专利名称：：坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种坛紫菜的指纹图谱，尤其是涉及一种坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法及其应用。
背景技术：
：坛紫菜(尸OA7/^m/^'to^m^)是我国特有的暖温带性品种，是福建、浙江和广东沿海人工养殖的重要经济红藻，其产量约占全国紫菜总产量的80%。以往紫菜的分类主要是依靠形态学的方法，然而由于大多数形态性状受环境因数影响大，可描述的特征有限，已经很难满足紫菜种质鉴定和良种选育的要求。分子标记技术的出现给这一问题的解决带来了契机，它直接在DNA水平上标记检测基因组的遗传变异，不受发育时期和环境因素的影响，数量丰富且多态性好，已经广泛应用于高等植物的种质鉴定中。SRAP——相关序列扩增多态性标记是一种新型的分子标记技术，具有多态性高，产率中等，重复性好，操作简单，在基因组中分布均匀，较易对扩增得到的目标片段进行测序，引物具有通用性，而且其正向引物可以与反向引物两两搭配组合，用少量引物即可组配得到多个引物对，从而提高引物的使用效率，降低引物合成成本等诸多优点，已经广泛用于植物遗传多样性分析、指纹图谱构建、种质鉴定以及遗传连锁图谱的绘制(参见文献LiGQuirosCF,Sequence-relatedamplifiedpolymorphism(SRAP)，anewmarkersystembasedonasimplePCRreaction:itsapplicationtomappingandgenetagginginBrassica.TheorApplGenet,2001，103:455-461)，但在海藻中的应用至今未见相关报道。
发明内容本发明的目的在于提供一种快速、准确的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法及其在实现坛紫菜种质鉴定自动化的应用。本发明的技术方案是利用一种相关序列扩增多态性标记(Sequence-RelatedA即lifiedPolymorphism,SRAP)来标记构建坛紫菜的指纹图谱，并利用所构建的指纹图谱实现坛紫菜种质鉴定自动化的方法。本发明所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法包括以下步骤1)收集坛紫菜样品；2)各样品基因组dna的提取与纯化；3)pcr扩增利用所提取的基因组dna作为模板，以经过优化的实验体系进行srap分子标记分析；4)选择具有代表性的srap多态性条带用于构建各供试样品的dna指纹图谱；5)将构建的dna指纹图谱转化成为计算机可以识别的数码指纹，并输入指纹图谱识别软件中，建立坛紫菜种质的数码指纹库，用于后续的坛紫菜种质鉴定6)坛紫菜种质的自动化鉴定。坛紫菜样品可收集生产或科学研究上具有代表性的坛紫菜品系，例如表1所示的部分生产或科学研究上具有代表性的坛紫菜品系。表1生产或科学研究上具有代表性的坛紫菜品系<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>各样品基因组dna的提取与纯化的方法可釆用文献提供的方法(可参见文献克拉尔克著，顾红雅译.植物分子生物学实验手册.北京高等教育出版社，1997)，但将其中的液氮研磨釆用海螺酶酶解替代。各样品基因组DNA的提取可取新鲜的藻体材料，用消毒海水处理后，在匀浆机中匀浆，后加入酶液，3(TC保温0.52h。酶解结束后用无菌水稀释酶解物，筛绢过滤，滤液经30008000r/min，l(TC离心510min，收集细胞，用无菌水悬浮洗涤细胞一次，离心后重新收集细胞，并收集的细胞转入5ml离心管中用CTAB法提取基因组DNA。其中酶液的组成最好为2%海螺酶，2mo1/1葡萄糖。优化的实验体系可采用正交试验对影响SRAP分子标记分析的各个因素进行优化后所得到，优化的实验体系包括反应体系、扩增程序及用于PCR扩增的引物对序列三个部分。反应体系为25uL的反应体系中含2.5yL10XPCRBuffer,5ng模板DNA，2.5mmol/LMg2+，l.OUDNA聚合酶，200nmol/L引物，200nmol/LdNTP。