[0012] 另外，由于不同的芽孢杆菌与湿润剂，分散剂等助剂的相容性，载体对各类芽孢杆 菌吸附性各不相同，将现有的芽孢杆菌可湿性粉剂的配方或制备工艺也无法用于制备含有 芽孢萌发剂的短短芽孢杆菌可湿性粉剂;可湿性粉剂中有效菌的吸附量，存活率，对有害菌 的防治效果及可湿性粉剂量的稳定性差异较大，其整个可湿性粉剂的制备方法必须全盘考 虑各载体吸附能力，对短短芽孢杆菌的干燥过程中保护作用，湿润剂，分散剂对可湿性粉剂 的悬浮率，湿润时间的影响，并且对芽孢萌发剂进行全面的筛选才能够得到湿润时间短，悬 浮率高，芽孢保存时间久，使用后芽孢能快速萌发的，防效好短短芽孢杆菌可湿性粉剂。
【发明内容】
[0013] 针对上述现有技术的不足，提供一种含有芽孢萌发剂的短短芽孢杆菌可湿性粉剂 及其制备方法，芽孢萌发剂能使短短芽孢杆菌可湿性粉剂融入水后，短短芽孢能快速萌发， 并大大提高短短芽孢的萌发率，其制备的短短芽孢杆菌可湿性粉剂芽孢含量为不低于100 亿CFU/克，悬浮率不低于85%，润湿时间不高于80S，细度粉碎过400目筛，水分含量不高于 5%，制备方法稳定。
[0014] 为了达到上述目的，一种短短芽孢杆菌可湿性粉剂下列重量分组成：短短芽孢杆 菌发酵液40-70份;填料：白炭黑20-30份;润湿剂:十二烷基硫酸钠1-4份;分散剂:T型木质 素0.2-1份;芽孢萌发剂:肌苷0.1-0.5份，果糖0.1-0.5份;紫外保护剂:卵磷脂0.5-2份，β-糊精0.2-1份;干燥保护剂:麦芽糖1-4份，蔗糖0.2-1份。
[0015] -种短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，由以下几步骤组成： 一、短短芽孢杆菌发酵液的制备 取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，30Γ培养48小时。在平板下挑取单 个菌落接种至50毫升LB培养基中，在培养箱中30°C震荡培养24小时。种子采用5%的接种量， 接种至5L大三角瓶中的芽孢杆菌液体培养基，装液量为2L，30 °C震荡培养16-28小时，检测 其菌液浓度，菌液含量超过60亿/毫升，即可作为短短芽孢杆菌种子液。将短短芽孢杆菌种 子液接种至1000L的发酵罐中，装液量为600L的发酵培养基，通气量为前16小时为每分钟液 气比为1:0.6，其后通气量为1:1;开搅拌，转速为160r/min;培养温度前24小时为30°C，其 后，每4小时将温度提高1°C，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过80亿CFU/ml，即可结束发 酵，作为短短芽孢杆菌发酵液； 其中，所述LB培养基:蛋白胨IOg，酵母膏5g，氯化钠 IOg，水1000 mL，pH7.2，固体培养基 中加入琼脂2%。其中，所述芽孢杆菌液体培养基:葡萄糖10g/L，可溶性淀粉8 g/L，豆柏粉 15 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 8/1，？!17.2。其中，所述的发酵培养基:葡萄糖58/1，玉米粉2〇8/1，豆柏粉5〇8/1，玉米浆 粉10 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L， pH7.2。各培养基灭菌的条件为:0.10-0.15MPa，121°C灭菌30分钟； 二、 将短短芽孢杆菌发酵液40-70份;填料：白炭黑20-30份;紫外保护剂:卵磷脂0.5-2 份，β-糊精0.2-1份;干燥保护剂:麦芽糖1-4份，鹿糖0.2-1份，混勾后喷雾干燥，得到短短芽 孢杆菌粉剂； 三、 将润湿剂:十二烷基硫酸钠1-4份;分散剂:T型木质素0.2-1份;芽孢萌发剂:肌苷 0.1-0.5份，果糖0.1-0.5份;混匀得到短短芽孢杆菌的助剂； 四、 将步骤二与步骤三所得到的短短芽孢杆菌粉剂与助剂混匀并过通过气流粉碎机粉 碎过400目筛，检测其芽孢含量不低于100亿cfu/g，悬浮率不低于85%，润湿时间不高于80s， 水份含量不高于5%，真空包装，即可得到短短芽孢杆菌可湿性粉剂。
[0016] 其中，短短芽孢杆菌可湿性粉剂最佳重量份组成为： 短短芽孢杆菌发酵液60份;填料：白炭黑25份;润湿剂:十二烷基硫酸钠3份;分散剂:T 型木质素0.5份;芽孢萌发剂:肌苷0.2份，果糖0.4份;紫外保护剂：卵磷脂1.5份，β-糊精 〇. 8份;干燥保护剂:麦芽糖3份，蔗糖0.6份。
