专利名称：利用富含dha的可捕食生物的水生物种养殖的制作方法
技术领域：
本发明涉及水产养殖领域，尤其是提供一种用富含高不饱和脂肪酸(HUFA)的可捕食生物的水产业的饲养水产类的方法，特别地，不饱和脂肪酸为二十二碳六烯酸(DHA)，能使鱼在幼体阶段保持着高存活率。
水产养殖工业的扩张要求几个问题被阐述，最重要的一个是提供能供给充足营养食物的活体可捕食生物给幼体的困难。野生鱼幼体消费一个供给平衡营养的浮游植物可捕食的混合种群。然而，收集充足数量的浮游植物以满足水产养殖的需求是不可行的。一个选择是，挑选出可食生物类，尤其是轮虫和天南属类，目前培养来用做饲料。
然而通常地，那些人工养殖的可捕食生物，尽管它们提供了足够量的蛋白质和能量，仍不足以满足某些HUFA需求的脂质组合物，尤其是对幼体最适宜存活、生长和发育所必需的DHA和EPA(二十碳戊烯酸)。特别地，高含量的DHA被需要，可捕食生物中的DHA和EPA的比率是至少1∶1，较佳的比率是至少2∶1。
近来，这个难题可利用使可捕食生物在富集必需脂肪酸的富集组合物的存在下培养来解决。然而，对于这个目的目前可用的商业组合物，例如商标为“Selco(TM)”出售的产品，由于DHA含量低或者DHA∶EPA的比率不够高而不能满足上述需求。这些DHA富集水平为占全部脂肪3-5％的组合物Artemia的应用已经被报告(McEvoy et al.Aquaculture(水产养殖)163(1998)237-250)，用这些Artemia喂养的鱼12-15％的存活率(McEvoy et al.supra；Navarro et al.J.Fish Biol.43(1993)503-515)。本文中，存活率是指从第一次喂养到完全变形的存活百分比。对于成本划算的水产养殖生产来说，应该获得50％和更高的幼体存活率。
WO99/37166公开了一种基于应用从海藻油提取的废液流中获得HUFA干燥肥皂粉末，用鱼幼体必需的营养来富集活的可捕食生物的方法。大约是干重的2.7％的Artemia DHA富集水平被公开了，但是在水产养殖中的应用和对于鱼幼体存活的功效没有被公开。
另一种企图于用在水产养殖中的材料在WO99/06585被记述了。实施例中公开了24％重量比的DHA含量，但是磷脂的含量没有被公开。然而这种材料包含了可能降低可捕食生物脂肪吸收能力的高比例(大约32-37％)游离脂肪酸和高含量无脂质材料。
两种最后提到的材料都不是基于鱼用的，它们缺乏在鱼类中发现的多数HUFA，例如幼小鱼类需要的EPA和n-3脂肪酸。
在Sargent等人最近的观点中(Aquaculture(水产养殖)179(1999)217-229)，它强调除了对HUFA的需求之外，鱼类幼体对磷脂也有饮食需求，它着重强调鱼类幼体理想的饮食是具有和卵黄相似的组合物的饮食。根据这些作者，鱼卵黄包含大约10％重量比(在干物质成分中)的磷脂，该磷脂包含17％重量比的DHA和大约9％重量比的EPA。这些作者在他们的述评中推断关于如何利用现有可利用的材料建立这样一个工业规模饮食尚存在问题。
已经发现，提供HUFA和磷脂与鱼卵黄非常相近的组合物的富集水产可捕食生物是可能的。通过利用本发明的可捕食生物，保护水产生物幼体如大比目鱼幼体适宜存活、生长、染色和成形是可能的。作为例证，本发明提供了幼体阶段较高的存活率，并比以前公开的诸如大比目鱼的质量参数有所提高，使许多高需求鱼类的水产养殖更加经济和商业上可行。
依照本发明，养殖水产类的方法包括至少在水产类的幼体和/或幼体后期阶段，用至少占全部脂质12％重量比的DHA，较佳的是至少15％重量比DHA的可捕食生物喂养，例如那些至少17％重量比的，更佳的是至少20％重量比，例如至少25％重量比。
在较佳实施例中，可捕食生物也包含了大量的磷脂，例如在全部脂质的5-35％重量比范围内，例如在涵盖了全部脂质的10-20％重量比的5-25％重量比范围内。
在又一个较佳实施例中，可捕食生物提供了鱼类幼体和幼鱼需要的其他的HUFA，例如EPA和某些鱼特有的n-3 HUFA的比例为18∶3，18∶4，20∶4，22∶5。
发明人也发现本发明方法中的那些可捕食生物能通过富集富含DHA的脂质材料来获得，较佳的材料从鱼基资源获得。
可捕食生物最好应该不含太高含量的游离脂肪酸，因为大量的游离脂肪酸通常被认为是对鱼类幼体和幼鱼是有害的。较佳地，依据本发明，可捕食生物的游离脂肪酸少于全部脂质的约10％重量比。
本文中，“可捕食生物”指可以用作水产养殖场内生产的水产类幼体活饲料的任何海洋生物。这些海洋生物的通常论述可以在据此供参考的FAO(1995)出版的Lavens&Sorgeloos(eds.)“Manual on the production and use of live food for aquaculture(用于水产养殖的活食的生产和使用手册)”中发现。从而，最通常应用的可捕食生物包括几个种类的藻类，轮虫，Artemia，包括桡脚类动物、水蚤类、线虫类、担轮幼虫的浮游动物。
