；
[0043] 5)定性分析:如果在m/z 223的二级碎片离子中有m/z 109和m/z 145离子信号峰， 说明待测蜂胶样品中含有敌敌畏;如果在m/z 230的二级碎片离子中有m/z 182和m/z 199 离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有乐果；如果在m/z 324的二级碎片离子中有m/z 125 和m/z 292离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有甲基毒死蜱;如果毒死蜱(m/z 352)的二 级碎片离子中有m/z 296和m/z 324离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有毒死蜱;如果在 m/z 363的二级碎片离子中有m/z 307和m/z 335离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有绳 毒磷；
[0044] 6)定量分析:分别选择m/z 223的二级特征离子m/z 109、m/z 230的二级特征离子 m/z 199、m/z 324的二级特征离子m/z 292、毒死蜱(m/z 352)二级特征离子m/z 324、m/z 363的二级特征离子m/z 335作为定量离子，进行定量分析，以加标蜂胶羾的浓度为横坐标， 以五种化学污染物定量离子的净响应信号平均值为纵坐标绘制标准曲线;根据标准方程， 及待测蜂胶样品中定量离子的平均信号强度，计算待测蜂胶样品中五种化学污染物的含 量。
[0045]按照上述实验方法对8种市售蜂胶商品进行EESI-MS检测，其中包括2种蜂胶软胶 囊、1种蜂胶酊剂和5种蜂胶。蜂胶软胶囊用70%乙醇稀释20倍进行质谱检测;蜂胶酊剂直接 进行质谱检测；蜂胶提取为浸膏，按照该实验方法配制成蜂胶酊，进行质谱检测，每个样品 平行测定6次。结果显示，8种市售蜂胶产品均未检出五种化学污染物。
[0046]分析方法的可靠性验证
[0047] 本实验使用EESI-MS装置对五种化学污染物的甲醇和蜂胶酊溶液(500ng/mL)进行 直接质谱检测，结果如图1、2所示。图1为五种混合农药的一级质谱图，图2a、2b、2c、2d、2eS 五种化学污染物分别在甲醇溶液和蜂胶酊溶液中的EESI-MSn二级质谱图，由图2可以看出， 五种化学污染物在甲醇中和蜂胶酊溶液中的二级谱图基本吻合。因此，如果在实际样品中 能检测到信号峰m/z 223,并在MS/MS谱图中观察到m/z 109和m/z 145,则可以判断该样品 中含有敌敌畏；如果在实际样品中能检测到信号峰m/z 230，并在MS/MS谱图中观察到m/z 182和m/z 199,则可以判断该样品中含有乐果；如果在实际样品中能检测到信号峰m/z 324，并在MS/MS谱图中观察到m/z 125和m/z 292，则可以判断该样品中含有甲基毒死蜱;如 果在实际样品中能检测到信号峰m/z 352,并在MS/MS谱图中观察到m/z 296和m/z 324,则 可以判断该样品中含有毒死蜱;如果在实际样品中能检测到信号峰m/z 363,并在MS/MS谱 图中观察到m/z 307和m/z 335,则可以判断该样品中含有蝇毒磷。
[0048] 为排除检测时的假阳性，以甲基毒死蜱为例进行条件优化，采用甲基毒死蜱的二 级特征离子m/z 292为目标信号，为提高其信号强度，本实验进行了萃取剂的优化，以 500ng/mL的甲基毒死蜱加标蜂胶酊溶液为实验对象，进行甲酸体积（0.1%，0.5%，1%， 5%，10%，20%)的优化实验，研究二级质谱m/z 292信号强度的变化趋势。如图3的结果显 示：10 %的甲酸作为萃取剂时，蜂胶中甲基毒死蜱二级特征离子m/z 292信号强度最高。即 本实验最佳萃取剂为甲醇/甲酸(9:1，v/v)。
[0049] 本实验进行了离子源条件的探索，根据甲基毒死蜱标准的质谱行为，在正离子模 式下，均选择甲基毒死蜱二级特征离子m/z 292的净响应信号强度来表示对甲基毒死蜱分 子的检测效率。如图4a所示，电压太小(2kV)时，信号强度较低，随着电压的增大，目标信号 强度迅速升高，当电压太大(大于3.5kV)时，信号强度反而有所降低，在3.5kV时达到最佳； 如图4b所示，随着样品端辅助气压的增大，目标信号强度也随之增大，当气压超过一定值 (大于1.4MPa)时，目标信号强度反而会下降，在1.4MPa时达到最佳;如图4c所示，随着雾化 气体压力的增大，目标信号强度也随之增大，当气压超过一定值(大于1.2MPa)时，大部分离 子会湮灭在质谱口边缘，目标信号强度也会大幅度下降，在1.2MPa时达到最佳；如图4d所 不，样品流速在YlA/min时，目标彳目号最尚；如图4e所不，萃取剂流速在5yL/min时，目标彳目号 强度最高，萃取效率最大。
