水氯化钙
0.44 g/L、四水硫酸锰22.3 mg/L、硼酸6.2 mg/L、七水硫酸锌8.6 1^/1、碘化钾0.83 mg/L、二水钼酸钠0.25 mg/L、五水硫酸铜0.025 mg/L、六水氯化钴0.025 mg/L,乙二胺四乙酸钠37.3 mg/L、七水硫酸亚铁27.8 mg/L、甘氨酸2 mg/L、烟酸I mg/L、盐酸硫胺素10 mg/L、盐酸吡哆醇I mg/L、肌醇100 mg/L。此外，附加两个植物激素组合分别为2，4-二氯苯氧乙酸0.1 mg/L和激动素0.1 mg/L，以及萘乙酸0.5 mg/L和激动素0.1 mg/L。附加3% ( W/V)蔗糖，0.9%( W/V)琼脂。采用高压蒸汽灭菌、灭菌压力为1.2 kg/cm2，温度为121 V,灭菌时间为15~20 min。
[0019]将接种了花药的培养皿放入28 °C的恒温培养箱中黑暗培养，4周后可见少量胚状体和愈伤组织；随后继代于分化培养基上，继续黑暗培养直至可见明显子叶的成熟胚状体。剥离成熟胚状体接种于生根培养基上进行生根培养；待幼苗长出发达根系后进行水培炼苗，随后移栽至土钵中；植株长势稳健后进行加倍处理，脱脂棉蘸取0.25%秋水仙素于生长点和腋芽处，处理48小时，期间添加秋水仙素保湿。可考虑加倍2-3次，以保证加倍效果。2011年，对6个新疆制干辣椒品种按照本方法进行了花药培养，6个品种均有愈伤组织出现，最高愈伤组织诱导率为42.83% ;4个品种分化出了胚状体，最高出胚率为10.38%ο诱导培养4周后统计愈伤组织诱导率，分化调控培养4周后统计出胚率，生根培养2周后统计正常苗率。
[0020]愈伤组织诱导率(％)=形成愈伤组织的花药数/接种花药数X 100%。
[0021 ] 结果:6个品种在2，4-D+KT和NAA+KT植物激素组合下的平均愈伤组织诱导率分别为 10.53% 和 23.18%ο
[0022]出胚率(％ )=分化胚状体数/接种花药数X 100%。
[0023]结果:4个品种在2，4-D+KT和NAA+KT植物激素组合下的平均出胚率分别为
2.53% 和 5.39%ο
[0024]正常苗率(％)=正常苗数/子叶胚数X 100%。
[0025]结果:4个品种在2，4-D+KT和NAA+KT植物激素组合下的平均正常苗率分别为52.18% 和 72.65%。
[0026]以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
【主权项】
1.一种通过花药培养获得制干辣椒单倍体植株的方法，其特征在于，包括下述步骤:(I)取样，选择花瓣与花萼近等长或根据花药颜色以1/3为紫色的花蕾，4°C冰箱预处理1~7天；(2)消毒；(3)剥取花药；(4)接种，每皿放30个花药，Parafilm膜封口 ;(5)诱导培养，28 °C的恒温培养箱中黑暗培养；(6)分化调控，诱导培养4周后继代于分化培养基上，继续黑暗培养直至获得可见明显子叶的成熟胚状体；(7)生根培养，剥离成熟胚状体接种于生根培养基上进行生根培养；(8)驯化移栽，待幼苗长出发达根系后进行驯化，随后移栽至土钵中；(9)加倍处理，植株长势稳健后进行加倍处理。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于剥取花药过程为将消过毒的花蕾倒在无菌滤纸上，用两把尖头小镊子一把夹住花蕾底部，一把镊子将花药部分拔出，剥开花瓣取出花药。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于接种中使用的诱导培养基为MSB培养基附加了 0.1 mg/L 2，4-D 和 0.1 mg/L KT 或 0.5 mg/L NAA+0.1 mg/L KT.4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于分化调控过程中使用的分化培养基为MSB附加 0.05 mg/L 2，4-D 和 0.1 mg/L KT 或 0.3 mg/L NAA+0.1 mg/L KT.5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于生根培养过程中使用的生根培养基为无机物含量减半，有机物含量不变的1/2MSB培养基。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于加倍处理过程为取脱脂棉蘸取0.25%秋水仙素于生长点和腋芽处，处理48小时，期间添加秋水仙素保湿，可考虑加倍2-3次，以保证加倍效果。7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于MSB培养基的成分为:硝酸钾1.9 g/L、硫酸铵1.65 g/L、磷酸二氢钾0.17 g/L、七水硫酸镁0.37 g/L、二水氯化钙0.44 g/L、四水硫酸锰22.3 mg/L、硼酸6.2 mg/L、七水硫酸锌8.6 mg/L、碘化钾0.83 mg/L、二水钼酸钠.0.25 mg/L、五水硫酸铜0.025 mg/L、六水氯化钴0.025 mg/L、乙二胺四乙酸钠37.3 mg/L,七水硫酸亚铁27.8 mg/L、甘氨酸2 mg/L、烟酸I mg/L、盐酸硫胺素10 mg/L、盐酸卩比卩多醇Img/L、肌醇 100 mg/L、鹿糖 30 g/L、琼脂 9g/L，pH 为 5.8~6.0。
【专利摘要】本发明公开了一种通过花药培养获得制干辣椒单倍体植株的方法，属于植物细胞工程技术领域。该培养方法包括如下步骤：（1）取花蕾，4℃预处理1~7天；（2）花蕾消毒；（3）剥取花药；（4）接种；（5）愈伤组织和胚状体诱导；（6）分化调控；（7）生根培养；（8）驯化与移栽；（9）加倍处理。本发明中基本培养基为改良的MSB培养基，由MS无机盐和B5有机物构成，有利于胚状体和再生植株根的分化，本发明为辣椒花药培养获得单倍体提供了一种方便、快捷和有效的方法，具有较好的社会效益和经济效益。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105638455
【申请号】
【发明人】朱华国, 赖黎丽, 孙杰
【申请人】石河子大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2014年11月14日