这里使用的“水产类”被广义地理解包含淡水类和海生类，包括鱼类如大麻哈鱼、鲑鱼、鲤鱼、鲈鱼、鲤科鱼、大比目鱼、海鲈、牛舌鱼、遮目鱼、鲻鱼、鮨科鱼、海洋鲤科鱼、比目鱼、鲽形比目鱼、日本比目鱼、扁鲨，甲壳类如小虾、龙虾、小龙虾和螃蟹，软体类如双壳类。
这些水产类的一个通常特征是生活周期包括一个或者更多可能有非常特别营养需求的幼体阶段，而满足这些需求的活的可捕食生物的供应对成功水产养殖生产是必要的因素。如上所述，一个这样特别的需求是高含量的必要脂肪酸DHA，“必要”意味着可捕食生物不能再合成这些化合物。
本发明的一个特别实施例涉及了养殖大比目鱼类，然而，本发明也包含其他的水产类，例如，上面提到的那些。
本发明的一个基本优点是能得到比用其他方法得到的更高的鱼幼体存活率，对于大比目鱼和其他类能达到我们所知道的最好水平。象附随实施例中描述的，根据本发明在大规模鱼类养殖中能得到大比目鱼在幼体阶段的存活率始终是65-80％和更高，其他质量参数如恰当的染色是极好的。
在本发明的一个有益的实施例中，可捕食生物被喂给幼体阶段的水产类如大比目鱼，较佳的以致使至少30％的幼体在幼体阶段后期是活的，更佳的致使至少50％包括至少60％的幼体在幼体阶段后期是活的，甚至更佳的致使至少70％包括至少80％的幼体在幼体阶段后期是活的。
长大的养殖类的正确染色是重要的市场价值特征。一个正常染色的大比目鱼有一个有色的视觉边和一个白色的未染色的盲边。在本发明的首选实施例中，至少70％的大比目鱼幼体(新近变形幼体)显示出了恰当的染色，更佳的至少80％，甚至更佳的至少90％，例如95％，包括基本所有幼体显现了恰当的染色。
在某些实施例中，本发明提供了一种养殖并非只为消费，而例如用作装饰的鱼类和水族馆鱼类水产类的方法。
根据本方法，喂养给水产类的可捕食生物可能从任何能被饲养并应用在水产养殖业中的可捕食生物中选取，在有益实施例中，可捕食生物是甲壳类例如Artemia、桡足类、水蚤、裸腹蚤属(moina)类；包括折皱臂尾轮虫(Brachionus plichatilis)，圆叶臂尾轮虫(Brachionus rotundiformis)和Brachionus rubens的轮虫类；或者臂足类(Brachiopoda)。
涉及Artemia类的实施例是尤其有用的。依据本发明的方法，Artemia类在幼虫(naupliar)、幼虫后期(metanaupliar)和成年阶段可以被培养并应用。
在本发明的某些实施例中，水产生物在海洋环境中被饲养。这里所用的海洋环境描绘为包括海水或者模拟海水的水介质，例如加盐(如氯化钠)的水介质。
依据本发明，可捕食生物体可为任何适当形态如作为包含可捕食物的组合物喂给水产养殖生物。在一个较佳实施例中，所述组合物的生物体有占生物体全部脂质至少20％重量比的DHA含量，更佳的占生物体全部脂质至少25％重量比，例如占生物体全部脂质至少30％重量比。
在本发明的实施例中，组合物包括具有占生物体全部脂质至少12％重量比DHA的水产鱼类饲料生物，所述组合物包括至少50％重量比的水。在一个特别实施例中，组合物的水相中包括至少0.5％重量比的氯化钠。
其他实施例中的组合物是部分干燥的，致使水含量小于50％重量比例如最多40％重量比，包括最多25％重量比例如最多10％重量比，包括最多5％重量比的水份。这样的组合物可以是任何适当的形状，包括粉末状、颗粒状和薄片状。
从上面可以推断出，为了能使组合物提供一个重要的DHA比率，可捕食生物体的全部脂质含量需要是，例如，至少是干物质基的20％重量比，包括至少25％dw，较佳的是至少30％dw。
表格1.1
富含磷脂的成分通常这样制备将切碎的鱿鱼(150千克)加入到300升异丙醇中，将混合物剧烈搅拌4-6小时并放置过夜。接下来，过滤混合物，将300升正己烷加入到滤出液并混合。这就导致了混合液分成了可分离的两相。包含大部分的正己烷和异丙醇的上面-层被分离，并通过50升的旋转蒸发器真空蒸馏数次，总共产出了2.2千克富含磷脂的产出物，这部分是含有约为65％重量比的磷脂和大约40％重量比的DHA的棕黄色蜡状物。
材料TG4010用作组合物中的富含DHA成分，该成分从富含DHA的鱼类油基材料分离出来，包含40％重量比的DHA，大约10％重量比EPA和大约10％重量比的其它n-3 HUFA。脂肪酸主要以甘油三酸脂形式存在，该材料含有的游离脂肪酸量很少。