[0050]按照上述实验方法和最佳条件进行加标蜂胶酊化学污染物的直接质谱检测，以确 定本方法的线性范围和检出限。为了排除假阳性信号，分别选择敌敌畏(m/z 223)二级特征 离子m/z 109、乐果(m/z 230)二级特征离子m/z 199、毒死蜱(m/z 352)二级特征离子m/z 324、甲基毒死蜱(m/z 324)二级特征离子m/z 292、绳毒磷(m/z 363)二级特征离子m/z 335 作为定量离子，进行定量分析，同时扣除相应的空白背景，每个浓度的样品平行测定6次；以 加标蜂胶酊的浓度为横坐标，以化学污染物定量离子的净响应信号平均值为纵坐标绘制工 作曲线，结果如图5 &、513、5(：、5(1、56所示。根据3/^=3儿00 = 〇3〇/3，（(3为标准品的浓度，〇为 标准偏差，S为净相应信号强度平均值），得到五种加标蜂胶酊的检出限，如表1所示。
[0051 ] 为了验证此工作曲线的可信性，进行回收率实验。对浓度为20、和100和800ng/mL 的加标蜂胶酊进行实验，每个浓度的加标蜂胶酊溶液平行测定6次，五种化学污染物每个加 标浓度的回收率及精密度，如表1所示。
[0052] 表1:
[0053]
【主权项】
1. 一种电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂胶中五种化学污染物的方法，其特征在于，包 括以下步骤： 1) 标准品溶液的配制:分别准确称取敌敌畏、乐果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒磷溶解在 甲醇中，配成浓度为100yg/mL的含有单一化学污染物的标准溶液，于-4°c避光保存； 2) 蜂胶酊的配制：准确称取6.00g蜂胶浸膏，溶于100mL质量分数为70%乙醇中，过滤， 密封、避光常温保存，再用质量分数为70%乙醇稀释20倍，得到蜂胶酊，备用； 3) 加标蜂胶酊的配制:取五种标准品溶解在蜂胶酊中，配成浓度为lOyg/mL含有五种化 学污染物的混标溶液，所述五种化学污染物为敌敌畏、乐果、甲基毒死蜱、毒死蜱、蝇毒磷， 取lOyg/mL的混标溶液，用蜂胶酊稀释成浓度为lyg/mL的混标蜂胶酊;在定性和优化实验 时，用蜂胶酊稀释成浓度为500ng/mL的混标蜂胶酊溶液； 4) 电喷雾萃取电离质谱检测:将EESI-MS设置为正离子检测模式，质谱扫描范围m/z 50 ~400;萃取剂为甲醇：甲酸，体积比为9:1，萃取剂流速5yL/min;电离电压3.5kV;雾化气为 N2，纯度为99.999 %，压力为1.2MPa;样品流速7yL/min;样品端辅助气压为1.4MPa;离子传 输管温度为150°C;碰撞诱导解离实验时，敌敌畏母离子隔离宽度为l.ODa，碰撞持续时间为 30ms;两喷雾通道夹角保持60°，样品通道口与质谱口水平夹角保持150°，两喷雾通道口与 质谱口距离为0.5cm，其它参数采用LTQ-MS系统自动优化； 5) 定性分析:如果在m/z 223的二级碎片离子中有m/z 109和m/z 145离子信号峰，说明 待测蜂胶样品中含有敌敌畏；如果在m/z 230的二级碎片离子中有m/z 182和m/z 199离子 信号峰，说明待测蜂胶样品中含有乐果;如果在m/z 324的二级碎片离子中有m/z 125和m/z 292离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有甲基毒死蜱;如果毒死蜱(m/z 352)的二级碎片 离子中有m/z 296和m/z 324离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有毒死蜱;如果在m/z 363 的二级碎片离子中有m/z 307和m/z 335离子信号峰，说明待测蜂胶样品中含有蝇毒磷； 6) 定量分析:分别选择m/z 223的二级特征离子m/z 109、m/z 230的二级特征离子m/z 199、m/z 324的二级特征离子m/z 292、毒死蜱(m/z 352)二级特征离子m/z 324、m/z 363的 二级特征离子m/z 335作为定量离子，进行定量分析，以加标蜂胶酊的浓度为横坐标，以五 种化学污染物定量离子的净响应信号平均值为纵坐标绘制标准曲线;根据标准方程，及待 测蜂胶样品中定量离子的平均信号强度，计算待测蜂胶样品中五种化学污染物的含量。
【专利摘要】本发明属于检测技术领域，公开了一种电喷雾萃取电离质谱直接检测蜂胶中五种化学污染物的方法。本发明包括以下步骤：1)标准品溶液的配制；2)蜂胶酊的配制；3)加标蜂胶酊的配制；4)电喷雾萃取电离质谱检测；5)定性分析；6)定量分析。本发明的检测方法样品用量少；分析速度快，可实现高通量和在线检测。对常见蜂胶化学污染物直接分析检测，无需复杂样品预处理，单个样品检测时间不到1min。对产品、操作人员和工作环境无毒无污染；灵敏度高。本发明无需对待测样品进行复杂预处理，能够承受蜂胶复杂基体的影响，实现对蜂胶中化学污染物的直接快速检测，改善现有分析技术中繁琐的样品预处理、分析耗时长等缺陷。
【IPC分类】G01N27/62
【公开号】CN105606693
【申请号】CN201610144597
【发明人】罗丽萍, 陈焕文, 郭夏丽, 罗火林, 于腾辉, 刘星星, 方小伟
【申请人】南昌大学
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年3月15日