专利名称：参与油菜素类固醇合成的基因的制作方法
权利要求书(按照条约第19条的修改)1.(删除)2.具有核苷酸序列(1)或(2)，及(3)或(4)的多核苷酸(1)SEQ ID NO1的核苷酸序列，(2)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，(b)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成，(3)SEQ ID NO3的#51到#1625的核苷酸序列，(4)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(c)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，(d)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
3.(删除)4.(删除)5.一种包含一个启动子及权利要求2的多核苷酸的多核苷酸，其中所述两个核苷酸序列以正向连接所述启动子。
6.一种包含一个启动子及权利要求2的多核苷酸或该多核苷酸一部分的多核苷酸，其中至少一个所述核苷酸序列或其一部分以反向连接所述启动子。
7.(修改)一种包含权利要求2、5和6任一项的基因或多核苷酸的质粒。
8.(修改)一种用权利要求2、5和6任一项的基因或多核苷酸转化的植物。
9.(修改)一种改变植物形态学的方法，所述方法包括如下步骤用权利要求2的多核苷酸转化植物，并促进或抑制所述基因或所述多核苷酸的表达。
10.(修改)一种改变植物形态学的方法，所述方法包括如下步骤刺激用权利要求5或6的基因或多核苷酸转化的所述植物的启动子。
11.通过权利要求9或10的方法改变了形态学的植物。
12.(删除)13.(修改)一种下述(a)或(b)的蛋白质和下述(c)或(d)的蛋白质的混合物或复合物(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，(b)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成，(c)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，(d)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
换句话说，在完整植物中只表达ROT3(＝CYP90C1)只对叶及花器官有效，特别在纵向上有效。花器官衍生自变形的叶，在它们间存在基因调节形态学的共同途径。另一方面，ROT3(＝CYP90C1)和CYP90D1的组合对整体植物都有效。通过操纵ROT3(＝CYP90C1)和CYP90D1的核酸及这些基因编码的蛋白质，可以随意及同时改变叶和花的形状，并且还可以只改变花的形状而不改变植物主要部分的高度及叶的形状。
就是说，本发明涉及具有核苷酸序列(1)或(2)的基因(A)(1)SEQ ID NO1的核苷酸序列，(2)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，(b)具有衍生自SEQ ID NO2的氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
而且，本发明也涉及具有核苷酸序列(1)或(2)，及(3)或(4)的多核苷酸(B)(1)SEQ ID NO1的核苷酸序列，(2)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，(b)具有SEQ ID NO2氨基酸的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成，(3)SEQ ID NO3的#51到#1625的核苷酸序列，(4)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(c)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，(d)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
而且，本发明涉及i)包含一个启动子及基因(A)的多核苷酸，所述基因的核苷酸序列以正向连接所述启动子，ii)包含一个启动子及基因(A)的基因或部分基因的多核苷酸，其核苷酸序列或部分所述核苷酸序列以反向连接所述启动子，iii)包含一个启动子及所述多核苷酸(B)的多核苷酸，其中上述两个核苷酸序列以正向连接所述启动子，或者iv)包含一个启动子及多核苷酸(B)或其部分的多核苷酸，其中至少一个上述核苷酸的核苷酸序列或其部分以反向连接上述启动子。