扩增程序为95。C预变型5min;94°Clmin，35°Clmin，72°C2min，5个循环；94°Clmin,48°Clmin，72°C2min，35个循环;72°C延伸10min。PCR扩增的引物对序列如表2所示，具体使用时可根据材料的不同使用其中正向引物及反向引物随机组合的1对或多对引物。表2PCR扩增所采用的引物编弓及其序列<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>选择具有代表性的SRAP多态性条带的原则是利用最少对引物，最少条带，就能将所有供试样品完全分开(即每个样品利用所选择的多态性条带构建的指纹图谱都具有唯一性)，且选取的条带具有稳定性和重复性良好、多态性高的特点。选择具有代表性的SRAP多态性条带用于构建各供试样品的DNA指纹图谱的方法是以坛紫菜品系编号为横坐标，以选择的具有代表性的SRAP多态性条带的编号为纵坐标，在每一纵横坐标交结处，有扩增带用"一"表示，没有扩增带不作任何标记，由此即可构建出各个坛紫菜样品的DNA指纹图谱，且所构建的每个坛紫菜样品的DNA指纹图谱都具有唯一性。将构建的DNA指纹图谱转化成为计算机可以识别的数码指纹，并输入指纹图谱识别软件中，建立坛紫菜种质的数码指纹库的方法是在所构建的DNA指纹图谱中，用"1"和"0"分别代表图谱中扩增带的有和无，这样就可以将DNA指纹图谱转化为由"1"和"0"组成的数码指纹，使得每个材料都具有各自特异的由"1"和"0"组成的数码指纹，然后即可将各个材料名称、特征及其对应的数码指纹输入指纹图谱识别软件中构建坛紫菜的数码指纹库，用于后续的坛紫菜种质鉴定。实现坛紫菜种质鉴定自动化的应用的方法是当需对一批坛紫菜进行种质鉴定时，只需对每个样品进行指定引物的SRAP标记分析，按照构建指纹库时选定的多态性条带的有无绘制出坛紫菜各样品的DNA指纹图谱，并转化为由"1"和"0"组成的数码指纹，再将每个样品的数码指纹输入配套的指纹图谱识别软件中，软件通过比较计算并可自动给出该样品属于已建库品系中的哪一个，若该样品不属于已建库品系中的任何一个，则软件会显示这是一个新材料，并给出该样品与每个已建库品系的相似系数，继而提示是否将该新材料加入数据库中。本发明具有如下优点1)本发明采用DNA分子标记技术来构建坛紫菜的指纹图谱，直接从DNA水平标记各坛紫菜种质的遗传差异，不受发育时期和环境因素的影响，因此结果更为准确、可靠；2)本发明提供了一套简单有效的提取坛紫菜高质量DNA的方法；3)本发明对PCR扩增的反应体系及扩增程序进行了优化，避免了试验过程人为产生的误差，使结果更为稳定和可靠；4)采用本发明构建的坛紫菜DNA数码指纹，可以根据需要不断增加，并对指纹进行更新，以满足发展的需要；5)利用本发明所提供的指纹图谱识别软件很容易实现坛紫菜种质鉴定的自动化；6)本发明所采用的指纹图谱构建及种质鉴定方法，除了可以应用于坛紫菜的种质鉴定之外，还可以应用其它物种的种质鉴定。图1为本发明所收集的15个坛紫菜品系115的SRAP标记分析电泳图。在图1中，横坐标为本发明一个实施例中采用的15个坛紫菜品系的编号；纵坐标表示被挑选出来用于构建15个坛紫菜品系DNA指纹图谱的6条多态性条带16，M为分子量标记。图2为本发明所构建的15个坛紫菜品系的DNA指纹图谱。在图2中，横坐标为本发明一个实施例中采用的15个坛紫菜品系的编号115;纵坐标为构建该DNA指纹图谱所用的6条条带编号16。具体实施方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。实施例1本实施例采用收集到的15个在生产或研究上具有广泛代表性的坛紫菜品系的叶状体作为供试材料，提取基因组总DNA，进行指定引物的SRAP分子标记分析，选择具有代表性的多态性条带，建立他们的DNA指纹图谱，并将指纹图谱转化为由"0"和"1"组成的数码指纹，输入指纹图谱识别软件建立坛紫菜的DNA数码指纹库，最后将所构建的DNA数码指纹库用于坛紫菜的种质鉴定中。具体实施方法如下1、选用的实验材料选用部分生产或研究上广泛使用的坛紫菜品系，如表1所示，目前己收集的生产或研究上广泛使用的坛紫菜品系均保存于福建省科技厅批准设立的福建省坛紫菜种质资源库内(目前设在集美大学)。