[0017] 自然界中芽孢萌发受外源营养物质的影响，这类营养物质被称之为"萌发剂"，通 常情况下，芽孢和促进萌发的芽孢萌发剂混合后数秒钟之内，萌发剂快速跨过芽孢衣和皮 层到达芽孢内膜的表面，与位于芽孢内膜上的受体蛋白相互作用，激发芽孢进入萌发状态， 接着启动一连串萌发事件，之后的萌发过程不会因移走萌发剂而停止。本发明可湿性粉剂 中含有芽孢萌发剂:肌苷，果糖，是从苷氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏 氨酸，蛋氨酸，胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，天冬氨酸，谷氨酸，赖氨酸，精氨酸，苯丙氨酸， 酪氨酸，色氨酸，组氨酸，脯氨酸，肌苷，2,6吡啶二羧钙，果糖中进行单因素试验，及两两组 合性试验得到的具有明显诱导短短芽孢萌发的萌发剂。经过试验，本发明的短短芽孢杆菌 可湿性粉剂与水按1:100的比例进行润湿混合均匀，此时的芽孢萌发剂能充分与芽孢接触 后，从而促使其快速萌发，经过试验，30分钟后，芽孢萌发率已经达到80%以上，而未加芽孢 萌发剂的短短芽孢在4小时后，其芽孢萌发率只达到了 50%左右。
[0018] 本发明人通过对载体(如膨润土，滑石粉，高岭土，硅藻土，白炭黑，磷矿粉，轻质碳 酸钙）、助剂(润湿剂和分散剂）（聚乙烯醇，聚乙二醇，CMC-Na，吐温-60，十二烷基苯磺酸钠， T型木质素，十二烷基硫酸钠，茶皂素 ，Morwet EFW，Morwet D425，My100 ，D110，阿拉伯权胶， 2_萘磺酸甲醛聚合物钠盐，辛基酚聚氧乙烯醚，二异辛基琥珀酸酯磺酸钠，甲基纤维素，木 质素磺酸钠)填料(硅藻土，高岭土，膨润土，白炭黑，轻质碳酸钙，滑石粉）、紫外线保护剂 (抗坏血酸，糊精，十二烷基苯磺酸钠，刚果红，羧甲基纤维素，卵磷脂），干燥保护剂(脱脂奶 粉，蔗糖，谷氨酸钠，麦芽糖，甘露糖，甲基纤维素等)进行筛选，其每种助剂对短短芽孢杆菌 的芽孢存活，悬浮性，湿润性进行试验，最后通过多轮单因素与正交试验确定短短芽孢杆菌 可湿性粉剂的配方。通过验证，本发明的短短芽孢杆菌可湿性粉剂在20-25 °C下保存一年， 其芽孢存活率还可达到90亿CFU/克。
[0019] 本发明的可湿性粉剂采有真空包装，减少芽孢与空气的接触，降低了其萌发的机 率。
[0020] 本发明的可湿性粉剂的水分含量低于5%，低水分含量的可湿性粉剂中即使含有芽 孢萌发剂(肌苷与果糖），对其贮存过程中的芽孢活性也没有明显的影响，没有减少其在贮 存过程中的芽孢。
[0021] 本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果： 这是国内首次将短短芽孢杆菌的芽孢萌发剂加入短短芽孢杆菌可湿剂进行工业化生 产，大大提升了芽孢萌发速率与萌发率，解决了因为芽孢萌发慢，萌发率低而导致的防治效 果差，效果不稳定的问题，减少了短短芽孢杆菌的用量，降低了生产成本； 提供一种含芽孢萌发剂的检测其芽孢含量不低于100亿cfu/g，悬浮率不低于85%，润湿 时间不高于80s，水分含量低于5%，真空包装的短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法。
【具体实施方式】
[0022] 本发明实质性特点可从下述实施例中得以体现，但这些实施例仅作为说明，而不 是对本发明进行限制。
[0023] 实施例1 一种短短芽孢杆菌可湿性粉剂下列重量分组成:短短芽孢杆菌发酵液60份;填料：白炭 黑25份;润湿剂:十二烷基硫酸钠3份;分散剂:T型木质素0.5份;芽孢萌发剂:肌苷0.2份， 果糖〇. 4份;紫外保护剂:卵磷脂1.5份，β-糊精0.8份;干燥保护剂:麦芽糖3份，鹿糖0.6份。
[0024] -种短短芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，由以下几步骤组成： 一、 短短芽孢杆菌发酵液的制备 取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，30Γ培养48小时。在平板下挑取单 个菌落接种至50