2.85mg/ml的溶 液，置4°C冰箱保存，备用。
[0040] (2)对照品贮备液：
[00411 a.称取丁苯酞对照品适量，无水乙醇稀释成浓度为10.72mg/ml的溶液，置4 °C冰箱 保存，作为对照品贮备液A;
[0042] b .称取藁本内酯对照品适量，无水乙醇稀释成浓度为1.75mg/ml的溶液，现用现 配，作为对照品贮备液B。
[0043] (3)对照品溶液:将对照品贮备液A( 丁苯酞）、对照品贮备液B(藁本内酯)和内标品 贮备液混合，用无水乙醇稀释定容，制得对照品溶液;所述对照品溶液中，丁苯酞、藁本内酯 和内标品的浓度分别为0.2148mg/ml、0.70mg/ml和0.085mg/ml，用于系统适用性实验。 [0044] (4)供试品溶液:称取按2.2项提取的川芎挥发油约O.Olg，加无水乙醇稀释定容至 lml，摇匀，精密量取100μΙ，加入30μ1内标品贮备液，用无水乙醇稀释定容至lml棕色量瓶 中，摇匀。
[0045] (5)系列丁苯酞对照品溶液：
[0046] 取对照品贮备液A适量，用无水乙醇稀释成丁苯酞浓度为0.0064，0.0268，0.0536， 0. 2148，0.4288，0.8576，1.7152mg/ml的系列对照品溶液，在稀释过程中加入内标品贮备液 适量，使所配制的系列对照品溶液中内标品的浓度均为〇.〇85mg/ml，制得系列丁苯酞对照 品溶液，用于绘制标准曲线。
[0047] 2.4系统适用性实验
[0048] 精密吸取对照品溶液、供试品溶液各?μL进样，按2.1项下色谱条件进行测定，结果 见图1和图2。内标品邻苯二甲酸二乙酯、对照品丁苯酞和藁本内酯的保留时间分别是 18.54min、19.94min和21.89min，由图1可见，基于同种类化合物有相似的结构，在色谱上出 峰的位置相近的原理，通过丁苯酞和藁本内酯对照品确认，确定了保留时间在19.94min-21.89min之间一段为苯酞内酯类出峰时间，而且通过与相关文献（曾志，谢润乾，谭丽贤，张 涛.川芎水蒸气蒸馏和超临界C0 2提取物化学成分的GC-MS分析鉴别[J].应用化学，2011，28 (8): 956-962)中苯酞内酯的质谱裂解碎片进行比对，发现保留时间为20.40min和21.50min 的色谱峰分别为丁烯基苯酞和洋川芎内酯A(如图2所示），因此也证明了选择丁苯酞和藁本 内酯时间区间的合理性。
[0049] 2.5标准曲线制备
[0050] 精密吸取系列浓度的对照品溶液各ΙμL，采用2.1项下的色谱条件下测定，记录内 标品和丁苯酞的峰面积。以丁苯酞与内标品峰面积比值y为纵坐标，丁苯酞浓度X为横坐标， 建立标准曲线方程：y=11.76x-0.172(R = 0.9990，n = 7)，方程表明丁苯酞在0.0064~ 1.7152mg/ml浓度范围内线性关系良好。
[0051 ] 2.6相对校正因子确定
[0052]取丁苯酞标准曲线中丁苯酞峰面积、丁苯酞浓度、内标品峰面积和内标品浓度，按 公式fis = fi/fs= (CiXAs)/(CsXAi)(其中i为丁苯酞，S为内标品，C为浓度，A为峰面积)计算 丁苯酞的相对校正因子，fis为1 .〇436(n = 7)。
[0053] 2.7精密度试验
[0054]精密吸取供试品溶液ΙμL，连续进样5次和每日进样1次，连续5日，分别记录内标品 邻苯二甲酸二乙酯、对照品丁苯酞和藁本内酯之间所有组分的峰面积，总苯酞内酯的日内、 日间RSD为2.6%和3.1%。
[0055] 2.8稳定性试验
[0056] 精密吸取按"2.3"项下供试品溶液配制方法制备的供试品溶液?μL，于配制后的0、 1、 2、4、6、8小时测定内标品邻苯二甲酸二乙酯、对照品丁苯酞和藁本内酯之间所有组分的 峰面积，计算总苯酞内酯RSD为2.4 %。
[0057] 2.9重复性试验
[0058]取同一批川芎挥发油，按"2.3"项下供试品溶液配制方法分别制备6个供试品溶 液，平行测定内标品邻苯二甲酸二乙酯、对照品丁苯酞和藁本内酯之间所有组分的峰面积， 计算总苯酞内酯RSD为2.2 %。
[0059] 2.10加样回收率试验
[0060] 取已知总苯酞内酯含量的川芎挥发油，分别加入不同浓度的丁苯酞标准品溶液适 量，按"2.3"项下供试品溶液配制方法制备供试品溶液9份，测定总苯酞内酯含量，计算加样 回收率，结果见表1。
[0061] 表1加样回收率结果(n = 9)
[0062]
[C
[0064] 3、川芎挥发油中总苯酞内酯含量测定
