用的术语 "寡糖"是指由=至二十个单糖组成的糖。
[0067] 在一个实施方案中，本发明的组合物包含与没有小肠上皮细胞(如绒毛细胞、隐窝 细胞、肠细胞和肠祖细胞（intestinal projenitor cell))损伤的正常对照的吸收能力相 比，在有小肠上皮细胞损伤的对象中保持或获得提高的吸收能力的营养物(如游离氨基酸） 和/或电解质。
[0068] 在另一个实施方案中，本发明的组合物不包含不被吸收或者与没有小肠上皮细胞 (如绒毛细胞、隐窝细胞、肠细胞和肠祖(projenitor)细胞)损伤的正常对照的吸收能力相 比，在有小肠上皮细胞损伤的对象中具有降低之吸收的营养物(如氨基酸)和/或电解质。有 利地，本发明的组合物有助于小肠容易地吸收营养物，W降低不适当的能量消耗，从而在黏 膜损伤后即时提供肠休息。 用于提高小肠功能的治疗方法
[0069] 本发明的另一方面提供了用于治疗或改善与小肠上皮细胞(特别是绒毛区和刷状 缘中）的损失或损伤相关之疾病或病症的方法。在一个实施方案中，小肠上皮细胞的损失或 损伤引起营养物、电解质和/或流体的吸收能力改变。有利地，针对有小肠上皮细胞损失或 损伤的患者，特别是针对有小肠绒毛萎缩的患者，本发明改善小肠上皮黏膜愈合;提高小肠 功能;增强小肠中营养物吸收和流体滞留;预防或缓解小肠萎缩;减轻腹部疼痛;预防和/或 治疗腹泻;恢复或增强小肠屏障功能;和/或减轻小肠黏膜炎症、菌血症和/或内毒素血症。
[0070] 因此，本发明特别有利于改善W下对象的胃肠健康:接受了细胞毒性化学治疗剂、 骨盆或腹部福射、质子治疗和腹部手术的对象；患有与急性或慢性小肠炎症相关的感染或 自身免疫疾病的对象;经常性地或者偶尔地暴露于福射的对象，如经常性地暴露于空间福 射的宇航员和飞行员；W及由于核事故、战争行为或恐怖行为而暴露于福射的对象。
[0071] 在一个实施方案中，该方法包括通过经肠途径向有此治疗需要的患者或对象施用 有效量的本发明组合物。组合物可在损伤小肠上皮细胞之前即刻、期间和/或之后施用于患 者或对象，并且每天可施用一次或多次。
[0072] 本文所使用的术语"对象"或"患者"描述了可向其提供用根据本发明的组合物进 行治疗的生物(包括哺乳动物如灵长类动物）。可从所公开的治疗方法获益的哺乳动物物种 包括但不限于：猿(ape)、黑猩猩、猩猩、人、猴；驯养动物（domesticated animal)如狗、猫； 畜禽(1 ive stock)如马、牛、猪、绵羊、山羊、鸡；W及动物如小鼠、大鼠、豚鼠和仓鼠。
[0073] 在一个具体的实施方案中，有治疗需要的对象是有小肠黏膜上皮细胞(包括十二 指肠、空肠和回肠的黏膜层)损伤的患者。特别地，有治疗需要的对象是有小肠绒毛区和刷 状缘损伤的患者。例如，有治疗需要的对象与正常相比有绒毛萎缩(例如，绒毛区和刷状缘 的部分地或完全地日渐衰减(wasting away));小肠中绒毛细胞减少至少5% (如至少10%、 20%、30%或50%);损失至少5%(如至少10%、20%、30%或50%)的绒毛高度;损失小肠的 绒毛区和刷状缘中一种或更多种转运蛋白（transpoder)的功能，其中转运蛋白包括但不 限于SGLT-1转运蛋白、AE2转运蛋白、畑E1转运蛋白和NBCe 1-A/B转运蛋白，其中转运蛋白功 能的损失为至少5% (如至少10%、20%、30%或50% );和/或小肠中一种或更多种营养物的 吸收能力变化，其中所述营养物选自：异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨 酸、色氨酸、鄉氨酸、组氨酸、酪氨酸、丙氨酸、精氨酸、谷氨酷胺、天冬氨酸、天冬酷胺、半脫 氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬酷胺、葡萄糖、果糖和/或乳糖，其中吸收能力的变化为 至少5% (如至少 10% ,20%、30%或50%)。
