.651 min、0.691 min、0.954 min、1.000 min、1.149min、1.212 min和1.433 min02.根据权利要求1所述的猴头菇子实体三维指纹图谱，其特征在于:所述FTIR标准指纹图谱中，在波长为887.25cm—1处(2号峰)为β-端基差向异构的C-H变角振动吸收峰；.1056.99cm—1处(3号峰)为醇羟基的C-O伸缩振动吸收峰；1242.15cm—1处(4号峰)为环上C-C键的骨架振动吸收峰；1404.17cm—1处(5号峰)为C-O伸缩振动吸收峰，表明有糖醛酸；.1533.40cm—1处(6号峰)为N-H变角振动吸收峰；1647.20cm—1处(7号峰)为C=O伸缩振动吸收峰;2933.72cm—1处(8号峰)为烷基C-H伸缩振动吸收峰;3385.07cm—1处(9号峰)为O-H伸缩振动吸收峰，表明有氢键存在。3.根据权利要求1所述的猴头菇子实体三维指纹图谱，其特征在于:所述HPLC标准指纹图谱中，I号峰、4号峰、8号峰、9号峰、13号峰、14号峰、15号峰、16号峰分别对应的成分为:果糖、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖。4.根据权利要求3所述的猴头菇子实体三维指纹图谱，其特征在于:所述HPLC标准指纹图谱中，相对峰面积占总峰面积百分比由高到低的特征峰依次为13号峰、14号峰和16号峰； . 13号峰、14号峰和16号峰的相对峰面积范围分别为:36.761%?59.102%、15.001%?.28.170%、3.840%?8.653%。5.权利要求1至4任意一项所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，其特征在于:它包括以下步骤: 步骤一，猴头菇子实体多糖的提取: 分别称取一定质量的16种不同产地的猴头燕子实体粉末于容器中，并加入一定体积的水，然后于一定温度的水浴中震荡一定时间，再冷却并离心处理，然后收集上清液并减压蒸发浓缩后进行透析一定时间，再将透析物进行真空冷冻干燥，得到猴头菇子实体多糖粗品； 步骤二，猴头菇子实体多糖的FTIR指纹图谱的构建: 分别称取一定质量的步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品，加入一定质量的溴化钾，研磨后取样进行测定，检测波数为4000?400cm—I在此条件下得到16种不同产地的猴头菇子实体多糖的FTIR指纹图谱，并通过平均值法建立16种不同产地的猴头菇子实体多糖的FTIR标准指纹图谱；比较不同产地的猴头菇子实体多糖的FTIR标准指纹图谱，并确定有11个共有特征吸收峰，其吸收波长λ—1 (cm—1)分别为576.71、887.25、1056.99、.1242.15、1404.17、1533.40、1647.20、2933.72、3385.07、3749.61和3855.70; 步骤三:猴头菇子实体多糖的UV指纹图谱的构建: 分别称取一定质量的步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品，配成一定浓度的多糖水溶液，于200nm?600nm波长区间进行扫描得到猴头菇子实体多糖紫外全波长扫描光谱图，并通过平均值法建立16种不同产地的猴头菇子实体多糖的UV标准指纹图谱，得出在200nm?220nm和260nm?280nm处有吸收，且在215nm处吸收值最大； 步骤四，猴头菇子实体多糖的HPLC指纹图谱的构建: (1)猴头菇子实体多糖的水解:分别称取一定质量的步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品，分别配成一定浓度的多糖水溶液，然后将一定体积的多糖水溶液置于容器中，并加入三氟乙酸，再充入氮气后用酒精喷灯封口，然后置于一定温度的烘箱中水解一定时间，反应完全后，取出，放置冷却，再用氮气吹干;然后分别加入一定体积的甲醇，搅拌后再用氮气吹干，重复上述加入甲醇并用氮气吹干的步骤若干次以除去三氟乙酸;然后将残渣加入热水中溶解，并转移至一定体积刻度的比色管中，加水至刻度，摇匀后得到水解产物； (2)猴头菇子实体多糖水解产物的PMP衍生化反应:吸取一定体积的上述第(I)步得到的水解产物，加入甲醇溶液和氢氧化钠溶液，混匀后，于一定温度的水浴中反应一定时间，冷却后加入盐酸中和，反应液在一定温度下旋蒸至干，然后加入水和氯仿，漩涡振荡混匀，再离心处理;然后取上层水溶液，再往上层水溶液中加入氯仿，重复上述操作直至氯仿层无颜色为止，再将最后的水相用微孔膜过滤后，得到PMP衍生化产物； (3)PMP衍生化产物的反相高效液相色谱分析:分别对第(2)步得到的PMP衍生化产物和混合单糖标准品进行进样，分别得到混合单糖标准品的色谱图和16种不同产地的猴头菇子实体多糖的HPLC指纹图谱;并以葡萄糖峰为参照峰，计算混合单糖标准品和PMP衍生化产物中各峰的相对保留时间，并以峰面积归一化法计算PMP衍生化产物图谱各峰的相对峰面积； (4)HPLC标准指纹图谱的建立:通过比较16个不同产地的猴头菇子实体多糖的HPLC指纹图谱，并运用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004版》软件，建立猴头菇子实体多糖HPLC标准指纹图谱;通过分析比较，确定有16个共有特征峰，其相对保留时间tR(以葡萄糖峰S13为参照峰)分别为0.135 