本文所用的启动子在后详述，包括花椰菜花叶病毒35S启动子、热休克启动子、化学诱导启动子等。另外，对将启动子与上述基因的连接方式没有限制，连接可以使用遗传工程常规技术适当进行。
另外，本发明涉及含有上述基因或上述多核苷酸之一的质粒及上述基因或上述多核苷酸转化的植物。
而且，本发明涉及含有上述多核苷酸的质粒。本文所用质粒包括双元载体如pBI-121质粒、Ti质粒等。
而且，本发明可应用的植物包括所有种子植物。
为转化这些植物，本发明的基因插入可以使用常规遗传工程方法转化上述植物的上述质粒中。
另外，本发明涉及改变植物形态学的方法，所述方法包括通过基因(A)或多核苷酸(B)转化植物及增强或抑制上述基因或上述多核苷酸表达的步骤。而且，本发明涉及改变植物形态学的方法，所述植物被上述基因或多核苷酸任一所转化，所述方法包括刺激转化植物中相应启动子的步骤。并且，本发明涉及通过上述方法任一项改变了形态学的植物。
而且，本发明涉及以下蛋白质(a)或(b)(a)具有SEQ ID NO2氨基酸的蛋白质，
(b)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
而且，本发明涉及上述蛋白质及以下蛋白质(c)或(d)的混合物或复合物(c)具有SEQ ID NO4氨基酸的蛋白质，(d)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
可通过使用以下方法操纵CYP90D1及ROT3(＝CYP90C1)的核酸分子和其编码的蛋白质(1)包含以下步骤的方法将一可操纵的启动子与CYP90D1(SEQ ID NO1)和ROT3(＝CYP90C1，SEQ ID NO3的#51到#1625)的DNA分子连接，将其通过适当的常规方法如Ti质粒转导入植物，并施加外部刺激使启动子调节上述基因的表达。此处使用的启动子例如如下*35S启动子(可以组成性表达)*热休克启动子(可以温度依赖性表达)*Dex-诱导启动子(可以通过暴露于地塞米松表达)*矮牵牛(petunia)CHS-A启动子(彩色花瓣植物中花瓣特异表达并且在拟南芥中是糖依赖性表达，对花瓣非特异，但特异于叶芽)除了这些启动子，可以使用植物领域常规的其它启动子。
(2)抑制ROT3或CYP90D1功能的方法可通过反义RNA方法(一种转导改变了的基因使得以反向被转录的方法)或通过RNAi方法(一种转导改变了的基因使得以正向及反向串联连接基因的一部分及因而被全部转录的方法)抑制特异基因的功能。本发明应用了上述方法抑制基因表达。因为已揭示了靶基因CYP90D1(SEQ ID NO1)及ROT3(＝CYP90C1，SEQ ID NO3的#51到#1625)，所以可进行其表达的定向抑制。
(3)组合方法首先独立制备单独改变的CYP90D1及ROT3(＝CYP90C1，SEQID NO3的#51到#1625)的植株(strain)，然后可以使用两种方法通过传统遗传学在它们之间杂交或直接转导两个改变的基因将产生双重改变的植株。
(4)前体发酵的方法存在至少部分负责油菜素类固醇生物合成的基因当在酵母细胞中表达时显示酶活性的成功例子。使用这些例子的方法及提供适当的前体，可在酵母细胞或真核细胞中人工合成油菜素甾酮或油菜素内酯(最终及活性产物)，其中表达了ROT3及CYP90D1或上述基因之一的组合。
附图简述
图1示出了油菜素类固醇生物合成的完整途径。
图2示出了以下培养在相同条件下的拟南芥叶的形态学野生型(Ws-2)(No.1)，制造例1的植株(ROT3功能被抑制)(No.2)，制造例2的植株(ROT3及CYP90D1功能被抑制)(No.3和4)。No.3和No.4分别示出了部分有效及强烈有效的植株。
图3示出了用油菜素类固醇生物合成中间体及油菜素内酯处理后没有ROT3及CYP90D1功能的植株叶的形态学。对照未处理，6-D-CT用以下物质处理(下文同)6-Deoxocathasterone，6-D-TE6-Deoxoteasterone，6-D-3DT3-脱氢-6-deoxoteasterone，6-D-TY6-脱氧香蒲甾醇(6-Deoxotyphasterol)，6-D-CS6-脱氧油菜素甾酮(6-Deoxocastasterone)，CTCathasterone，TETeasterone，3DT3-Dehydroteasterone，TY香蒲甾醇(Typhasterol)，CS油菜素甾酮，BL油菜素内酯。
发明效果以前的发明中对在植物中显示独特生理活性的类固醇的生物合成途径的调节步骤有一些实际缺点。