[0074] 例如，可通过如本文的"材料和方法"部分所述使用尤斯室来确定小肠的吸收能 力。例如，可通过例如测量指标饱括，例如Km、Vmax和Is。)的组合来确定吸收状态的变化。可 通过例如对小肠黏膜的生物活检样本的检查来确定小肠的绒毛区和其他区的损伤。
[0075] 熟练的医师可容易地确定造成小肠黏膜上皮细胞（如小肠绒毛细胞）损伤的疾病 和治疗方法。如在医疗职业中公知的，患有某些疾病(如炎性肠病（IBD))、溃瘍性结肠炎、十 二指肠溃瘍和克罗恩病(化ohn'S disease)的患者遭受小肠黏膜的慢性破坏。放射治疗、化 学治疗和质子治疗也引起小肠细胞的损伤。
[0076] 本文所使用的术语"治疗"或其任何语法变化形式包括但不限于缓解疾病或病症 的症状;和/或减轻、压制、抑制、降低或影响疾病或病症的进程、严重程度和/或范围。
[0077] 本文所使用的术语"改善"或其任何语法变化形式包括但不限于延迟发病，或者降 低疾病或病症(例如，腹泻，菌血症和/或内毒素血症）的严重程度。本文所使用的改善不要 求症状完全不存在。
[0078] 本文所使用的术语"有效量"是指能够治疗或改善疾病或病症或者能够产生预期 治疗效果的量。
[0079] 在一个具体的实施方案中，本发明提供了用于促进有小肠上皮细胞损伤之对象的 肠健康的方法，其中所述方法包括:鉴定有小肠上皮细胞损伤，或者将遭受运样的损伤W及 需要治疗或改善的对象，并且通过经肠途径向对象施用有效量的包含W下、基本由W下组 成或者由W下组成的组合物:选自赖氨酸、甘氨酸、苏氨酸、鄉氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、异亮 氨酸、色氨酸、天冬酷胺和丝氨酸中的一种或更多种游离氨基酸;水；W及任选地，可治疗用 载体、电解质、维生素、缓冲剂和矫味剂，其中组合物的总摩尔渗透压浓度为240mosm至 28〇111〇3111，口出％约7.1至7.9。
[0080] 在一个实施方案中，未通过经肠途径向有(或者即将有)小肠上皮细胞损伤的对象 施用一种或更多种W下营养物，其中所述营养物选自：谷氨酷胺、甲硫氨酸、和可水解为谷 氨酷胺和/或甲硫氨酸的任何二肤、寡肤或多肤或蛋白质;葡萄糖和可水解为葡萄糖的任何 二糖、寡糖、多糖和碳水化合物;和/或消化后需要在小肠中吸收任何上述营养物的食物。
[0081] 在另一个实施方案中，对于有(或即将有）小肠上皮细胞损伤的对象而言，未通过 经肠途径施用W下营养物，其中所述营养物选自：糖类、脂质、脂肪酸和/或消化后需要在小 肠中吸收任何上述营养物的食物。对于暴露于福射或者接受放射治疗、化学治疗和质子治 疗的患者而言，小肠上皮细胞的损伤通常持续至少3、7、14、21、30天或者1至30天之间的任 何时间。
[0082] 在另一个实施方案中，在1至30天之间的任何时间（如3、7、14、21、30天)之后，因为 对象暴露于福照或者接受放射治疗、化学治疗和/或质子治疗，所W通过经肠途径施用一种 或更多种W下营养物W增强黏膜愈合，其中所述营养物选自：谷氨酷胺、甲硫氨酸和可水解 为谷氨酷胺和/或甲硫氨酸的任何二肤、寡肤或多肤或蛋白质；葡萄糖和可水解为葡萄糖的 任何二糖、寡糖、多糖和碳水化合物;和/或消化后需要在小肠中吸收任何上述营养物的食 物。
