样品流速优化图。
[0029]图4e为本发明萃取剂流速优化图。
[0030]图5a为本发明敌敌畏的工作曲线。
[0031]图5b为本发明乐果的工作曲线。
[0032]图5c为本发明甲基毒死蜱的工作曲线。
[0033]图5d为本发明毒死蜱的工作曲线。
[0034]图5e为本发明蝇毒磷的工作曲线。
【具体实施方式】
[0035]为了更好地解释本发明，以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细说 明，但它们不对本发明构成限定。
[0036]本发明使用的质谱仪为美国Finnigan公司的LTQ-XL型线性离子阱质谱仪，数据处 理系统为美国Finnigan公司的Xcalibur数据处理系统。
[0037] EESI离子源，由江西省质谱科学与仪器重点实验室自行研制；精密电子天平 (Mettler Toledo)，纯水制备仪(赛默飞世尔科技）；甲醇(色谱纯，SK CHEMICALS)，乙醇(色 谱纯，西陇化工股份有限公司），甲酸(分析纯，天津市福晨化学试剂）；标准品为敌敌畏、乐 果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒磷(纯度为99 %，阿拉丁/百灵威试剂公司）。
[0038] 采用电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂胶中五种化学污染物的方法，包括以下步 骤：
[0039] 1)标准品溶液的配制:分别准确称取敌敌畏、乐果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒磷溶 解在甲醇中，配成浓度为l〇〇yg/mL的含有单一化学污染物的标准溶液，于_4°C避光保存；
[0040] 2)蜂胶酊的配制:准确称取6.00g蜂胶浸膏，溶于100mL质量分数为70%乙醇中，过 滤，密封、避光常温保存，再用质量分数为70%乙醇稀释20倍，得到蜂胶酊，备用；
[0041] 3)加标蜂胶酊的配制:取五种标准品溶解在蜂胶酊中，配成浓度为lOyg/mL含有五 种化学污染物的混标溶液，所述五种化学污染物为敌敌畏、乐果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒 磷，取l〇yg/mL的混标溶液，用蜂胶酊稀释成浓度为lyg/mL的混标蜂胶酊;在定性和优化实 验时，用蜂胶酊稀释成浓度为500ng/mL的混标蜂胶酊溶液；
[0042] 4)电喷雾萃取电离质谱检测条件:将EESI-MS设置为正离子检测模式，质谱扫描范 围m/z 50~400;萃取剂为甲醇：甲酸，体积比为9:1，萃取剂流速5yL/min;电离电压3.5kV; 雾化气为N2，纯度为99.999 %，压力为1 . 2MPa ;样品流速7yL/min ;样品端辅助气压为 1.4MPa;离子传输管温度为150 °C ;碰撞诱导解离实验时，敌敌畏母离子隔离宽度为1. ODa， 碰撞持续时间为30ms;为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾 通道夹角保持60°，样品通道口与质谱口水平夹角保持150°，两喷雾通道口与质谱口距离为 0 · 5cm，其它参数采用LTQ-MS系统自动优化