一种甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物保护领域，具体涉及一种甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定方法。
【背景技术】
[0002] 甘薯爪唾黑腐病（Java black rot of sweetpotato)是由可可毛色二孢 (Lasiodiplodia theobromae)引起的一种重要甘薯储藏性病害。该病害是美国南部以及夏 威夷州重要的毁灭性储藏病害，据报道在上世纪八十年代曾在我国南方局部地区发生，近 年来逐渐成为南方地区危害最重的甘薯储藏性病害之一。该病害多从甘薯的薯蒂和薯尾以 及伤口侵入，特别是搬运过程中薯皮损伤极易导致病菌侵入，形成棕褐色病斑或者整个甘 薯薯块腐烂失水干缩，在广州个别仓库发病率可达50%以上，可造成了巨大的经济损失。
[0003] 培育和利用抗甘薯爪哇黑腐病的新品种或材料是防治和控制该病最经济环境友 好的措施。因此，建立一种操作简单、快速准确的甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定评价方法十分必 要。
[0004]迄今，在我国目前没有甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定评价方法，发明人曾尝试利用甘 薯爪哇黑腐病菌分生孢子和菌丝块对甘薯薯块进行接种，发现采用分生孢子和菌丝块均不 能使无创伤薯块致病，而利用分生孢子接种有创伤的薯块，发病不稳定，培养分生孢子需要 时间较长，试验操作较为复杂，不适合用于该病的抗性鉴定评价。最终，建立了一种操作简 单、发病迅速、效果稳定的适于甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定评价方法。
【发明内容】
[0005] 为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种效果稳定的甘薯爪哇黑腐 病抗性鉴定方法。
[0006] 为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
[0007] 本发明提供一种甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定方法，包括以下步骤：
[0008] 1)病原菌活化培养:将甘薯爪哇黑腐病菌接种至PDA培养基平板，活化培养，PDA培 养基平板上生长出菌丝体；
[0009] 2)待鉴定甘薯材料准备:取待鉴定甘薯材料和对照品种，清洗晾干，削薯皮使待鉴 定甘薯材料和对照品种均露出〇. 5-2cm2创面；
[0010] 3)接种培养:分别从roA培养基平板边缘取含有菌丝体的菌块，将长有菌丝体的一 面贴附于待鉴定甘薯材料和对照品种的创面，进行培养；
[0011] 4)等级鉴定:接种培养5-10天后，将待鉴定甘薯材料和对照品种取出，观察病害情 况并测量薯块病斑直径，进行发病严重度分级，然后计算每个待鉴定甘薯材料和对照品种 的平均发病严重度，根据平均发病严重度进行抗性评价。
[0012] 作为优选，步骤1)中，病原菌活化培养的具体操作方法如下:将甘薯爪哇黑腐病菌 接种至PDA培养基平板，活化培养2天，用打孔器从PDA培养基平板的边缘取含有菌丝体的菌 块，将所述菌块置于另一新的PDA培养基平板的中央，继续活化培养2天。
[0013] 作为优选，所述活化培养的具体操作步骤:将PDA培养基平板置于25±3°C培养。
[0014] 作为优选，步骤2)中，所述对照品种为广薯79。
[0015]作为优选，步骤3)中，所述培养步骤的具体参数如下:培养温度为25 ± 3 °C，培养湿 度为85-98 %。
[0016]作为优选，步骤4)中，发病严重度分级标准如下：
[0017] 1级:薯块正常无任何病症，或者薯块病斑直径< 1cm;
[0018] 2级：1 · 0cm〈薯块病斑直径< 2 · 0cm;
[0019] 3级：2 · 0cm〈薯块病斑直径< 3 · 0cm;
[0020] 4级：3 · 0cm〈薯块病斑直径< 4 · 0cm;
[0021] 5级:整个薯块腐烂，薯块病斑直径>4.0cm。
[0022] 作为优选，步骤4)中，抗性评价标准如下：
[0023]高抗:平均发病严重度<1.5;
[0024]抗病：1.5〈平均发病严重度< 2;
[0025]中抗:2〈平均发病严重度<3;