[0083] 在一个具体的实施方案中，本发明组合物经口施用并且达到对象的小肠。任选地， 该方法还包括通过肠胃外途经施用未W充分量通过经肠途径施用的所需营养物和电解质。
[0084] 在一个实施方案中，本发明未用于向对象提供显著量的或者全部的必需营养物， 但用于改善小肠黏膜愈合、恢复小肠功能、增强流体滞留、预防或缓解小肠绒毛萎缩、预防 和/或治疗腹泻，和/或恢复或增强肠屏障功能。在一个具体的实施方案中，饮品组合物也基 于屏障功能的提高。屏障功能可通过使用多种技术来确定，包括:a)对安放在尤斯室中组织 的电导测量结果升高，b)用于测量Cl和Na的相对渗透性(PC1/P化)的稀释电势（只有完整的 和功能性的屏障可保持离子选择性;当失去屏障功能时，离子选择比值接近于1)，W及C)测 量血浆内毒素水平。当失去黏膜屏障功能时，共生的肠道细菌可找到进入体循环的途径，导 致升高的血浆内毒素水平。可测量患者血液样本中的内毒素水平。血浆内毒素水平还可用 作测量治疗改善的指标。
[0085] 本发明的组合物可用于治疗或改善与小肠上皮细胞的损失、破坏或减少(特别是 小肠的绒毛细胞、肠细胞和/或肠祖细胞的功能或数目的损失、破坏或减少)相关的任何疾 病或病症。本发明尤其可用于治疗或改善与小肠上皮细胞中的转运蛋白（特别是小肠绒毛 细胞中的转运蛋白）的损失、失活或功能改变相关的任何疾病或病症。
[0086] 在一个实施方案中，本发明的组合物和方法可用于治疗或改善产生自W下或者与 W下相关的疾病或病症:钢依赖的葡萄糖转运系统（S化T-1)对葡萄糖的亲和力下降；N此-末端产电化+-肥〇3(-)协同转运蛋白（NBCel-A/B)的损失或活性下降；顶端Cr-肥〇3-交换转 运蛋白（AE1)的损失或活性下降;和/或CFTR和/或NKCC-I转运蛋白系统的水平或活性升高。
[0087] 在一个特别优选的实施方案中，本发明的组合物和方法可用于治疗或改善由福射 引起的小肠损伤。在一个具体的实施方案中，本发明可用于治疗或改善由放射治疗(特别是 骨盆和腹部放射治疗）引起的小肠损伤。在一个具体的实施方案中，福照治疗用于癌症治 疗。
[0088] 此外，本发明可用于治疗或改善由经常性福射暴露（如宇航员和飞行员暴露于空 间福射，如由放射性武器和意外核泄露引起的福射暴露）引起的小肠损伤。具体地，本发明 可用于治疗或改善急性和/或慢性放射性肠炎。
[0089] 在某些具体的实施方案中，本发明的组合物和方法可用于治疗或改善小肠损伤， 其中患者接受了 W下福射：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或2067。 在另一个实施方案中，对象接受了剂量高于20Gy的福射。
[0090] 此外，本发明可用于治疗或改善由化学治疗剂引起的小肠损伤，所述化学治疗剂 包括但不限于:顺销、5-氣尿喀晚(5-即）、径基脈、依托泊巧、阿糖胞巧(arabinoside)、6-琉 嚷岭、6-硫鸟嚷岭、氣达拉滨、甲氨蝶岭、类固醇和/或其组合。
[0091] 此外，本发明可用于治疗或改善由质子治疗引起的小肠损伤。
[0092] 在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善设及小肠损伤的疾病，包括但不限 于炎性肠病（IBD)、溃瘍性结肠炎、十二指肠溃瘍、克罗恩病、和/或乳糜泻(还称为腹腔疾 病）。本发明可用于治疗或改善由病原性感染(如病毒、细菌、真菌或其他微生物感染）引起 的小肠损伤。
