一种天麻头风灵胶囊的指纹图谱检测方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及一种天麻头风灵胶囊的指纹图谱质量检测方法，属于药物技术领
[0002] 域。 技术背景：
[0003] 天麻头风灵胶囊由天麻、牛膝、玄参、地黄、当归、杜仲、川弯、槲寄生、野菊花、钩藤 十味药组成，具有滋阴谦阳，清眩止痛、祛风强筋骨、补肝益肾、息风止痉、镇静、镇痛和抗炎 作用。临床用于一般性头疼，手足麻木，慢性腰腿酸痛。收载于卫生部药品标准中药成方制 剂第十六册，标准号为：WS3 -B一3034一98。该标准检测方法的鉴别项为：（1)取本品10 粒的内容物，加乙醇20ml，加热回流40分钟，静置。取上清液10ml，加盐酸lml，加热回流1 小时后浓缩至约5ml，加水10ml，用石油醚（60~90°C ) 20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇 lml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅 胶G薄层板上，以氯仿一甲醇（40:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钥酸乙醇溶液， 在110°C烘约10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 该检测方法鉴别方法过于简单，仅以齐墩果酸作为对照；而天麻头风灵胶囊是由天麻、地黄 等十味中药材制成，活性成分复杂，仅以齐墩果酸作为鉴别指标，质量控制不够全面，如紫 丁香苷、蜕皮留酮、蒙花苷等成分得不到标定和控制；而且该鉴别采用的是薄层色谱法，由 于鉴别的对象成分复杂，鉴别灵敏度不高，操作较为复杂，易受外界因素影响，鉴别误差大。
[0004] 高效液相色谱是一种具有高灵敏度、高选择性、高效、快速的分离分析技术。在中 药的成分研究等方面都是重要的分析手段，在药典中的[鉴别]项下越来越多的使用到了 此方法，他给出的是高分辨率的轮廓图谱，重现性好，操作相对容易，而且相比薄层色谱是 封闭系统图谱，在线操作外界因素影响较小，色谱稳定性高，
[0005] 在线检测设备选择性较大，更适合中药指纹图谱的研究，因此，针对现有的天麻头 风灵胶囊质量控制标准的不足，探究建立一种天麻头风灵胶囊的HPLC指纹图谱的质量控 制方法将具有重要意义。
【发明内容】
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[0006] 本发明的目的是提供一种天麻头风灵胶囊的指纹图谱检测方法，这种方法是针对 天麻头风灵胶囊向相关的生产、检测机构提供检测的指标、检测的手段、技术方法等，以便 更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加 严格合理。
[0007] 具体地，一种天麻头风灵胶囊的指纹图谱检测方法，包括以下内容：
[0008] 照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定。
[0009] 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为25cm， 内径为4. 6mm，粒径为5 μ m);以0. 1-1 %磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下 表1中的梯度洗脱程序进行洗脱；检测波长为254nm ;柱温为20-30°C ;流速为每分钟 0. 5-1. 5ml ;理论塔板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。
[0010] 表1 :天麻头风灵成分梯度洗脱表：
[0011]
[0012] 对照品溶液的制备：取紫丁香苷、蜕皮留酮7蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇 制成每lml含紫丁香苷0. lmg、蜕皮甾酮0. lmg、蒙花苷0. lmg的混合溶液，摇匀，即得。
[0013] 供试品溶液的制备：取本品2g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml， 称重，超声处理20-40分钟，放至室温，用甲醇补足损失重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
[0014] 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测 定，记录135分钟的色谱图，即得。