2、坛紫菜基因组DNA的提取及纯化按以下程序提取各个坛紫菜材料的基因组总DNA，并进行纯化。(1)取新鲜的藻体材料，用消毒海水处理后在匀浆机中匀浆，后加入3ml酶液(2%海螺酶，2mol/l葡萄糖)，3(TC保温0.5h。酶解后用无菌水稀释酶解物，筛绢过滤，滤液经5000r/min，1(TC离心5min，收集细胞。用无菌水悬浮洗涤细胞一次，离心后重新收集细胞。(2)将收集的细胞转入5ml离心管中，并加入4ml65'C预热的CTAB提取缓冲液(2%(v/w)CTAB，1.4MNaCL，20mMEDTA，100mMTris國HCL(PH8.0)，2%巯基乙醇)。(3)65。C温浴2h(中间每10min反转12次)。(4)15000rpm离心8min,将上清液转入另一离心管中。(5)冷却至室温后，轻柔加入等体积氯仿异戊醇(24:1)，轻缓颠倒40min。(6)15000rpm室温离心10min，去沉淀，将上清液转入另一离心管中。(7)在上清液加入2/3体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，-20°<:放置1.5h以上。(8)离心去上清液(15000rpm，10min)。(9)用2ml75X乙醇洗两次以去除盐，无水乙醇一次。(10)倒去乙醇，37。C干燥(20min)，溶于600uL缓冲液，转移到1.5mL离心管中。(11)加入5uLRnaseA(终浓度为50pL/mL)，37。C温浴lh。(12)用等体积的酚、氯仿和异戊醇溶液对上述步骤(11)产生的溶液抽提2次，按体积比，酚氯仿异戊醇=25:24:1。(13)离心取上清(15000rpm，10min)。(14)加入2倍体积的无水乙醇，-20°<:保温111(20min翻转一次)。(15)15000rpm离心，-20'C预冷75%乙醇洗涤2-3次，无水乙醇一次。(16)37。C温浴干燥乙醇，加入100微升TE缓冲液溶解备用，4'C保存。3、用获得的基因组DNA为模板，指定引物进行SRAP扩增SRAP扩增的反应体系为25uL的反应体系中含2.5yL10XPCRBuffer,5ng模板DNA，2.5mmol/LMg2+,l.OUDNA聚合酶'200nmol/L引物，200umol/LdNTP。SRAP扩增的程序为95'C5min;94°Clmin，35°Clmin，72°C2min，5个循环；94°Clmin，48°Clmin，72°C2rain,35个循环；72'C10min。引物对组合序列为正向ME1:5'-TAGGTCCAAACCGGATA—3'反向EM9:5'-GACTGCGTACGAATTAAC_3，整个SRAP扩增反应在MJResearchPTC-200型扩增仪上完成，扩增结束后，取扩增产物5uL在8X的聚丙烯酰胺胶上于60W恒功率电泳1.5h，经银染显色，并用扫描仪记录结果。4、选择有代表型的多态性SRAP扩增条带构建供试材料的DNA指纹图谱选择多态性条带的原则是最少引物，最少条带，能将所有供试样品完全分开，且选取的条带具有稳定性和重复性良好、多态性高的特点。本实施例从上述引物对扩增出来的所有条带中选择了具有代表性的6条多态性条带，用于构建这15个坛紫菜材料的DNA指纹图谱(见图1)。在该DNA指纹图谱中，根据这6条扩增条带的有无，绘制除15个供试材料的DNA指纹模式图(见图2)。在该指纹图谱中，每个供试材料都具有其特异的DNA指纹，可以与其它供试材料彼此区分幵来。5、将所构建的DNA指纹图谱转化为计算机可以识别的数码指纹，构建坛紫菜的数码指纹库在所构建的DNA指纹图谱中，用"1"和"0"分别代表图谱中扩增条带的有和无，这样就可以将15个供试材料的DNA指纹图谱转化为由"1"和"0"组成的数码指纹(见表3)，然后即可将各个材料名称、特征及其对应的数码指纹输入指纹图谱识别软件中构建坛紫菜的数码指纹库，用于后续的坛紫菜种质鉴定。表315个供试坛紫菜品系的数码指纹序号数码指纹序号数码指纹序号数码指纹11011006111110111100002011011711011112010001001011811111113010000400000090111001401010151000111001011015010100实施例2将本发明中构建的坛紫菜数码指纹库应用于坛紫菜的种质鉴定假设要确定一批坛紫菜属于生产上已大规模应用的哪一个坛紫菜品系，就可以对这批坛紫菜按照如下方法进行鉴定，并最终确定属于哪个品系。