即以前阐明的油菜素类固醇生物合成的调节因子涉及生物合成途径的早期阶段及在转基因植物中增强因子的表达导致整体植物的细长生长及使植物增大。因此，除了特殊应用外，上述调节因子没有实际应用价值。另一方面，在转基因植物中停止生物合成途径导致整体植物小型化，因而除了特殊应用外没有实际应用价值。换句话说，常规方法改变了植物的整体形状，没有实际价值。实际可用及有价值的转基因植物如下实施例所示在园艺中，只有花器官的大小是大的或只有叶的大小是小的，或蔬菜改良中，只用叶的大小是大的。因此，常规方法在不组合特异表达调节系统时进行植物的生物设计是有困难的。相反，按照本发明，使用ROT3(＝CYP90C1)与CYP90D1的组合可以控制特异器官在特异方向上(特别是纵向)的大小及植物的整体大小。
而且，本发明阐明了ROT3(＝CYP90C1)与CYP90D1协同调节油菜素类固醇生物合成的最终步骤。因此，本发明可以用于作为油菜素类固醇化学合成的多种工业应用。
以下实施例阐明了本发明，然而，其无限制本发明之意。
制造例1作为ROT3功能被抑制的植株，本发明人使用了拟南芥的无效突变体rot3-1，其是ROT3的功能缺陷型突变体(Tsgue等，Development1221589-1600(1996))。突变细胞系在无菌条件下接种并在连续照明下在23℃培养。
制造例2为得到ROT3和CYP90D1功能均被抑制的植株，本发明人首先从拟南芥中使用以下引物组分离了CYP90D1的cDNAROT3h-cDNA-for5’-GTTAAAACACTAATGGACAC-3’(SEQ IDNO5)；
ROT3h-cDNA-rev5’-TGATTTATATTCTTTTGATCC-3’(SEQ IDNO6)，其可以特异扩增ROT3同源物(CYP90D1)。然后，上述CYP90D1(SEQ ID NO1)克隆插入通用载体pBI121以从花椰菜花叶病毒35S启动子反向转录，其中插入潮霉素抗性基因作为选择标记并且除去GUS蛋白编码区。将该构建体转导入农杆菌属(Agrobacterium)(C58C1 Rif-抗性)并通过in planta方法转导入拟南芥rot3-1，使用农杆菌悬浮培养基的常规方式。通过潮霉素选择转化体后，具有纯合插入基因的转化体通过自花传粉分离。然后，在无菌条件下接种植株并在连续照明下在23℃培养。
实施例1图2示出了以下在相同条件下培养的拟南芥叶的形态学野生物种(Ws-2)(No.1)，制造例1的植株(ROT3功能被抑制)(No.2)，制造例2的植株(ROT3和CYP90D1功能被抑制)(No.3和4)。ROT3功能抑制的植株的叶(图2-2)比野生型的叶(图2-1)在纵向上短，ROT3和CYP90D1功能都被抑制的植株的叶(图2-3&4)比以上植株的叶更短。简而言之，ROT3和CYP90D1是协同参与油菜素类固醇生物合成途径的基因。
实施例2制造例2制备的ROT3和CYP90D1功能被抑制的植株在无菌条件下自种子开始培养。上述植株的种子接种在补充了2％(w/v)蔗糖的MS培养基(通过0.2％脱乙酰吉兰糖胶固化)中并在播种后在无菌条件下在连续照明下在23℃常规培养。
另一方面，制备油菜素类固醇生物合成中间体(例如，6-D-CT6-Deoxocathasterone，6-D-TE6-Deoxoteasterone，6-D-3DT3-脱氢-6-deoxoteasterone，6-D-TY6-脱氧香蒲甾醇，6-D-CS6-脱氧油菜素甾酮，CTCathasterone，TETeasterone，3DT3-Dehydroteasterone，TY香蒲甾醇，CS油菜素甾酮)和油菜素内酯(BL)(BL得自WAKO pharmaceutical Co.(Fujikagaku Industry，Co.制造)，Dr.ShouzouJujioka，RIKEN和Dr.Tohide Takatsu，Jouetsu University of Education惠赠其它油菜素类固醇)的水溶液(0.1μM)。
将上述植物(ROT3和CYP90D1功能被抑制的植株)没入所述溶液中并轻轻摇动在上述水溶液中培养。当叶子用上述中间体或油菜素内酯处理时，取出无菌条件下的植物，用手术刀切掉叶柄并以相同方式处理。图3示出了这些叶子的照片。
如图3所示，每个油菜素类固醇中间体对没有ROT3及CYP90D1功能的植物没有作用，然而，终产物油菜素内酯(BL)诱导了大的叶子并示出独特的效果。即，ROT3和CYP90D1协同参与油菜素类固醇生物合成途径的终产物油菜素内酯的合成。
