专利名称：一种坛紫菜丝状体纯系的制种方法
技术领域：
本发明涉及一种坛紫菜丝状体纯系的制种方法。
背景技术：
坛紫菜是我国南方的重要紫菜栽培种类，在浙江、福建和广东沿海有大规模栽培。坛紫菜的人工栽培历史已有数十年，栽培种藻一般是用野生的藻体，即从野生的藻类直接采果孢子接种贝壳丝状体获得用于海上栽培的叶状体苗种。近年来，也有少数研究者在实验室内获得丝状体用于接种贝壳获得栽培叶状体苗种，但该丝状体是采用一株雄性紫菜和一株雌性紫菜组织共同培养并使之杂交而获得的，从而产生的果孢子丝状体是杂合的；并且用这样的丝状体接种贝壳获得的叶状体栽培群体遗传上也是混杂的和不确定的，所以，叶状体后代的性状不稳定，直接导致收获的紫菜产量和质量不稳定，影响生产者的经济效益。
发明内容
本发明目的是提供一种获得坛紫菜丝状体纯系的制种方法，它能克服一种坛紫菜丝状体纯系的制种方法，其特征是先从野生或栽培的坛紫菜群体中挑选叶状体个体，并确定性别；将选定的藻体在海水中用脱脂棉球进行刷洗；将洗过的藻体贴在标本纸或复印纸上，通风阴干藻体；用解剖刀在靠近藻体中基部的位置切下藻片，在显微镜下检查确定无杂藻且全部细胞都是营养细胞；将藻片用超声波清洗，最后镜检确定组织片的两面均无杂藻或原生动物附着；将处理干净的一片藻片在19～27℃，光强2500～6000lux，光照时间12L12D的条件下培养；经1-2个月的时间将有红色的丝状体藻落长出；将单个藻落分出培养扩增。
本发明的优点1、由于坛紫菜是雌雄异体，所以，雌雄营养细胞分布在不同的个体上。本发明选用的是单性个体，而且选取的是营养细胞，整个制种过程没有外来遗传物质的引入；2、所用的起始材料很小，并且在获得丝状体藻落后再进行分离，将单个藻落单独培养，可保证获得的丝状体的遗传来源是单一的。由丝状体获得叶状体的发育过程的同步性和叶状体后代的均一性状也表明了获得的丝状体的遗传单一性。3、采用超声波清除表面的杂藻，无污染率达95％以上。
具体实施例方式
发明人将2002年秋天采自福建连江栽培群体的坛紫菜雌性和雄性叶状体个体阴干后带回实验室，用塑料袋分装密封后-20℃冷冻保存。2003年春天选择个体大、藻体色泽好、成熟差的藻体在20℃过滤海水中，低光(低于500lux)恢复1天后，分别挑选具有目的性状(如个体细长、色泽黑亮、成熟晚)的个体，在显微镜下确定是雌性或雄性；在过滤海水中用镊子和脱脂棉球做初步的清洗以除去藻体表面主要的附着生物，一般需2～3遍；将挑出的藻体在标本纸(若无标本纸，可用类似大小的白色复印纸代替)上制成标本，并放在阴凉通风处至藻体的表面没有可见的水珠，这时藻体细胞仍保持正常的活力；然后用解剖刀在靠近藻体中基部的位置切下营养组织小块(大小尽量小，一般1～2mm的见方)，镜检确定都是营养细胞；将获得的藻片放在10ml的离心管或50ml的小烧杯中，加入煮沸后冷却的海水(为容器的1/2～2/3高度)，用超声波粉碎仪进行杂藻的清除；为了获得较高的成功率，可在每一株的不同部位取3～4片藻片，同时放在一个50ml的小烧杯里，加入20～30ml的煮沸后冷却的海水；发明人用的是美国SONICS-MAREIALS公司的超声波粉碎仪VC750，使用振幅为35％，每次处理10秒共3次，每次都换水清洗。处理完后，镜检藻片的两面都无杂藻污染和原生动物即达到目的，若仍有杂藻，可重复以上的超声波处理步骤，但为了保证不损伤藻体细胞，对每次持续的时间应有所减少。然后，将每片藻片放在100ml的三角瓶培养，温度为20℃，光强20001x，光照时间每天12小时，2～3周换一次培养海水。一个月后，瓶底和藻片上都有丝状体藻落长出，将单个藻落挑出在一个250ml的三角瓶中单独培养，数月后可长出相当量的丝状体，即为目的产物丝状体纯系。
用本发明的方法最初由雄性组织获得的丝状体量一般较少，分离的时间可适当推迟；而由雌性组织获得的丝状体量一般较多，为了便于获得单个藻落，肉眼可见的藻落要尽早分离。通过进一步试验证明这样获得的丝状体的发育同步性优于野生的(即杂合的)果孢子丝状体，这为人工栽培生产的高效育苗提供了可能。
权利要求
1.一种坛紫菜丝状体纯系的制种方法，其特征是先从野生或栽培的坛紫菜群体中挑选叶状体个体，并确定性别；将选定的藻体在海水中用脱脂棉球进行刷洗；将洗过的藻体贴在标本纸或复印纸上，通风阴干藻体；用解剖刀在靠近藻体中基部的位置切下藻片，在显微镜下检查确定无杂藻且全部细胞都是营养细胞；将藻片用超声波清洗，最后镜检确定组织片的两面均无杂藻或原生动物附着；将处理干净的一片藻片在19～27℃，光强2500～6000lux，光照时间12L:12D的条件下培养；经1-2个月的时间将有红色的丝状体藻落长出；将单个藻落分出培养扩增。
全文摘要
一种坛紫菜丝状体纯系的制种方法，其特征是先从野生或栽培的坛紫菜群体中挑选叶状体个体，并确定性别；将选定的藻体在海水中用脱脂棉球进行刷洗；将洗过的藻体贴在标本纸或复印纸上，通风阴干藻体；用解剖刀在靠近藻体中基部的位置切下1～2mm见方的藻片，在显微镜下检查确定无杂藻且全部细胞都是营养细胞；将用超声波清洗后的一片藻片在19℃～27℃，光强2500～6000lux，光照时间12L∶12D的条件下培养；经1－2个月的时间将有红色的丝状体藻落长出；将单个藻落分出培养扩增。本发明选用的是单性个体，而且选取的是营养细胞，整个制种过程没有外来遗传物质的引入；获得的丝状体具有遗传单一性，无污染率达95％以上。
文档编号A01G33/02GK1582642SQ20041002435
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月15日 优先权日2004年6月15日
发明者汤晓荣, 姜红霞 申请人:中国海洋大学