首先对这批坛紫菜按照实施例1中的方法提取基因组DNA，纯化后作为模板，以ME1:5'-TAGGTCCAAACCGGATA-3，为正向引物，EM9:5'-GACTGCGTACGAATTAAC-3'为反向引物，应用SRAP扩增的实验体系进行SRAP扩增，扩增产物在8%的聚丙烯酰胺胶上于60W恒功率电泳1.5h，经银染显色，按照选定的6条多态性条带的有无绘制出这批坛紫菜各个样品的DNA指纹图谱，并转化为由"1"和"0"组成的DNA数码指纹，输入指纹图谱识别软件中同已经建库的各种质的数码指纹进行对比，就可以知道这批材料属于已知种质中的哪一种。如果这批坛紫菜中某个样品的数码指纹为"100011"，软件检测到该指纹与坛紫菜DNA数码指纹库中标号为5的坛紫菜品系的数码指纹一致，那么软件就会显示该样品是种质库内编号为YSV-①的品系，并给出该品系的特征为生长速度快，藻体宽，不易成熟。而如果某个样品的数码指纹为"101011"，软件在数码指纹库中未检测到与其一致的指纹，软件就会显示这是一个新品系，以及该样品与数码指纹库中各坛紫菜品系的相似系数，并提示是否将该样品的资料添加到数据库中。实施例3本实施例采用福建省坛紫菜种质资源库内的21个坛紫菜品系(YSIYSIV、YSV-①YSV-③、YSVI、YSW-①YSVII-⑤、YSX-①YSX-⑤和YSXIYSXI11)的叶状体作为供试材料，提取基因组总DNA,进行指定引物的SRAP分子标记分析，选择具有代表性的多态性条带，建立他们的DNA指纹图谱，并将指纹图谱转化为由"0"和"1"组成的数码指纹，输入指纹图谱识别软件建立坛紫菜的DNA数码指纹库，最后将所构建的DNA数码指纹库用于坛紫菜的种质鉴定中。具体实施方法如下2、选用的实验材料采用福建省坛紫菜种质资源库内的21个坛紫菜品系(YSIYSIV、YSV-①YSV-③、YSVI、YSW-①YSW-⑤、YSX-①YSX-⑤和YSXIYSXIU)的叶状体。2、坛紫菜基因组DNA的提取及纯化按以下程序提取各个坛紫菜材料的基因组总DNA，并进行纯化。(1)取新鲜的藻体材料，用消毒海水处理后在匀浆机中匀浆，后加入3ml酶液(2%海螺酶，2mol/l葡萄糖)，30'C保温0.5h。酶解后用无菌水稀释酶解物，筛绢过滤，滤液经5000r/min，10'C离心5min,收集细胞。用无菌水悬浮洗涤细胞一次，离心后重新收集细胞。(2)将收集的细胞转入5ml离心管中，并加入4ml65'C预热的CTAB提取缓冲液(2%(v/w)CTAB，1.4MNaCL，20mMEDTA，100mMTris-HCL(PH8.0),2。/。巯基乙醇)。(3)65'C温浴2h(中间每10min反转12次)。(4)15000rpm离心8min,将上清液转入另一离心管中。(5)冷却至室温后，轻柔加入等体积氯仿异戊醇(24:1)，轻缓颠倒40min。(6)15000rpm室温离心10min，去沉淀，将上清液转入另一离心管中。(7)在上清液加入2/3体积异丙醇，轻缓颠倒混匀，-2(TC放置1.5h以上。(8)离心去上清液(15000rpm，10min)。(9)用2ml75X乙醇洗两次以去除盐，无水乙醇一次。(10)倒去乙醇，37。C干燥(20min)，溶于600uL缓冲液，转移到1.5mL离心管中。(11)加入5liLRnaseA(终浓度为50uL/mL)，37'C温浴lh。(12)用等体积的酚、氯仿和异戊醇溶液对上述步骤(11)产生的溶液抽提2次，按体积比，酚氯仿异戊醇=25:24:1。(13)离心取上清(15000rpm，10min)。(14)加入2倍体积的无水乙醇，-20°<:保温111(20min翻转一次)。(15)15000卬m离心，-20°〇预冷75%乙醇洗涤2-3次，无水乙醇一次。(16)37。C温浴干燥乙醇，加入100微升TE缓冲液溶解备用，4'C保存。3、用获得的基因组DNA为模板，指定引物进行SRAP扩增SRAP扩增的反应体系为25iiL的反应体系中含2.5wL10XPCRBuffer,5ng模板DNA，2.5mmol/LMg2+，l.OUDNA聚合酶，200nmol/L引物，200umol/LdNTP。