实施例3在以下拟南芥中确定油菜素类固醇的浓度野生株(Ws-2)，制造例1的植株(rot3-1和rot3-5，抑制了ROT3功能)及制造例3的植株(rot3/CYP90D1，抑制了ROT3及CYP90D1的功能)。在形成花结时通过收割、冷冻及干燥收集植物的地上部分并通过使用HPLC及GC-MS检测确定所述浓度。结果示于表1。
表1
注表中(-)示出数值小于检测界限(0.001ng/g)。
如表所示，抑制了ROT3的植株(rot3-1和rot3-5)中，油菜素内酯的产生显著降低，结果是前一步骤中的油菜素类固醇(特别是油菜素甾酮)产量增多。然而，抑制ROT3没有完全阻遏油菜素内酯的产生。换句话说，ROT3自身不能完全调节油菜素内酯的生物合成。
另一方面，抑制了ROT3及CYP90D1功能的植株(rot3/CYP90D1)中，油菜素类固醇生物合成中间体中油菜素内酯的量急剧减少，这表明从油菜素甾酮合成油菜素内酯的途径完全被同时抑制ROT3及CYP90D1所阻遏。换句话说，油菜素内酯的产生完全受ROT3及CYP90D1的组合作用调节。
序列表<110>独立行政法人 科学技术振兴机构<120>参与油菜素类固醇合成的基因<130>FS03-311PCT<160>6<210>1<211>1473<212>DNA<213>Arabidopsis thaliana<400>1atggacactt cttcttcact tttgttcttc tccttcttct tctttatcat catcgtcatc 60ttcaacaaga tcaacggtct cagatcatcc ccagcttcaa agaaaaaact taatgatcat 120catgttacat cccagagtca cggaccaaag tttccacacg gaagcttggg atggcccgtc 180atcggtgaaa ccatcgagtt cgtctcttct gcttactcag accgtcctga gagtttcatg 240gacaagcgtc gtctcatgta tgggagagtg tttaagtcgc atatttttgg aacggcgacg 300atcgtgtcga cggatgctga agtgaacaga gccgttttac agagcgactc gacagctttc 360gtgccgtttt acccaaaaac ggtaagggag ctaatgggaa aatcgtcgat acttcttatc 420aacgggagtt tacatagacg gttccatgga ttagtcggtt ctttcttaaa gtcgccactt 480ctcaaagctc aaatcgttag agacatgcac aagtttttgt cggaatccat ggatctatgg 540tccgaggacc aacctgtgct cctccaagac gtctccaaga ctgttgcatt caaagtactt 600gccaaggcat tgataagtgt agagaaagga gaagatttag aagagctaaa gagagagttt 660gaaaatttca tatcaggact catgtcatta ccaattaact tccctggaac gcaactccat 720agatctctcc aagctaagaa gaatatggtg aagcaagttg aaagaatcat agaaggcaaa 780attaggaaaa caaagaacaa ggaggaagat gatgttattg caaaggatgt tgtggatgtg 840ttgcttaagg actcaagtga acatttaact cacaatttga ttgctaacaa tatgatcgac 900atgatgatcc ctggccacga ttctgtccct gtcctcatta cccttgccgt caaattcctc 960tctgattctc ctgctgccct caatctccta acgaaaaaca tgaagctgaa aagtttgaag1020gaattgacag gagagccact atattggaat gactacttgt cgttaccttt aacacaaaag1080gtgattacag agacactgag aatgggaaat gttataattg gagtgatgag aaaggcgatg1140aaagatgttg aaataaaagg atatgtgata ccaaaaggat ggtgtttctt ggcctatctc1200agatcagttc atcttgatga agcttattat gagtctccgt acaaatttaa tccctggaga1260tggcaagaaa