处理締丙基氯(0.59mo 1 e)的叔 戊醇（120mL)和石油酸（370mL)溶液，随后使用乙醇钢的乙醇溶液（345mL，0.60mo 1 e)处理。 当反应混合物冷却至室溫时，通过真空过滤除去固体并对滤液减压浓缩。将残留液体装载 在硅胶柱（307. lOg)上并使用己烧-乙酸乙醋（19:1 ;9:1)洗脱。合并适当组分，随后减压浓 缩W得到淡黄色液体状的4-漠-2-下締腊(47.14g)。
[0057] (B)在约14分钟内向约40°C下揽拌的甲烧亚横酸钢的含水(4mL)乙醇（120mL)的等 摩尔溶液中逐滴加入来自部分(A)的产物（150mmo 1)。持续加热并揽拌6小时后，对反应混合 物进行减压浓缩。对深色残留糖浆(syrup)使用丙酬稀释，随后真空过滤W除去漠化钢。将 滤液浓缩为深栋色糖浆，将其装载在硅胶柱(约255g)上，使用氯仿-乙醇（19:1)洗脱。合并 适当组分，随后减压浓缩W生成浅班巧色液体（16.08g)。将该液体（10.48g)装载在硅胶柱 (约310g)上，使用氯仿-乙醇-己烧(66:4:30)洗脱。合并适当组分，随后减压浓缩W生成浅 班巧色液体，将该液体溶解在丙酬中并通过0.45WI1注射器滤器W除去细小颗粒。浓缩澄清 的滤液W生成预期产物(9.71g)。由光谱数据服务公司（Spectral Data Services，Inc.)在 400MHz和DMSO-ds溶液中获取4-甲基横酷基-2-下締腊的1h醒R谱。表1显示醒R结果的化学 位移数据(ppm)。
[0化引
[0059] Η NMR:S3.0-3.2(d，3H)，4.1-4.3(dd，2H)，[6.08(dm，J~16Hz)+6.12(d，J~7Hz)， IH] ,6.64-6.92(血，IH).
[0060] 4-甲基横酷基-2-下締腊的结构包含7个质子。所有质子都具有或存在合理的化学 位移。甲基和亚甲基质子的化学位移分配是明确的。6ppm和6.化pm之间的两组多重线可通 过其偶联常数(J)区分。J~16化与E-构型中締控质子的预期偶联常数一致，而J~imz与Z- 构型中締控质子的预期偶联常数一致。基于运些信号的RIV值的比较，E/Z比例为约58/42。 由于6.6ppm和7ppm之间信号的复杂性，无法精确测量剩余締控质子的偶联常数。该谱含有 一些杂质/溶剂峰(RIV总3.75)。
[0061] 实施例2.凝胶制剂1
[0062] 表2例示了一种含有4-甲基横酷基-2-下締腊的凝胶制剂。
[0063] 表 2
[0064]
[0065] 实施例3.小鼠中局部施用的活性化合物的抗炎活性
[0066] 该实验中使用由实施例1制备的4-甲基横酷基-2-下締腊。
[0067] 评价试验化合物、吗I噪美辛（阳性对照)及载剂在小鼠的局部花生四締酸诱导的耳 朵肿胀模型中的抗炎活性。
[006引使用体重22±2g的雄性ICR小鼠并随机分组;试验化合物及载剂对照具有10只小 鼠，且吗I噪美辛具有5只小鼠。将花生四締酸(20μ1丙酬：乙醇/1:1中0.5mg)局部施用到每只 小鼠右耳的前和后表面。在花生四締酸施用前30分钟及施用后15分钟，类似地施用表2中所 列的试验物质及载剂。测量右耳及左耳的厚度且所计算的差异表明右耳炎症。在花生四締 酸施用后60分钟及90分钟时，利用Dyer型号测微规测量耳肿胀，作为炎症指标。根据下式计 算抑制百分比：Ic-lVlc X 100,其中Ic及It分别指对照及经治疗小鼠的耳朵厚度(mm)的 增加。使用AN0VA和顿式t检验(Dunnett's t test)来确定载剂对照与治疗组之间的显著差 异。显著性定为P<0.05水平。表3总结了施用花生四締酸后90分钟时测量的结果。
[0069] 表3
[0070]
[0071] 相对于载剂治疗组，试验的化合物导致由花生四締酸引起的耳朵肿胀被抑制了 22%。经治疗的小鼠与载剂治疗的小鼠之间的差异被认为在统计学上显著（t检验得到p值 为0.002)。
[0072] 实施例4.小鼠中通过口服施用的活性化合物的抗炎活性(预示性实施例）
[0073] 将活性化合物4-甲基横酷基-2-下締腊溶解在载剂(DMS0)中至5-15mg/ml。向小鼠 经口服给予试验化合物、地塞米松（阳性对照)和载剂并评估其在小鼠中局部花生四締酸诱 导的耳朵肿胀模型中的抗炎活性。