作为富含DHA成分的资源的其它材料也被测试过，例如TG5010(也是来自Croda)，大约含有50wt％的DHA，以及酶化合成的高度富含DHA的甘油三酸脂。实施例2用于养殖水产类的丰富Artemia的培养Artemia的包囊在最佳条件(海水中27-29℃下，pH值约为8，氧含量约为4mg/L)下孵化出来。冲洗新孵化出来的Artemia幼虫并将其转移到一个250升的容器以得到200,000/L的密度。温度保持在25-28℃，氧含量5-6mg/L，用碳酸氢钠(2g/L)将pH值缓冲在7.5。通过流过容器底部的开孔空气使容器充满空气。把实施例1中介绍的富集组合物加到容器中以达到0.2g/L的浓度，10小时后在加入同样的量，第一次加入富集组合物24小时后，Artemia有了如下的油脂组成(油脂干重比31％)，最左边一栏的数字代指了碳元素的数目和油脂组成的脂肪酸中的双键，DHA是22∶6、EPA是20∶5
根据本发明，得到的Artemia具有高含量的DHA，因此特别适合饲养幼鱼，诸如大比目鱼的幼鱼。实施例3用另外的富集组合物培养Artemia将新近孵化的Artemia置于250L容器以及如实施例2所述的条件内。该Artemia用混有2wt％Chremophore A25乳化剂的脂质组合物饲养。该脂质组合物含实施例1组合物的50wt％的磷脂成分；25％的“DHA-80”(含80wt％DHA的必需三酸甘油酯。从甘油和DHA脂肪酸用南极洲假丝酵母如US 5,604,119所述酶化合成)；和25％重量比Lysi-22(TM)(Lysi hf，冰岛，一种有22％重量比DHA的鱼油)。该饲料组合物加入容器中至浓度为0.2g/L，12小时后再加入同等量。在第一次富集组合物加入后24小时Artemia具有下列的脂质组成(34％dw脂质)
根据本发明，得到的Artemia具有高含量的DHA(9.5％dw)与其他的鱼类特徵n-3 HUFA，因此特别适合饲养诸如大比目鱼的幼鱼。实施例4用来养殖轮虫(Brachionus plichatilis)的富集组合物的利用轮虫在与实施例2中描述的相似的环境中养殖，他们被用Isochrysis浮游生物和酵母喂养，并用实施例2中描述的除了以Croda 50代替Croda 40外的富集组合物在27℃富积6小时，Croda 50包含约50％重量比的DHA。轮虫有下面的脂质组成(22％dw脂质)
根据本发明，得到的轮虫具有高浓度的DHA和非常高含量的磷脂，因此特别适合水产养殖业。实施例5HUFA和富含磷脂的Artemia对水产养殖大比目鱼的应用大比目鱼幼体在230-250°d下被第一次喂养(°d温度(℃)的倍增因素和从孵化开始的天数)。使用3，5或7m3圆形饲养池。幼体逐渐适应了11℃的饲养温度和300-500勒克斯的光强度。每天在早上和傍晚喂Artemia给幼体共两次。在早上喂养前Artemia用富集组合物富积24小时，接下来在13-15℃下为下午的喂养又储存7-8小时。调节进食供应量以允许Artemia被很好消化。很少的微藻类(Microalgae)(Isocrysis sp.)加入到养殖水中以降低压力和便于最大的摄取率。在饲养池的的中间设有微小通风使水质和食物颗粒均匀。需要流入微小环流以分散幼体。水交换从开始时的每24小时1，2次升高到最后阶段的每24小时3，3次。幼体饲养池每天被清洗。
从喂养开始到幼体阶段后期饲养池中超过80％的存活率被观测到(90％排除“嘴裂”颚残缺的幼体)，通常可观测到65-75％的存活率。平均起来大约80％的幼体显现了正确的染色，但是在一个饲养池中最多有96％的正确染色被观测到。正确的染色是指在视觉边的正常染色颜色和盲边的不染色。在一个饲养池总平均起来65％的幼体而最多80％的幼体显现出正确的眼睛移动，即有两只眼睛都在视觉边。正在进行的实验表明甚至更高的平均存活率和染色率能得到。
结果显示根据本发明富含DHA的可捕食生物尤其适合于水产类如大比目鱼的高存活率和高质量的养殖。
权利要求
1.一种养殖水产类的方法，该方法包括至少在水产类的幼体和/或幼体后期阶段，用至少在全部脂质中含有至少12％重量比DHA的可捕食生物来喂养。
2.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述全部脂质中DHA的含量至少是15％重量比。
3.一种如权利要求2所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述全部脂质中DHA的含量至少是20％重量比，包括至少25％重量比。
4.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述饲养的可捕食生物可能从包括Artemia、桡足类、水蚤的甲壳类、裸腹蚤属(moina)类，轮虫类或者臂足类(Brachiopoda)中选取。
5.一种如权利要求4所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述甲壳类是Artemia类。