gggacatgaa cacgagtagt ttcagtcctt ttggaggtgg tcagagattg1320tgccctggtc tcgatttggc tcgtcttgaa acttcagttt ttcttcacca tcttgtcact1380cgcttcagat ggatagcaga agaagacaca atcataaact tcccaacggt gcatatgaag1440aacaaattac ccatttggat caaaagaata taa 1473<210>2<211>490<212>PRT<213>Arabidopsis thaliana<400>2Met Asp Thr Ser Ser Ser Leu Leu Phe Phe Ser Phe Phe Phe Phe Ile1 5 10 15Ile Ile Val Ile Phe Asn Lys Ile Asn Gly Leu Arg Ser Ser Pro Ala20 25 30Ser Lys Lys Lys Leu Asn Asp His His Val Thr Ser Gln Ser His Gly35 40 45Pro Lys Phe Pro His Gly Ser Leu Gly Trp Pro Val Ile Gly Glu Thr50 55 60Ile Glu Phe Val Ser Ser Ala Tyr Ser Asp Arg Pro Glu Ser Phe Met65 70 75 80Asp Lys Arg Arg Leu Met Tyr Gly Arg Val Phe Lys Ser His Ile Phe85 90 95Gly Thr Ala Thr Ile Val Ser Thr Asp Ala Glu Val Asn Arg Ala Val100 105 110Leu Gln Ser Asp Ser Thr Ala Phe Val Pro Phe Tyr Pro Lys Thr Val115 120 125Arg Glu Leu Met Gly Lys Ser Ser Ile Leu Leu Ile Asn Gly Ser Leu130 135 140His Arg Arg Phe His Gly Leu Val Gly Ser Phe Leu Lys Ser Pro Leu145 150 155 160
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275 280 285Asn Asp Val Val Asp Val Leu Leu Arg Asp Gly Gly Asp Ser Glu Lys290 295 300Gln Ser Gln Pro Ser Asp Phe Val Ser Gly Lys Ile Val Glu Met Met305 310 315 320Ile Pro Gly Glu Glu Thr Met Pro Thr Ala Met Thr Leu Ala Val Lys325 330 335Phe Leu Ser Asp Asn Pro Val Ala Leu Ala Lys Leu Val Glu Glu Asn340 345 350Met Glu Met Lys Arg Arg Lys Leu Glu Leu Gly Glu Glu Tyr Lys Trp355 360 365Thr Asp Tyr Met Ser Leu Ser Phe Thr Gln Asn Val Ile Asn Glu Thr370 375 380Leu Arg Met Ala Asn Ile Ile Asn Gly Val Trp Arg Lys Ala Leu Lys385 390 395 400Asp Val Glu Ile Lys Gly Tyr Leu Ile Pro Lys Gly Trp Cys Val Leu405 410 415Ala Ser Phe Ile Ser Val His Met Asp Glu Asp Ile Tyr Asp Asn Pro420 425 430Tyr Gln Phe Asp Pro Trp Arg Trp Asp Arg Ile Asn Gly Ser Ala Asn435 440 445Ser Ser Ile Cys Phe Thr Pro Phe Gly Gly Gly Gln Arg Leu Cys Pro450 455 460Gly Leu Glu Leu Ser Lys Leu Glu Ile Ser Ile Phe Leu His His Leu465 470 475 480Val Thr