min、0.422min、0.458 min,0.478min、0.507 min、0.536 min、0.597 min、0.610 min、0.626 min、0.651 min、0.691 min、.0.954 min、1.000 min、1.149 min、1.212 min和1.433 min。6.根据权利要求5所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，其特征在于:所述步骤一猴头菇子实体多糖的提取步骤中，分别称取16种不同产地的猴头菇子实体粉末2g~3g于容器中，并加入40mL?60mL的水，然后于80°C~85°C的水浴中震荡5h~6h，再冷却并离心处理，然后收集上清液并减压蒸发浓缩后置于透析袋中进行透析12?18h，再将透析物进行真空冷冻干燥，得到猴头菇子实体多糖粗品。7.根据权利要求5所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，其特征在于:所述步骤二猴头菇子实体多糖的FTIR指纹图谱的构建步骤中，分别称取步骤一得到的16种不同产地的猴头燕子实体多糖粗品2mg?3mg，加入10mg?150mg的溴化钾，研磨后取样进行测定。8.根据权利要求5所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，其特征在于:所述步骤三猴头菇子实体多糖的UV指纹图谱的构建步骤中，分别称取步骤一得到的16种不同产地的猴头燕子实体多糖粗品8mg?12mg，配成80μg/mL?120yg/mL的多糖水溶液。9.根据权利要求5所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，其特征在于:所述步骤四的(I)猴头菇子实体多糖的水解步骤中，分别称取步骤一得到的16种不同产地的猴头菇子实体多糖粗品8mg?12mg，分别配成8mg/mL?12mg/mL的多糖水溶液，然后将500μL的多糖水溶液置于5mL安培瓶中，并加入0.3mol/L-0.5mol/L三氟乙酸500yL，再充入氮气后用酒精喷灯封口，然后置于100℃-120℃的烘箱中水解4h~6h，反应完全后，取出，放置冷却，再用氮气吹干;然后分别加入1mL的甲醇，搅拌后再用氮气吹干，重复上述加入甲醇并用氮气吹干的步骤三次以除去三氟乙酸;然后将残渣加入热水中溶解，并转移至2mL的比色管中，加水至刻度，摇匀后得到水解产物。10.根据权利要求5所述的猴头菇子实体三维指纹图谱的构建方法，其特征在于:所述步骤四的(2)猴头菇子实体多糖水解产物的PMP衍生化反应步骤中，吸取400yL的上述第(I)步得到的水解产物，加入400μL 0.5M PMP的甲醇溶液和400yL 0.3M氢氧化钠溶液，混匀后，于60°080°C的水浴中反应60min?90min，冷却后加入400yL 0.3M盐酸中和，反应液在40°C?60°C下旋蒸至干，然后加入2mL水和ImL氯仿，漩涡振荡混匀，再离心处理;然后取上层水溶液，再往上层水溶液中加入氯仿，重复上述操作直至氯仿层无颜色为止，再将最后的水相用.0.22μm的微孔膜过滤后，得到PMP衍生化产物。
【专利摘要】本发明涉及质量检测技术领域，具体涉及猴头菇子实体三维指纹图谱及其构建方法。该猴头菇子实体三维指纹图谱，是运用多种检测方法建立了猴头菇子实体多糖的三维指纹图谱（包括HPLC、FTIR和UV指纹图谱），克服了现有检测技术和检测指标单一的缺点。该猴头菇子实体三维指纹图谱，对于猴头菇子实体的质量检测，具有易于判断真伪、评价优劣，且考察稳定性和一致性好的优点，并且，该猴头菇子实体三维指纹图谱对制定猴头菇相应的质量标准，开发猴头菇潜在的药用价值具有十分重要的意义。该构建方法重现性和稳定性好、精密度高；并且样品和混合标准品的特征色谱峰分离度较好，稳定性高。
【IPC分类】G01N21/33, G01N1/28, G01N30/06, G01N30/02, G01N21/3563
【公开号】CN105651725
【申请号】
【发明人】周春晖, 黄惠华, 伍芳芳, 周丹丹, 马炳南
【申请人】广东太阳神集团有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月2日