[0093] 在一个具体的实施方案中，本发明可用于治疗或改善小肠绒毛萎缩，即，绒毛区和 刷状缘的部分地或完全地日渐衰减，W及产生自小肠绒毛萎缩、与小肠绒毛萎缩相关和/或 由小肠绒毛萎缩引起的疾病和病症。
[0094] 在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善局灶性绒毛萎缩和/或弥漫性绒毛 萎缩;增生性绒毛萎缩和/或发育不良性绒毛萎缩;和/或有和没有黏膜炎症的绒毛萎缩。 [00%]在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善增生性绒毛萎缩(有隐窝增生)和相 关疾病和病症，包括但不限于乳糜泄(有面筋(gluten)敏感性肠病）；慢性创伤;小肠移植； 尿回肠导管;肠黏膜炎症;肠溃瘍;肠吻合;膜高血糖素瘤;广泛性小肠切除；原发性回肠绒 毛萎缩;显微镜结肠炎(microscopic colitis)萎缩;肠微绒毛萎缩;和线粒体细胞病(线粒 体呼吸链异常）。
[0096]在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善发育不良性绒毛萎缩(没有隐窝增 生）和相关疾病或病症，包括但不限于：恶性肿瘤；帕内特细胞缺陷（paneth cel 1 deficien巧）；垂体功能减退;对无面筋饮食不响应的乳糜泄；热带口炎性腹泻（tropical sprue);福射相关的局部缺血;药物诱导的绒毛萎缩，如由新霉素和硫挫嚷岭诱导的绒毛萎 缩。
[0097] 在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善有黏膜炎症的绒毛萎缩W及相关的 疾病和病症，包括但不限于:乳糜泄;严重的食物不耐受(alimentary intolerance);先天 性克罗恩病；自身免疫性肠病;小肠结肠炎;和免疫缺陷综合征。
[0098] 在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善由包括但不限于W下的疾病引起的 绒毛萎缩:肝炎;肠癌;肠淋己瘤；1型糖尿病;变态反应;嗜酸细胞性胃肠炎(eosinophi 1 ic gastroenteritis);病毒性胃肠炎；W及自身免疫性肠病。
[0099] 在某些实施方案中，本发明可用于治疗或改善与小肠中与乳糜泄相关的绒毛萎 缩，包括但不限于Marsh 3a型绒毛萎缩(每100个肠细胞>40个上皮内淋己细胞）、Marsh 3b 型绒毛萎缩(每100个肠细胞>40个上皮内淋己细胞;显著的绒毛萎缩）、Marsh 3c型绒毛萎 缩(每100个肠细胞>40个上皮淋己细胞，绒毛区不存在或几乎不存在）（基于乳糜泄和肠绒 毛萎缩的经修改的Marsh分类）。
[0100] 本发明还可用于治疗或改善与小肠损伤相关的症状，包括但不限于吸收不良、腹 泻、恶屯、、呕吐、电解质失衡、吸收不良和脱水。 制备用于提高小肠功能的治疗组合物
[0101] 在另一方面，提供了用于制备本发明治疗组合物的方法。在一个实施方案中，该方 法包括制备用于促进有小肠上皮细胞损失或损伤之对象的肠健康的组合物，其中所述组合 物包含W下、基本由W下组成或者由W下组成:有效量的一种或更多种成分，其中运些成分 被有小肠上皮细胞损失或损伤的对象的小肠吸收，其中该组合物的总摩尔渗透压浓度为 230mosm至280mosm，或其间的任何值(优选为约250mosm至260mosm)，其中该组合物的抑为 约7.1至7.9或其间的任何值(优选为约7.4)，其中该组合物被配制为用于经肠施用。