[0015] 按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与天麻头风灵胶囊"标准 指纹图谱"经相似度计算，相似度不得低于0. 85。
[0016] 本发明所述的天麻头风灵胶囊可以是市售的各种规格的制剂，由天麻、牛膝、玄 参、地黄、当归、杜仲、川芎、槲寄生、野菊花、钩藤十味药制成，如通化利民药业有限公司、贵 州益佰制药股份有限公司、陕西白药制药有限公司等公司生产；也可以是现有技术制备而 成的天麻头风灵制剂。
[0017] 与现有技术相比，本发明能更加完善的控制天麻头风灵胶囊的产品质量。克服现 有鉴别技术不够全面准确的缺陷，以紫丁香苷、蜕皮留酮、蒙花苷作为对照指标项，更能判 断其药效的指标成分，使其专属性更强，采用HPLC指纹图谱的检测方法，采用本发明的条 件，选用适宜的参数进行梯度洗脱，才能得到专属、准确、稳定、可操作性强的理想的检测方 法，通过实验证明，本发明检测方法对天麻头风灵胶囊的质量控制更为有效，方法精密度、 稳定性均较高。
[0018] 为了能让本领域所属的技术人员进一步理解本发明的技术效果，作出以下实验例 加以说明，但本发明绝不仅限于以下实验例：
[0019] 试验例：
[0020] 1、仪器与材料
[0021 ] 色谱仪：岛津20A高效液相色谱系统
[0022] 色谱柱：Agilent Extend C18 柱（5 μ m，250mmX 4. 6mm);
[0023] 试剂：甲醇，北京化工厂，分析纯；
[0024] 乙腈，天津彪仕奇化学试剂有限公司，色谱纯；水：纯净水；
[0025] 天麻头风灵胶囊，贵州益佰制药提供：样品批号为20130302, 20130401， 20130503, 20130701，20130902, 20130903, 20140101，20140302, 20140402, 20140602。
[0026] 2、精密度试验：
[0027] 精密称取本品约2g (批号20130302)，按"实施例1的供试品制备方法"制备1份 供试品溶液，连续进样6次进行检测，其指纹图谱叠加图见图1，计算相似度，结果表明，相 似度为〇. 991-0. 996,仪器精密度良好。
[0028] 3、稳定性试验：
[0029] 取本品（批号20130302)，按"实施例1的供试品溶液制备方法"制备1份供试品 溶液，分别在约〇, 3,8,14, 20, 33小时检测，其指纹图谱叠加图见图2,计算相似度，结果表 明，33小时内测定的数据相似度在0. 970-0. 997之间，因此表明供试品在33小时内较稳定， 样品稳定性良好。
[0030] 4、重复性试验：
[0031] 精密称取本品约2g (批号20130302)，按"实施例1的供试品溶液制备方法"平行 制备6份供试品溶液，分别在上述色谱条件下进行检测，其指纹图谱叠加图见图3,计算相 似度，结果表明，相似度在〇. 992-0. 998之间，重复性良好
[0032] 5、天麻头风灵胶囊样品指纹图谱检测
[0033] 对益佰制药股份有限公司提供的10批天麻头风灵胶囊样品进行了指纹图谱检 测，并采用指纹图谱相似度评价软件计算相关结果，生成对照指纹图谱，供试品色谱图见图 4。 共有模式见图5。结果表明，相似度在0.992-0. 999之间，各批次重复性良好，工艺较稳 定。
[0034] 共有峰的标注：色谱图选择积分时间为5~135min，积分参数为：斜率灵敏度为 5, 峰览为0. 01，最小峰面积为1，最小峰1?为5,选择10批样品指纹图谱中峰面积占总峰面 积3 1 %的色谱峰进行标注如图5,共标注15个共有峰，其中，峰6为紫丁香苷，峰7为蜕皮 甾酮，峰10为蒙花苷。
[0035] 指纹图谱相似度标准的制定10批天麻头风灵胶囊指纹图谱与共有模式的相似度 在0. 902-0. 999之间，平均值达到0. 996,综合分析，拟定指纹图谱相似度值不低于0. 85。
【附图说明】：
[0036] 图1 :精密度考察色谱图
[0037] 图2 :稳定性考察色谱图
[0038] 图3 :重复性考察色谱图
[0039] 图4 :10批天麻头风灵胶囊样品检测色谱图
[0040] 图5 :天麻头风灵胶囊指纹图谱共有模式图
【具体实施方式】：
[0041] 实施例1 :天麻头风灵胶囊的指纹图谱检测
[0042] 照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D)测定；
[0043] (1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为 25cm，内径为4. 6mm，粒径为5 μ m);以0. 5 %磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度 洗脱，顺序为：按 〇-l〇mim :97% A, 3% B