SRAP扩增的程序为95°C5min;94°Clmin，35°Clmin，72°C2min，5个循环；94°Clmin,48°Clmin，72°C2min，35个循环；72°C10min。引物对l组合序列为-正向ME2:5'-TAGGTCCAAACCGGAGC—3'反向EM5:5'-GACTGCGTACGAATTTGC-3，引物对2组合序列为正向ME8:5'—TGAGTCCAAACCGGACT-3'反向EM2:5'-GACTGCGTACGAATTCTG-3'整个SRAP扩增反应在MJResearchPTC-200型扩增仪上完成，扩增结束后，取扩增产物5yL在8X的聚丙烯酰胺胶上于60W恒功率电泳1.5h,经银染显色，并用扫描仪记录结果。4、选择有代表型的多态性SRAP扩增条带构建供试材料的DNA指纹图谱选择多态性条带的原则是最少引物，最少条带，能将所有供试样品完全分开，且选取的条带具有稳定性和重复性良好、多态性高的特点。本实施例从上述2个引物对扩增出来的所有条带中选择了具有代表性的多态性条带，用于构建这21个坛紫菜材料的DNA指纹图谱。根据扩增条带的有无，绘制除21个供试材料的DNA指纹模式图。实施例4将本发明中构建的坛紫菜数码指纹库应用于坛紫菜的种质鉴定假设要确定一批坛紫菜属于生产上巳大规模应用的哪一个坛紫菜品系，就可以对这批坛紫菜按照如下方法进行鉴定，并最终确定属于哪个品系。首先对这批坛紫菜按照实施例3中的方法提取基因组DNA，纯化后作为模板，分别以ME2:5，-TAGGTCCAAACCGGAGC-3，为正向引物和EM5:5，-GACTGCGTACGAATTTGC_3，为反向引物以及以ME8:5，-TGAGTCCAAACCGGACT-3'为正向引物和EM2:5，-GACTGCGTACGAATTCTG-3为反向引物，应用SRAP扩增的实验体系进行2次SRAP扩增，扩增产物在8%的聚丙烯酰胺胶上于60W恒功率电泳1.5h，经银染显色，按照选定的多态性条带的有无绘制出这批坛紫菜各个样品的DNA指纹图谱，并转化为由"1"和"0"组成的DNA数码指纹，输入指纹图谱识别软件中同己经建库的各种质的数码指纹进行对比，就可以知道这批材料属于己知种质中的哪一种。如果这批坛紫菜中某个样品的数码指纹与坛紫菜DNA数码指纹库中某标号的坛紫菜品系的数码指纹一致，那么软件就会显示该样品是种质库内编号为该标号的品系，并给出该品系的特征。而如果某个样品的数码指纹在数码指纹库中未检测到与其一致的指纹，软件就会显示这是一个新品系，以及该样品与数码指纹库中各坛紫菜品系的相似系数，并提示是否将该样品的资料添加到数据库中。序列表表2PCR扩增所采用的引物编号及其序列<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>权利要求1.坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于包括以下步骤1)收集坛紫菜样品；2)各样品基因组DNA的提取与纯化；3)PCR扩增利用所提取的基因组DNA作为模板，以经过优化的实验体系进行SRAP分子标记分析；4)选择具有代表性的SRAP多态性条带用于构建各供试样品的DNA指纹图谱；5)将构建的DNA指纹图谱转化成为计算机可以识别的数码指纹，并输入指纹图谱识别软件中，建立坛紫菜种质的数码指纹库，用于后续的坛紫菜种质鉴定；6)坛紫菜种质的自动化鉴定。2、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于所述的坛紫菜样品为收集生产或科学研究上具有代表性的坛紫菜品系。3、如权利要求l所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于各样品基因组DNA的提取是取新鲜的藻体材料，用消毒海水处理后，在匀浆机中匀浆，后加入酶液，3(TC保温0.52h，酶解结束后用无菌水稀释酶解物，筛绢过滤，滤液经30008000r/min，l(TC离心510min，收集细胞，用无菌水悬浮洗涤细胞一次，离心后重新收集细胞，并收集的细胞转入5ml离心管中用CTAB法提取基因组DNA。