[0102] 在一个实施方案中，成分选自：游离氨基酸、二肤、单糖、二糖或其组合，W及任选 地，电解质、维生素、矫味剂和/或载体。
[0103] 在一个实施方案中，本发明提供了通过筛选在绒毛和隐窝区的小肠上皮细胞破坏 之后保持或获得吸收能力的营养物或电解质，筛选用于包含进本发明治疗组合物之营养物 或电解质的方法。
[0104] 本发明的筛选方法可用于确定可用于治疗或改善与小肠上皮细胞的损失、破坏或 减少(特别是绒毛细胞、肠细胞和/或肠祖细胞的损失、破坏或减少)相关的疾病或病症的治 疗营养物和/或电解质。在一些具体的实施方案中，该方法可用于设计用W满足特定患者或 患者群体之需求的组合物和方法。在一个具体的实施方案中，本发明组合物可用于治疗或 改善放射治疗、化学治疗治疗、质子治疗之后的或者由小肠的急性或慢性炎症引起的小肠 损伤。
[0105] 在一个实施方案中，本发明筛选方法包括： a) 使有黏膜损伤的小肠上皮组织与候选营养物或电解质相接触； b) 确定小肠上皮组织吸收所述营养物或电解质的能力水平； C)将所述水平与预定水平(如正常组织中）进行比较；W及 d)如果候选营养物或电解质的吸收能力是预定水平的至少例如50%、60%、70%、80% 或90%，贝选择该候选营养物或电解质。
[0106] 在一个实施方案中，本发明筛选方法包括： a) 通过经肠途径向有小肠黏膜损伤的对象施用候选营养物或电解质； b) 确定所述营养物或电解质的肠吸收能力水平； C)将所述水平与预定水平(如正常对象中）进行比较;W及 d)如果候选营养物或电解质的吸收水平是预定水平的至少例如50%、60%、70%、80% 或90%，贝选择该候选营养物或电解质。
[0107] 可根据指标(包括，例如Km、Vmax和Is。)的组合来确定吸收能力的水平。
[0108] 本领域技术人员可建立预定参考值。例如，可通过测量没有黏膜(如绒毛细胞、隐 窝细胞、肠细胞和肠祖细胞)损伤的正常小肠上皮组织中的所述营养物或电解质的吸收能 力水平来建立预定的参考值。在另一情况下，可通过测量没有小肠上皮细胞(如绒毛细胞、 隐窝细胞、肠细胞和肠祖细胞)损伤的正常群体中的所述营养物或电解质的吸收能力水平 来建立预定参考值。
[0109] 在另一个实施方案中，本发明筛选方法包括： a) 确定有黏膜损伤的小肠组织的功能； b) 使候选营养物或电解质与小肠组织相接触； C)确定小肠组织与候选营养物或电解质接触后小肠组织的功能；W及 d)如果所述候选营养物或电解质提高了小肠功能，则选择该候选营养物或电解质。
[0110] 在另一个实施方案中，本发明筛选方法包括： a) 确定有小肠黏膜损伤的对象的小肠功能； b) 通过经肠途径向对象施用候选营养物或电解质； C)确定施用候选营养物后对象的小肠功能；W及 d)如果所述候选营养物或电解质提高了小肠功能，则选择该候选营养物或电解质。
[0111] 在某些实施方案中，如果候选营养物或电解质的施用使细胞旁通透性 (paracellular permeability)下降、增强了小肠屏障功能，则小肠功能得到了提高。此外， 如果候选营养物或电解质的经肠施用预防或治疗了腹泻和/或延长了存活，则小肠功能得 到了提高。
[0112] 在某些实施方案中，可使用如实施例(特别是实施例15至17)中所说明的方法来选 择提高了有小肠黏膜损伤之对象的小肠功能的营养物和电解质。
[0113] 合适的候选电解质包括例如Na+、K+、肥〇3-、(：1-、]\%2\化 2+^62+和/或化2+。
