猴头菇子实体三维指纹图谱及其构建方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及质量检测技术领域，具体涉及猴头菇子实体三维指纹图谱及其构建方法。
【背景技术】
[0002]猴头燕(Hericium erinaceus)是一种珍贵的药膳两用菌。猴头燕的子实体和菌丝体都含有大量的多糖、多肽、低聚糖和脂肪族酰类的等重要活性物质。其中，多糖是猴头菇中含量最丰富的生物活性物质。现代药理研究结果表明，猴头菇多糖提取物具有较强的生理活性，具有治疗慢性胃炎、抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力等功效，是一种有效的活性成分，具有许多潜在的药用价值。
[0003]已有研究表明，猴头菇作为一种药用真菌，其独特的药效由于受到地理条件、栽培、或养殖技术条件等因素的影响，相同种类的生物体，其代谢产物往往有一定的区别，甚至有明显差异，任何单一化学成分含量高低均不能准确完整的表达质量特征，单一化学成分含量测定亦难以实现对质量的控制。因此，现有技术中，对于猴头菇子实体的质量检测，存在难以判断真伪、评价优劣的缺陷，并且还存在考察稳定性和一致性差的缺点。另外，关于猴头燕子实体的质量标准，国内外尚未见相关报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供猴头菇子实体三维指纹图谱，该猴头菇子实体三维指纹图谱，对于猴头菇子实体的质量检测，具有易于判断真伪、评价优劣，且考察稳定性和一致性好的优点。
[0005]本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法。
[0006]为了实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案:
猴头菇子实体三维指纹图谱，它由FTIR标准指纹图谱、UV标准指纹图谱和HPLC标准指纹图谱组成，并通过对16种不同产地猴头菇品种的子实体的多糖成分进行比较分析得出；其中，所述FTIR标准指纹图谱中，猴头菇子实体多糖的特征吸收波长为3600cm—I3200cm—\3000cm—1?2800cm—\ 1600cm—1?1000cm—\800cm—1?500cm—S 并确定有 11 个共有特征吸收峰，其吸收波长λ—Rcnf1)分别为576.71、887.25、1056.99、1242.15、1404.17、1533.40、1647.20、2933.72、3385.07、3749.61和3855.70;
所述UV标准指纹图谱，是通过在200nm?600nm波长区间进行扫描得到的猴头菇子实体多糖的紫外全波长扫描光谱图，得出在200nm?220nm和260nm?280nm处有吸收，且在215nm处吸收值最大；
所述HPLC标准指纹图谱中，确定有16个共有特征峰，其相对保留时间tR(以葡萄糖峰S13为参照峰)分别为0.135 min、0.422min、0.458 min、0.478 min、0.507 min、0.536min、0.597 min、0.610 min、0.626 min、0.651 min、0.691 min、0.954 min、1.000 min、1.149 min、1.212 min和1.433 min0
[0007]所述FTIR标准指纹图谱中，在波长为887.25cm—1处(2号峰)为β-端基差向异构的C-H变角振动吸收峰；1056.99cm—1处(3号峰)为醇羟基的C-O伸缩振动吸收峰；1242.15cm—1处(4号峰)为环上C-C键的骨架振动吸收峰；1404.17cm—1处(5号峰)为C-O伸缩振动吸收峰，表明有糖醛酸；1533.40cm—1处(6号峰)为N-H变角振动吸收峰；1647.20cm—1处(7号峰)为C=O伸缩振动吸收峰;2933.72cm—1处(8号峰)为烷基C-H伸缩振动吸收峰;3385.07cm—1处(9号峰)为O-H伸缩振动吸收峰，表明有氢键存在。
[0008]所述HPLC标准指纹图谱中，I号峰、4号峰、8号峰、9号峰、13号峰、14号峰、15号峰、16号峰分别对应的成分为:果糖、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖。
[0009]所述HPLC标准指纹图谱中，相对峰面积占总峰面积百分比由高到低的特征峰依次为13号峰、14号峰和16号峰；
13号峰、14号峰和16号峰的相对峰面积范围分别为:36.761%?59.102%、15.001%?28.170%、3.840%?8.653%。
[0010]为了实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案:
上述所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，它包括以下步骤:
步骤一，猴头菇子实体多糖的提取:
分别称取一定质量的16种不同产地的猴头燕子实体粉末于容器中，并加入一定体积的水，然后于一定温度的水浴中震荡一定时间，再冷却并离心处理，然后收集上清液并减压蒸发浓缩后进行透析一定时间，再将透析物进行真空冷冻干燥，得到猴头菇子实体多糖粗品；步骤二，猴头菇子实体多糖的FTIR指纹图谱的构建:
分别称取一定质量的步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品，加入一定质量的溴化钾，研磨后取样进行测定，检测波数为4000?400cm—I在此条件下得到16种不同产地的猴头菇子实体多糖的FTIR指纹图谱，并通过平均值法建立16种不同产地的猴头菇子实体多糖的FTIR标准指纹图谱；比较不同产地的猴头菇子实体多糖的FTIR标准指纹图谱，并确定有11个共有特征吸收峰，其吸收波长λ—1 (cm—1)分别为576.71、887.25、1056.99、
1242.15、1404.17、1533.40、1647.20、2933.72、3385.07、3749.61和3855.70;
步骤三:猴头菇子实体多糖的UV指纹图谱的构建:
分别称取一定质量的步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品，配成一定浓度的多糖水溶液，于200nm?600nm波长区间进行扫描得到猴头菇子实体多糖紫外全波长扫描光谱图，并通过平均值法建立16种不同产地的猴头菇子实体多糖的UV标准指纹图谱，得出在200nm?220nm和260nm?280nm处有吸收，且在215nm处吸收值最大；
步骤四，猴头菇子实体多糖的HPLC指纹图谱的构建:
(I)猴头菇子实体多糖的水解:分别称取一定质量的步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品，分别配成一定浓度的多糖水溶液，然后将一定体积的多糖水溶液置于容器中，并加入三氟乙酸，再充入氮气后用酒精喷灯封口，然后置于一定温度的烘箱中水解一定时间，反应完全后，取出，放置冷却，再用氮气吹干;然后分别加入一定体积的甲醇，搅拌后再用氮气吹干，重复上述加入甲醇并用氮气吹干的步骤若干次以除去三氟乙酸;然后将残渣加入热水中溶解，并转移至一定体积刻度的比色管中，加水至刻度，摇匀后得到水解产物； (2)猴头菇子实体多糖水解产物的PMP衍生化反应:吸取一定体积的上述第(I)步得到的水解产物，加入甲醇溶液和氢氧化钠溶液，混匀后，于一定温度的水浴中反应一定时间，冷却后加入盐酸中和，反应液在一定温度下旋蒸至干，然后加入水和氯仿，漩涡振荡混匀，再离心处理;然后取上层水溶液，再往上层水溶液中加入氯仿，重复上述操作直至氯仿层无颜色为止，再将最后的水相用微孔膜过滤后，得到PMP衍生化产物；
(3 )PMP衍生化产物的反相高效液相色谱分析:分别对第(2 )步得到的PMP衍生化产物和混合单糖标准品进行进样，分别得到混合单糖标准品的色谱图和16种不同产地的猴头菇子实体多糖的HPLC指纹图谱;并以葡萄糖峰为参照峰，计算混合单糖标准品和PMP衍生化产物中各峰的相对保留时间，并以峰面积归一化法计算PMP衍生化产物图谱各峰的相对峰面积；(4)HPLC标准指纹图谱的建立:通过比较16个不同产地的猴头菇子实体多糖的HPLC指纹图谱，并运用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》软件，建立猴头菇子实体多糖HPLC标准指纹图谱;通过分析比较，确定有16个共有特征峰，其相对保留时间tR(以葡萄糖峰S13为参照峰)分别为0.135 min、0.422min、0.458 min,0.478min、0.507 min、0.536 min、0.597 min、0.610 min、0.626 min、0.651 min、0.691 min、
0.954 min、1.000 min、1.149 min、1.212 min和1.433 min。
[0011]上述技术方案中，所述步骤一猴头菇子实体多糖的提取步骤中，分别称取16种不同产地的猴头菇子实体粉末2g~3g于容器中，并加入40mL?60mL的水，然后于80°085°C的水浴中震荡5h~6h，再冷却并离心处理，然后收集上清液并减压蒸发浓缩后置于透析袋中进行透析12?18h，再将透析物进行真空冷冻干燥，得到猴头菇子实体多糖粗品。
[0012]上述技术方案中，所述步骤二猴头菇子实体多糖的FTIR指纹图谱的构建步骤中，分别称取步骤一得到的16种不同产地的猴头燕子实体多糖粗品2m