[0074] 该实验中使用雄性ICR小鼠。各组(活性化合物、阳性对照和载剂)使用10只小鼠。 所有动物都维持在受控的溫度(22-24 °C)和湿度(60%-70%)环境和12小时光/暗循环下， 在使用前持续至少一周。
[0075] 将花生四締酸（2化1丙酬中0.5mg)局部施用到测试动物右耳的前和后表面。在花 生四締酸施用前30分钟及施用后15分钟，类似地施用表1中所列的试验物质（在载剂中）及 载剂。在花生四締酸前1小时经口管饲给予含试验化合物的载剂（lOmL/kg)和载剂（lOmL/ kg，50-150mg/kg)，而在花生四締酸攻击前3小时经口管饲给予地塞米松。在花生四締酸诱 导耳肿胀后60分钟和90分钟时，测量右耳及左耳的厚度且所计算的差异表明右耳炎症。显 著的活性定义为:相对于载剂治疗组，花生四締酸诱导的耳肿胀中统计学显著的抑制(通过 t检验测得P值小于0.05)。
[0076] 实施例5.小鼠中通过口服给药的活性化合物的镇痛活性(福尔马林模型，预示性 实施例）
[0077] 福尔马林试验为由福尔马林诱导的组织损伤引起的持续疼痛的模型。伤害性及炎 症性疼痛是通过将福尔马林稀溶液注射入爪内诱导的，导致包括爪退缩的伤害防御行为。 福尔马林模型包括疼痛的炎性、神经性及中枢机理。疼痛的早期(0至约10分钟)是因为伤害 性机理而疼痛的晚期（10-40分钟）是因为炎性疼痛和伤害性机理的组合。利用手动祿动测 量值评价疼痛行为。研究终点为祿动事件的次数。化unskaar等，Pain, 30:103-114,1987; Li 等，Mole州lar Pain,6:11,2010)
[0078] 研究中每组使用10只小鼠。在测试前(时间0)，将小鼠限制在布中并向左后爪的背 侧面皮下注射20化5%福尔马林溶液。经口管饲W5mL/kg的体积向小鼠给予载剂对照 (DMS0)和试验化合物4-甲基横酷基-2-下締腊(在DMS0中）。试验化合物的量为每剂量100或 500mg/kg。
[0079] W8mg/kg通过皮下注射向小鼠给予含阳性对照吗啡的盐水，之后立即注射福尔马 林并在时间零处测试。
[0080] 福尔马林注射后，将动物放入各自笼中，W人工方式观察60分钟。W五分钟的间隔 记录祿动事件，总共持续60分钟。
[0081] W5分钟时间间隔绘制载剂对照、吗啡治疗及试验化合物治疗的小鼠的福尔马林 注射后的不同时间点的祿动事件的次数。
[0082] 计算载剂、阳性对照及试验化合物在0-10分钟与10-40分钟之间的每分钟祿动事 件次数。每分钟祿动事件的统计学显著的降低表示该试验化合物可有效地治疗急性伤害性 疼痛(早期)或炎性伤害性疼痛(晚期）。
[0083] 实施例6.小鼠中通过局部给药的活性化合物的镇痛活性(福尔马林模型，预示性 实施例）
[0084] 动物及治疗方案与实施例5中所述的那些类似，不同之处如下。
[0085] 通过将小鼠左后爪浸在各自溶液中约30秒来局部给予试验化合物4-甲基横酷基- 2-下締腊(载剂中375mM，n = 10)及载剂对照(丙酬：乙醇l:l，n=10)。然后，收回爪并利用纸 巾擦拭W避免过度皮肤干燥。
[0086] W盐水中8mg/kg通过皮下注射向小鼠给予阳性对照吗啡(n = 10)。
[0087] 在福尔马林注射前15分钟时，皮下给予吗啡一次。在福尔马林注射前60分钟时，两 次局部给予(BID)试验化合物和载剂对照。
[0088] 福尔马林注射后，将动物放入各自笼中，W人工的方式观察60分钟。W5分钟间隔 记录祿动事件，总共持续40分钟。
[0089] 测定载剂对照、吗啡治疗及试验化合物治疗的小鼠在福尔马林注射后的不同时间 点的祿动事件次数。
[0090] 计算载剂、阳性对照及试验化合物在0-10分钟与10-40分钟之间的每分钟祿动事 件次数。进行双样品t检验W比较载剂组与试验化合物组。显著性定为P<0.05。
[0091] 实施例7.慢性缩窄性损伤模型中活性化合物的镇痛活性(预示性实施例）
[0092] 外周神经病变可产生综合征，其除了自发性疼痛外还包括对轻微接触的过度应答 (触觉异常性疼痛）。慢性缩窄性损伤为一种神经性疼痛模型。
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