混合液在30_35°C下真空旋蒸至无醇味儿，用盐酸调节上述混 合液的pH至4,过滤后用1/2体积的乙酸乙酯萃取两次，取酯相在30°C下旋蒸除去乙 酸乙酯；用PH6. 5的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氢氧化钠将其pH调整到6. 5后上 XAD18(〇80X350mm)层析柱，上柱后先用3BV水洗脱除杂，再用10%的乙醇水溶液将辛弗 林洗脱下来，分步收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于95%的洗脱液混合， XAD18树脂柱提取收率为93. 4%，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
[0034] 实施例3
[0035] 取1kg柑橘皮渣，水洗后滤干，用3L 90% (v/v)乙醇在70°C下浸泡提取lh后，过 滤取上清液，重复提取一次，合并两次上清液，在30-35°C下真空旋蒸至无醇味儿，得到粗提 物浓缩液。
[0036] 用盐酸调节上述浓缩液的pH至3. 5,过滤后用粗提物浓缩液的1/2体积的乙酸乙 酯萃取两次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH为3. 5的蒸馏水，振荡混合后取酯相在30°C下 旋蒸除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用盐酸将 其pH调整到3. 5。
[0037] 将辛弗林粗品的溶液上大孔吸附树脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)层析柱，上柱后先用 3BV含15%的乙醇水溶液洗脱除杂，再用3BV 50%的乙醇水溶液将辛弗林集中洗下，分步 收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于70%的洗脱液混合，ΗΡ20树脂柱提取收 率为76. 8%。
[0038] 将上述辛弗林混合液在30_35°C下真空旋蒸至无醇味儿，用盐酸调节上述混 合液的pH至3. 5,过滤后用1/2体积的乙酸乙酯萃取两次，取酯相在30°C下旋蒸除去 乙酸乙酯；用PH7.0的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氢氧化钠将其pH调整到7.0后上 XAD18(〇80X350mm)层析柱，上柱后先用3BV水洗脱除杂，再用10%的乙醇水溶液将辛弗 林洗脱下来，分步收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于95%的洗脱液混合， XAD18树脂柱提取收率为90. 8%，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
[0039] 实施例4
[0040] 取lkg柑橘皮渔，水洗后滤干，用2L 95% (v/v)乙醇在65°C下浸泡提取lh后，过 滤取上清液，重复提取一次，合并两次上清液，在30_35°C下真空旋蒸至无醇味儿，得到粗提 物浓缩液。
[0041] 用盐酸调节上述浓缩液的pH至3. 0,过滤后用粗提物浓缩液的1/2体积的乙酸乙 酯萃取两次，萃取后向乙酸乙酯相中加入pH为3. 0的蒸馏水，振荡混合后取酯相在30°C下 旋蒸除去乙酸乙酯得辛弗林粗品；再用含10%的乙醇水溶液溶解辛弗林粗品，并用盐酸将 其pH调整到3.0。
[0042] 将辛弗林粗品的溶液上大孔吸附树脂ΗΡ20(Φ80Χ350πιπι)层析柱，上柱后先用 3BV含20%的乙醇水溶液洗脱除杂，再用3BV 60%的乙醇水溶液将辛弗林集中洗下，分步 收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于70 %的洗脱液混合，ΗΡ20树脂柱提取收 率为84. 2%。
[0043] 将上述辛弗林混合液在30_35°C下真空旋蒸至无醇味儿，用盐酸调节上述混 合液的pH至3. 0,过滤后用1/2体积的乙酸乙酯萃取两次，取酯相在30°C下旋蒸除去 乙酸乙酯；用PH8. 5的水溶液溶解辛弗林粗品，并用氢氧化钠将其pH调整到8. 5后上 XAD18(〇80X350mm)层析柱，上柱后先用3BV水洗脱除杂，再用10%的乙醇水溶液将辛弗 林洗脱下来，分步收集洗脱液，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于95%的洗脱液混合， XAD18树脂柱提取收率为62. 4%，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
[0044] 以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无 需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术 人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的 技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
【主权项】
1. 一种从柑橘皮中提取辛弗林的方法，其特征在于，所述方法包括步骤： (1) 制备辛弗林粗提物 取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物； (2) 初步纯化 将辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20树脂进行柱层析； (3) 精制 将步骤（2)得到的初步纯化的辛弗林用XAD18树脂进行柱层析，并通过HPLC检测，将 辛弗林纯度大于95%的洗脱液混合，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。2. 如权利要求1所述的方法，其中，步骤（2)中使用HP20树脂进行柱层析过程中，上柱 液 pH 为 2. 5-4. 5。3. 如权利要求1所述的方法，其中，步骤（3)中使用XAD18树脂进行柱层析过程中，上 柱液 pH 为 6. 0-8. 0。4. 如权利要求1所述的方法，其中，步骤（2)中调节辛弗林粗提物pH2. 5-4. 5后再用乙 酸乙酯萃取。5. 如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤（1)中，取柑橘皮渣，用60-95% (v/v)的 乙醇水溶液在50°C _70°C下浸泡提取l_2h后，过滤取上清液，真空旋蒸去除乙醇，得到辛弗 林粗提物。6. 如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤（2)中，调节辛弗林粗提物的pH至 2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后蒸干除去乙酸乙酯，再用含10%的乙醇水溶液溶解，并用盐酸将 其pH调整到2. 5-4. 5,上大孔吸附树脂HP20层析柱，上柱后先用10% -20%的乙醇水溶液 洗脱除杂，再用50-70%的乙醇水溶液将辛弗林集中洗下。7. 如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤（3)中，将步骤（2)所得辛弗林洗脱液旋 蒸去除乙醇，用盐酸调节pH至2. 5-4. 5,乙酸乙酯萃取后旋蒸除去乙酸乙酯；用pH6-8的水 溶解，并用氢氧化钠调节pH至6-8后上XAD18层析柱，上柱后先用水洗脱除杂，再用5-20% 的乙醇水溶液将辛弗林洗脱下来，分步收集洗脱液,并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于 95%的洗脱液混合，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。
【专利摘要】本发明公开了一种从柑橘皮中提取辛弗林的方法，该方法包括步骤，取柑橘皮渣，用乙醇水溶液提取得到辛弗林粗提物；将辛弗林粗提物用乙酸乙酯萃取后，使用HP20树脂进行柱层析；将初步纯化的辛弗林用XAD18树脂进行柱层析，并通过HPLC检测，将辛弗林纯度大于95％的洗脱液混合，冷冻干燥得白色粉末状物质即为辛弗林。本发明的方法，合理充分地利用了柑橘加工产业的废弃物，并且能够获得HPLC纯度大于95％的辛弗林，并且制备过程中辛弗林回收率在65％以上。
【IPC分类】C07C213/10, C07C215/60
【公开号】CN105646244
【申请号】
【发明人】王林婧
【申请人】上海霖成生物科技有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2014年11月14日