6.一种如权利要求5所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述Artemia类在幼虫(naupliar)、幼虫后期(metanaupliar)或成年阶段饲养在水性介质中。
7.一种如权利要求4所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述可捕食生物是轮虫类或臂足类(Brachiopoda)。
8.一种如权利要求7所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述轮虫类从包括折皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis)、圆叶臂尾轮虫(Brachionus rotundiformis)和Brachionusrubens的组类中选取。
10.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述被养殖的水产类是大比目鱼类。
11.一种如权利要求10所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述可捕食生物被喂给幼年阶段的大比目鱼类。
12.一种如权利要求11所述的养殖水产类的方法，其特征在于，至少有30％被养殖的幼体在幼年阶段后期仍是活的。
13.一种如权利要求12所述的养殖水产类的方法，其特征在于，至少有50％被养殖的幼体在幼年阶段后期仍是活的。
14.一种如权利要求13所述的养殖水产类的方法，其特征在于，至少有70％被养殖的幼体在幼年阶段后期仍是活的。
15.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述被养殖的水产类是从包括鱼类如大麻哈鱼、鲑鱼、鲤鱼、鲈鱼、鲤科鱼、大比目鱼、牛舌鱼、遮目鱼、鲻鱼、鮨科鱼、比目鱼、海洋鲈科鱼、鳕鱼、黑线鳕、日本比目鱼、鳗鲡，甲壳类如小虾、龙虾、小龙虾和螃蟹，软体类如双壳类的种类中选取的。
16.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述被养殖的水产类是从装饰鱼类和水族馆鱼类中选取的。
17.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述水产生物被养殖在海洋环境中。
18.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述水产生物被用含有占生物体全部脂质的20％重量比的DHA的水产捕食生物的水产饲料组合物来喂养。
19.一种如权利要求18所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述鱼类被用含有占生物体全部脂质的25％重量比的DHA的水产捕食生物的组合物来喂养。
20.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述饲料生物的全部脂质含量是占干物质基的至少20％重量比。
21.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述鱼类被用含有占生物体全部脂质的至少12％重量比的DHA的水产捕食生物的水产鱼类饲料生物体的组合物来喂养，组合物含有至少50％重量比的水相。
22.一种如权利要求21所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述水相中含有至少0.5％重量比的氯化钠。
23.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述鱼类被用含有占生物体全部脂质的至少12％重量比的DHA的水产饲料动物的组合物来喂养，组合物含有少于50％重量比的水，包括至多10％重量比。
24.一种如权利要求1所述的养殖水产类的方法，其特征在于，所述组合物形式选自包括粉末、颗粒和薄片的形状。
全文摘要
本发明提供了一种养殖水产类的方法，包括至少在水产类的幼体和/或幼体后期阶段，用至少占全部脂质12％重量比的DHA的可捕食生物，如Artimia或轮虫来喂养。该方法适用于喂养的鱼类如大比目鱼、大菱鲆、鲈鱼、鲤科鱼和比目鱼。
文档编号A01K67/033GK1400866SQ01804867
公开日2003年3月5日 申请日期2001年1月15日 优先权日2000年1月14日
发明者博德·哈塔森, 古德曼·哈尔森, 奥拉夫·哈德森 申请人:博德·哈塔森, 古德曼·哈尔森, 奥拉夫·哈德森