4、如权利要求3所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于酶液的组成为2%海螺酶，2mo1/1葡萄糖。5、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于PCR反应体系为25pL的反应体系中含2.5^L10xPCRBuffer,5ng模板DNA，2.5mmol/LMg2+，1.0UDNA聚合酶，200nmol/L引物，200pmol/LdNTP。6、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于扩增程序为95。C预变性5min;94°Clmin，35°Clmin，72°C2min，5个循环；94°Clmin，48°Clmin，72°C2min，35个循环;72°C延伸l(kin。7、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于PCR扩增的引物对序列为表2中正向引物及反向引物随机组合的1对或多对引物。表2PCR扩增所采用的引物编号及其序列<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>8、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于选择具有代表性的SRAP多态性条带用于构建各供试样品的DNA指纹图谱的方法是以坛紫菜品系编号为横坐标，以选择的具有代表性的SRAP多态性条带的编号为纵坐标，在每一纵横坐标交结处，有扩增带用"一"表示，没有扩增带不作任何标记，由此构建出各个坛紫菜样品的DNA指纹图谱，且所构建的每个坛紫菜样品的DNA指纹图谱都具有唯一性。9、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于将构建的DNA指纹图谱转化成为计算机可以识别的数码指纹，并输入指纹图谱识别软件中，建立坛紫菜种质的数码指纹库的方法是在所构建的DNA指纹图谱中，用"1"和"0"分别代表图谱中扩增带的有和无，将DNA指纹图谱转化为由"1"和"0"组成的数码指纹，使得每个材料都具有各自特异的由"1"和"0"组成的数码指纹，然后将各个材料名称、特征及其对应的数码指纹输入指纹图谱识别软件中构建坛紫菜的数码指纹库，用于后续的坛紫菜种质鉴定。10、如权利要求1所述的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法，其特征在于实现坛紫菜种质鉴定自动化的应用的方法是当需对一批坛紫菜进行种质鉴定时，只需对每个样品进行指定引物的SRAP标记分析，按照构建指纹库时选定的多态性条带的有无绘制出坛紫菜各样品的DNA指纹图谱，并转化为由"1"和"0"组成的数码指纹，再将每个样品的数码指纹输入配套的指纹图谱识别软件中，软件通过比较计算并可自动给出该样品属于已建库品系中的哪一个，若该样品不属于己建库品系中的任何一个，则软件会显示这是一个新材料，并给出该样品与每个已建库品系的相似系数，继而提示是否将该新材料加入数据库中。全文摘要坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法及其应用，涉及一种坛紫菜的指纹图谱，尤其是涉及一种坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法及其应用。提供一种快速、准确的坛紫菜种质鉴定的指纹图谱的构建方法及其在实现坛紫菜种质鉴定自动化的应用。收集坛紫菜样品；各样品基因组DNA的提取与纯化；PCR扩增利用所提取的基因组DNA作为模板，以经过优化的实验体系进行SRAP分子标记分析；选择具有代表性的SRAP多态性条带用于构建各供试样品的DNA指纹图谱；将构建的DNA指纹图谱转化成为计算机可以识别的数码指纹，并输入指纹图谱识别软件中，建立坛紫菜种质的数码指纹库，用于后续的坛紫菜种质鉴定；坛紫菜种质的自动化鉴定。文档编号G01N1/28GK101126746SQ20071000932公开日2008年2月20日申请日期2007年8月3日优先权日2007年8月3日发明者燕徐,纪德华,谢潮添,陈昌生申请人:集美大学