[0114] 合适的候选营养物包括选自例如W下的必需氨基酸和非必需氨基酸:异亮氨酸、 亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、鄉氨酸、组氨酸、酪氨酸、砸半脫氨酸 (selenocysteine)、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、半脫氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬酷 胺和化咯赖氨酸。合适的候选营养物还可包括脂肪酸、糖类(例如，单糖、二糖和寡糖）、电解 质和维生素。
[0115] 候选营养物还可包括非天然氨基酸，如鸟氨酸、瓜氨酸、径脯氨酸、高丝氨酸 (homoserine)、苯甘氨酸、牛横酸、舰化酪氨酸、2,4-二氨基下酸、a-氨基异下酸、4-氨基下 酸、2-氨基下酸、丫-氨基下酸、E-氨基己酸、6-氨基己酸、2-氨基异下酸、3-氨基丙酸、正亮 氨酸（norleucine)、正鄉氨酸（norvaline)、肌氨酸（sarcosine)、高瓜氨酸 (homocitrulline)、横基丙氨酸（cysteic acid)、T-下基甘氨酸、T-下基丙氨酸、苯基甘氨 酸、环己基丙氨酸和e-丙氨酸。
[0116] 在另一个实施方案中，营养物和电解物的选择还至少部分取决于对象所接受的IR 剂量、福射源、被福照的身体部分、和/或福射后的时间；化学治疗剂的类型、剂量、和/或化 学治疗后的时间；W及对象所接受的质子治疗的剂量，和/或质子治疗后的时间。
[0117] 本发明筛选测定可采用本领域中公知的技术组合来进行，包括但不限于尤斯室研 究、细胞学、免疫组化、Western印迹、酶联免疫吸附测定化LISA)、聚合酶链反应(PCR)、离子 通量实验（ion flux experiment)、免疫沉淀、免疫巧光、放射免疫测定和免疫细胞化学。
[0118] 具体地，成分可根据成分被患者小肠黏膜吸收的能力（如通过原位或分离的肠制 备物确定的)来选择，采用技术如尤斯室来测量小肠对此类成分的吸收能力。 制剂和施用
[0119] 本发明提供了包含治疗有效量的本发明组合物和任选的可药用载体的治疗组合 物或药物组合物。运样的药用载体可W是无菌液体，例如水。治疗组合物还可包含不影响受 损伤小肠上皮(特别是绒毛区和刷状缘中）之健康或功能的赋形剂、辅料、矫味剂等。在一个 实施方案中，治疗组合物和其中所包含的全部成分都是无菌的。
[0120] 术语"载体"是指与化合物一起施用的稀释剂、辅料、赋形剂或载剂。合适的药用载 体的实例描述于E.W.Ma;rtin的"Remington' S Pharmaceutical Sciences"中。运样的组合 物包含治疗有效量的治疗组合物，W及合适量的载体W向患者提供适当的施用形式。制剂 应当适合经肠施用模式。
[0121] 本发明还提供了药物包(pharmaceutical pack)或药盒化it)，其包括填充有一种 或更多种成分(例如，本发明的化合物、载体或药物组合物)的一个或更多个容器。
[0122] 在一个实施方案中，药物包或药盒还包括施用说明书，例如，关于有效治疗剂量， 和/或参考例如暴露于福射、化学治疗或质子治疗后之时间的施用时间。在一个实施方案 中，组合物的治疗剂量根据小肠黏膜的损伤程度来确定。例如，对于接受了或者即将接受福 射的对象，组合物的治疗剂量根据福射源、被福照的身体部分和/或福射后的时间来确定。 对于接受了或者即将接受化学治疗的对象，组合物的治疗剂量根据化学治疗剂的类型、化 学治疗剂的剂量和/或化学治疗后的时间来确定。对于接受了或者即将接受质子治疗的对 象，组合物的治疗剂量根据对象所接受的质子治疗的剂量和/或质子治疗后的时间来确定。 材料和方法 实验动物