Arg Tyr Ser Trp Thr Ala Glu Glu Asp Glu Ile Val Ser Phe485 490 495Pro Thr Val Lys Met Lys Arg Arg Leu Pro Ile Arg Val Ala Thr Val500 505 510Asp Asp Ser Ala Ser Pro Ile Ser Leu Glu Asp His515 520<210>5<211>20<212>DNA<213>Artificial sequence<400>5gttaaaacac taatggacac20<210>6<211>21<212>DNA<213>Artificial sequence<400>6tgatttatat tcttttgatc c 2权利要求
1.一种具有核苷酸序列(1)或(2)的基因(1)SEQ ID NO1的核苷酸序列，(2)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，(b)具有衍生自SEQ ID NO2的氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
2.一种具有核苷酸序列(1)或(2)以及(3)或(4)的核苷酸序列的多核苷酸(1)SEQ ID NO1的核苷酸序列，(2)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(a)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，(b)具有SEQ ID NO2的氨基酸的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成，(3)SEQ ID NO3的#51到#1625的核苷酸序列，(4)编码以下蛋白质之一的核苷酸序列，(c)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，(d)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
3.一种包含一个启动子及权利要求1的基因的多核苷酸，其中所述基因以正向连接所述启动子。
4.一种包含一个启动子及权利要求1的基因或该基因一部分的多核苷酸，其中所述基因以反向连接所述启动子。
5.一种包含一个启动子及权利要求2的多核苷酸的多核苷酸，其中所述两个核苷酸序列以正向连接所述启动子。
6.一种包含一个启动子及权利要求2的多核苷酸或该多核苷酸一部分的多核苷酸，其中至少一个所述核苷酸序列或其一部分以反向连接所述启动子。
7.一种包含权利要求1到6任一项的基因或多核苷酸的质粒。
8.一种用权利要求1到6任一项的基因或多核苷酸转化的植物。
9.一种改变植物形态学的方法，所述方法包括如下步骤用权利要求1的基因或权利要求2的多核苷酸转化植物，并促进或抑制所述基因或所述多核苷酸的表达。
10.一种改变植物形态学的方法，所述方法包括如下步骤刺激用权利要求3到6任一项的基因或多核苷酸转化的所述植物的启动子。
11.通过权利要求9或10的方法改变了形态学的植物。
12.下述(a)或(b)中的一种蛋白质(a)具有SEQ ID NO2氨基酸的蛋白质，(b)具有SEQ ID NO2氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
13.一种权利要求12的蛋白质和下述(c)或(d)的蛋白质的混合物或复合物(c)具有SEQ ID NO4氨基酸的蛋白质，(d)具有SEQ ID NO4氨基酸序列的蛋白质，其中缺失、取代或添加一或几个氨基酸并且其表达刺激油菜素类固醇的生物合成。
全文摘要
本发明涉及广泛发生在植物中的一种植物激素及在极低的浓度下显示生理作用如细胞扩散或细胞分裂的油菜素类固醇，控制其合成最终步骤的最重要的合酶蛋白及编码其的核酸分子还不知道。将一已知ROT3基因(＝CYP90C1，SEQ ID NO3的51到1625位，登录号AB008097)进行同源搜索而发现了与其具有51％同源性的碱基序列。检测这个序列的结果发现这个序列是控制具有调节植物大小等生理作用的油菜素类固醇合成步骤的一个新基因(CYP90D1，SEQ IDNO1)。还发现这个基因CYP90D1与上述ROT3基因(＝CYP90C1)一起控制油菜素类固醇合成的最终步骤。
文档编号A01H5/00GK1643150SQ03805868
公开日2005年7月20日 申请日期2003年3月7日 优先权日2002年3月12日
发明者塚谷裕一, 金炅泰 申请人:独立行政法人科学技术振兴机构