[0065] 分别取3批川考药材样品，按"2.2"项下提取方法得川考挥发油，再按"2.3"项下供 试品溶液配制方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液?μL，在"2. Γ项色谱条件下进样， 记录内标品邻苯二甲酸二乙酯、对照品丁苯酞和藁本内酯之间所有组分的峰面积。按公式 Ct = fisXCsXAt/As求得总苯酞内酯浓度，其中f is为丁苯酞相对校正因子1.0436，Ct为总苯 酞内酯浓度，At为丁苯酞和藁本内酯之间所有组分的峰面积之和，结果见表2。
[0066] 表2测定川；挥发油中总苯酞内酯的含量(n = 3)
[0067]
[0068] 以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述 实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可作出种种的等同的 变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
【主权项】
1. 一种川芎挥发油中总苯酞内酯的质量控制方法，包括： 以邻苯二甲酸二乙酯为内标品，以丁苯酞和藁本内酯为对照品，采用气相色谱GC-质谱 MS分离分析法，分别测定被测样品中内标品的峰面积As以及丁苯酞和藁本内酯之间所有组 分的峰面积之和A t，根据内标的浓度匕，用丁苯酞相对校正因子fls按下述公式计算被测成 分总苯酞内酯浓度C t: Ct = fis XCS XAt/As 其中，丁苯酞相对校正因子fls=l.0436,丁苯酞相对校正因子fls按下式计算得到： fis=(CiXAs)/(CsXAi) 式中，G为丁苯酞的浓度，仏为丁苯酞的峰面积。2. 根据权利要求1所述的一种川芎挥发油中总苯酞内酯的质量控制方法，其特征在于： 所述气相色谱的条件为：1)载气为高纯氦气;2)流速为1.0ml/min; 3)程序升温:起始温 度60°C，以6°C/min的速度升温至170°C，然后以1.5°C/min的速度升温至180°C，最后以25 °C/min的速度升温至250°C，保持2min; 4)进样口温度250°C，检测器温度280°C，分流比30: 1，进样量Ι.ΟμΙ; 所述质谱的条件为:ΕΙ离子源，温度230°C，电子能量70eV，电子倍增器高压1100V，溶剂 不延迟。3. 根据权利要求1所述的一种川芎挥发油中总苯酞内酯的质量控制方法，其特征在于： 所述内标品、对照品和被测样品的溶液配制具体如下： (1) 内标品贮备液:取邻苯二甲酸二乙酯，无水乙醇稀释成浓度为2.85mg/ml的溶液，置 4°C冰箱保存，备用； (2) 对照品贮备液： a. 取丁苯酞，无水乙醇稀释成浓度为10.72mg/ml的溶液，置4°C冰箱保存，作为对照品 贮备液A; b. 取藁本内酯，无水乙醇稀释成浓度为1.75mg/ml的溶液，现用现配，作为对照品贮备 液B; (3) 对照品溶液:将对照品贮备液A、对照品贮备液B和内标品贮备液混合，用无水乙醇 稀释定容，制得对照品溶液;所述对照品溶液中，丁苯酞、藁本内酯和内标品的浓度分别为 0·2148mg/ml、0·70mg/ml和0·085mg/ml; (4) 被测样品溶液:称取川芎挥发油O.Olg，加无水乙醇稀释定容至lml，摇匀，量取100μ 1，加入30μ1内标品贮备液，用无水乙醇稀释定容至lml棕色量瓶中，摇匀。
【专利摘要】本发明属于中药质量控制方法技术领域，具体涉及一种川芎挥发油中总苯酞内酯的质量控制方法。该方法以邻苯二甲酸二乙酯为内标品，以丁苯酞和藁本内酯为对照品，采用气相色谱GC-质谱MS分离分析法，分别测定被测样品中内标品的峰面积As以及丁苯酞和藁本内酯之间所有组分的峰面积之和At，根据内标的浓度Cs,用丁苯酞相对校正因子fis按下述公式计算被测成分总苯酞内酯浓度Ct：Ct＝fis×Cs×At/As，其中，丁苯酞相对校正因子fis＝1.0436。本发明的质量控制方法准确度、精密度、稳定性、重复性等均满足含量测定要求，有较强的实际操作性，为川芎挥发油的质量控制提供了一种新思路。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/02
【公开号】CN105651889
【申请号】
【发明人】宋洪杰, 王晓君
【申请人】中国人民解放军第二军医大学
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年1月12日