[0026]感病:3〈平均发病严重度<4;
[0027] 高感:4〈平均发病严重度。
[0028]相比现有技术，本发明的有益效果在于：
[0029]该方法通过将含有菌丝体的PDA培养基菌块直接接种于待鉴定甘薯材料的创面， 菌块中PDA培养基为菌丝体提供养分，使菌丝体保持较高的致病性和活力，进而使甘薯材料 的发病迅速、染病效果稳定。该方法操作简单，适合大规模推广。
[0030]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明作进一步详细说明。
【附图说明】
[0031 ]图1为广薯79的抗性鉴定结果示意图；
[0032] 图2为待鉴定品系4的抗性鉴定结果示意图；
[0033] 图3为待鉴定品系9的抗性鉴定结果示意图。
【具体实施方式】
[0034] 本发明提供一种甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定方法，以下【具体实施方式】中，如未特殊 说明，所采用的待鉴定甘薯材料均可通过市售途径获得。所采用的甘薯爪哇黑腐病菌由广 东省农业科学院研究所保存，命名为甘薯爪哇黑腐病菌LP1，该菌株是按《植病研究方法》 (方中达编著，中国农业出版社)所述方法进行病菌分离纯化，并完成柯赫氏法则而获得。以 下【具体实施方式】中的PDA培养基平板可采用《植病研究方法》所述方法进行配制，培养皿的 直径为7-9cm。该甘薯爪哇黑腐病菌还可以通过常规的操作手段从感病植株的感病部位分 离纯化而得到。
[0035] 本发明提供一种甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定方法，包括以下步骤：
[0036] 1)病原菌活化培养:将甘薯爪哇黑腐病菌接种至PDA培养基平板，活化培养，PDA培 养基平板上生长出菌丝体；
[0037] 2)待鉴定甘薯材料准备:取待鉴定甘薯材料和对照品种，清洗晾干，削薯皮使待鉴 定甘薯材料露出ο · 5-2cm2创面；
[0038] 3)接种培养:从TOA培养基平板边缘取含有菌丝体的菌块，分别将长有菌丝体的一 面贴附于待鉴定甘薯材料和对照品种的创面；
[0039] 4)等级鉴定:接种培养5-10天后，将待鉴定甘薯材料和对照品种取出，观察病害情 况并测量薯块病斑直径，进行发病严重度分级，然后计算每个待鉴定甘薯材料和对照品种 的平均发病严重度，根据平均发病严重度进行抗性评价。
[0040] 该方法通过将含有菌丝体的PDA培养基菌块直接接种于待鉴定甘薯材料的创面， 菌块中PDA培养基为菌丝体提供养分，使菌丝体保持较高的致病性和活力，进而甘薯材料的 发病迅速、染病效果稳定。该方法操作简单，适合大规模推广。
[0041 ] 实施例1:
[0042]本实施例提供一种甘薯爪哇黑腐病抗性鉴定方法，包括以下步骤：
[0043] 1)病原菌活化培养:将甘薯爪哇黑腐病菌LP1接种至TOA培养基平板，25°C活化培 养2天，利用灭菌打孔器从PDA培养基平板的边缘取一块直径为6mm的含有菌丝体的菌块，将 所述菌块置于另一新的PDA培养基平板的中央，继续25°C活化培养2天;本步骤采用二次活 化培养的方式，将活化培养后的菌块取出，移植至另一新的活化培养基，能获得致病性较高 的、活力较强的菌丝体；
[0044] 2)待鉴定甘薯材料准备:取待鉴定甘薯材料和对照品种，清洗晾干，削薯皮使待鉴 定甘薯材料露出l-2cm 2创面;每一待鉴定品系或品种或对照品种取10个单重200g左右的薯 块进行平行试验;本步骤中，因菌丝体对无创面的甘薯材料的染病能力差，而创面过大，存 在易受其它病菌侵扰等问题；
[0045] 3)接种培养:利用灭菌打孔器从步骤1)继续活化培养后的PDA培养基平板边缘取 一块直径为6mm含有菌丝体的菌块，分别将长有菌丝体的一面贴附于待鉴定甘薯材料和对 照品种的创面，将待鉴定甘薯材料和对照品种置于温度为25°C，湿度为85%的培养室进行 培养;本步骤中，菌块中的培养基一方面为菌丝体提供过渡期营养，另一方面，培养基上的 菌丝体的存活率较高，活力较强，可使甘薯材料的发病快、发病稳定；
[0046] 4)等级鉴定:接种培养5-10天后，将待鉴定甘薯材料和对照品种取出，观察病害情 况并测量薯块病斑直径，进行发病严重度分级，然后计算每个待鉴定甘薯材料和对照品种 的平均发病严重度，根据平均发病严重度进行抗性评价；
[0047]其中，发病严重度分级标准如下：
[0048] 1级:薯块正常无任何病症，薯块病斑直径<