[0123] 为了研究活性HCO3-分泌，从国家癌症研究所(National Cancer Institute)获得8 周龄的、未经福照和经福照的雄性BALB/c小鼠。将小鼠随机分组，使用W1.84Gy/分钟递送 丫-福照的" 7Cs源，根据胃肠急性放射综合征（gastrointestinal acute radiation syn化ome，GI ARS)模型WSiepherd Mark-I福照腹部。福射W单分割（single fraction)给 出。在骨盆或腹部肿瘤的放射治疗期间，GI ARS模型将实现肠组织的最大福射损伤，并模拟 肠损伤。
[0124] 检查作为福射后的时间和福射剂量升高二者之函数的短路电流(shod circuit currents。）的变化W确定产生显著的Is。变化所需的最早时间和最小福射剂量。运些研究 经罗切斯特大学动物管理与使用委员会(University of Rochester Animal Care and Use Committee)批准。 离子通量研究
[0125] 放血（exsanguination)之后，通过排除邻近盲肠的小肠远端的12cm而得到空肠 段。在从下面的肌肉层剥离黏膜之前，在冰冷的林格液中清洗和冲洗该段(Zhang, Ameen等 .2007)。将黏膜安放在面积为0.30cm2的尤斯型踰彩特化UCite)室（P2304 ,Physiologic instruments，San Diego，CA 92128 USA)的两半之间，使用电压/电流错装置（VCC MC-8， Physiologic inshumentSiSan Diego,CA 92128 USA)记录电参数（Vidyasagar等.2005; Vidyasagar等.2004; Zhang等.2007; Vidyasagar和Ramakrishna 2002)。在包含SmM的谷氨 酷胺且用95%氧气（〇2)与5%二氧化碳（0)2)之混合物充气的常规林格液（表1)中沐浴 (bathed)肠制备物的两边。 表1.溶液的组成
注释:值WmM计。离子溶液用于离子置换实验。所有溶液的pH均为7.4。 在不含Cr的溶液中，使用也S〇4将pH调节至7.4， 而在所有其他溶液中，使用HCl进行调节。 缩略语:UB，未缓冲的溶液 肥〇3-运动的测量
[01%]使用双-滴定管（bi-burette)TIM 856(Radiometer Analytical SAS， Villeurbanne ,France)来测量剥离的空肠片中的HCO3-分泌（Vidyasagar等.2005; Vidyasagar等.2004; Zhang等.2007)。通过添加0.0 l山的0.025M硫酸化2S〇4)，自动化累使腔 溶液的pH保持恒定。通过向包含升高浓度的HC化-的弱缓冲溶液中添加已知量的也S〇4来建 立标准至稳定(S化ndard-t〇-s化t)pH校准W产生线性滴定曲线。
[0127] 将空肠组织的浴侦U(浆膜侧)暴露于缓冲溶液，而腔侦曝露于不含肥〇3^勺低缓冲溶 液(0.1-mM肥阳5(4-(2-?乙基)-1-赃嗦乙横酸)缓冲剂，pH 7.4)。肥〇3-分泌相当于添加到 腔溶液中用W将抑保持在7.4(或稳定抑)之酸的量。所有运些实验均在电压错条件下进行。 不含的HC03-的溶液用100 %化充气，含肥〇3-的溶液用95 %化和5 %C0流气。HC03-分泌表示为 Jieq ? h-i ? cm-2(Vidyas