专利名称：Sod芥菜的生产方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，更具体地说涉及芥菜专用SOD(超氧化物歧化酶)制剂用到芥菜上，通过芽孢杆菌在芥菜植株体内繁殖、转移，提高芥菜体内的SOD活性和含量的一种SOD芥菜的生产方法。
二.
背景技术：
超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体重要保护酶之一，能清除体内超氧自由基，增强机体抗辐射损伤能力、免疫力，延缓衰老，在一些疾病如肿瘤、炎症及自身免疫疾病等治疗中有良好的疗效。SOD已进入化妆品、食品、医药等领域，SOD的应用与开发有不可估量的前景。目前，SOD大都从动物血液和人血液中提取，但血液中SOD含量低，血源收集不易，加上提取工艺复杂，所以，市场紧缺、价格昂贵。
经检索，SOD在果树、蔬菜及粮食等植物上应用的报道有多篇，尚未见SOD在芥菜上应用的报道。
三.
发明内容
本发明的目的是提供一种SOD芥菜的生产方法，提高芥菜的SOD酶活、耐热性和品质。
本发明通过采用以下技术方法来实现上述目的将芥菜专用SOD制剂在芥菜播种至采收期之前施用，具体包括以下步骤(1)将芥菜专用SOD制剂与芥菜种子搅拌均匀；(2)芥菜苗移栽时使用专用制剂沾根；(3)芥菜生长期使用专用制剂喷雾；(4)采收前7-40天使用专用制剂喷雾。
所述的芥菜包括褐芥(Brassica juncea)、黑芥(Brassicanigra)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、白芥(Sinapis alba)等四个种。
本发明根据微生态学原理，将中国农业大学研制，获中国发明专利的芽孢杆菌(菌株保藏号CGMCC0175，专利号93103774.3)植入芥菜，再经过特殊发酵工艺制备芥菜专用SOD制剂。该制剂为白色或灰色粉末，芽孢杆菌含量为3.0×1010cfu/g左右。用上述方法施用到芥菜后，通过芽孢杆菌在芥菜植株体内繁殖、转移，能提高芥菜体内的SOD活性和含量，产生的SOD酶有较强的耐温抗热性和抗逆能力，在70℃条件下处理1小时，酶活为原酶活的50％以上；100℃条件下处理30分钟，酶活为原酶活的40％以上，大大提高了芥菜的营养品质。
SOD芥菜的质量标准植株部位 指标(鲜品)(IU/g)叶 ≥150叶柄≥100
茎肉 ≥100茎皮 ≥100全株(去根) ≥100SOD酶活的测定方法SOD的测定采用NBT光化学法(1)设备752型分光光度计，台式离心机，光照培养箱，冰箱，10ml小烧杯等。
(2)试剂氯化硝基氮蓝四唑(NBT)——上海前进制剂厂生产L-甲硫氨酸(L-Met)-----上海康达氨基酸厂生产乙二胺四乙酸(EDTA)----北京化工厂生产核黄素(VB2)-----------北京西中化工厂生产(3)反应液的配制NBT反应液的制备配制PH7.8，50mmol/L的磷酸缓冲液1000ml，加入1.933mg的L-Met，待完全溶解后，放入45.8mg NBT，0.47mg核黄素(配成0.47mg/ml溶液，吸取1ml加入)和29.0mg EDTA，溶液终浓度Met为13mmol/L；NBT为6.3×10-3mmol/L；核黄素为1.3×10-3mmol/L；EDTA为0.1mmol/L，置于棕色试剂瓶中，用黑布罩遮光，于4℃冰箱中可保存1个月。
(4)材料的预处理按测定需要从芥菜植株相应部位取样，用研钵研碎，按照样品50ml磷酸缓冲液＝1∶2的比例加入缓冲液，1000rpm离心10分钟，取上清液进行SOD酶活测定。
(5)测定方法吸取30μl样品，放入10ml透明玻璃小烧杯中，加入3ml NBT反应液，混匀，在28℃SOD光化反应室中，2×15W日光灯光照20分钟(光照为4000勒克司)在560nm处测定吸光度，以NBT反应液作空白对照，每组设3次重复，整个测定过程除光化反应外，均在避光或弱光条件下进行。同时测试过程中以美国“Sigma”公司、上海宝安公司的标准酶和贵州老来福药业公司生产的SOD口服液作为测试对照。
(6)计算SOD酶活(IU/g)＝(OD对照-OD样品)/(1/2OD对照)×稀释倍数SOD芥菜中SOD酶活及抗热性测定结果严格按照SOD芥菜的生产规程，仅用清水处理为对照，根据上述给出的SOD测定方法，测定SOD芥菜的SOD酶活性。(见下表)样品 常规测定(IU/g)100℃处理30分钟(IU/g)SOD芥菜(叶) 228.5 111.3芥菜(叶)139.6 13.5SOD芥菜(叶柄) 122.4 86.2芥菜(叶柄) 70.7 0.0SOD芥菜(茎肉) 104.0 71.4芥菜(茎肉) 53.1 0.0SOD芥菜(茎皮) 144.5 98.6芥菜(茎皮) 88.3 6.2测定结果表明，SOD芥菜中SOD酶活显著高于普通芥菜，且差异显著酶活提高150％以上，说明通过该技术可以生产出具有高含SOD酶活的SOD保健功能芥菜。
经过热处理后，SOD芥菜中仍保持较高的SOD酶活，但对照中含有的SOD酶活极低。说明通过该技术生产的SOD芥菜，无论在常温下保存还是进行深加工，都能保存较高的SOD活性。
四.
具体实施例方式
下面以具体实例对本发明作进一步说明。
以褐芥作为本试验用种。
播种育苗前，按每亩大田5克用量将芽孢杆菌含量为3.0×1010cfu/g的芥菜专用SOD制剂与芥菜种子搅拌均匀。芽孢杆菌含量较低时，可加大用量；反之，减少用量。以够拌种为宜，多则增加成本。
育苗后移栽时，按每亩大田65克用量使用芥菜专用SOD制剂沾根。
生长期(茎用芥菜为肉质茎形成初期)按每亩大田65克用量将芥菜专用SOD制剂稀释均匀，兑水25～50公斤，进行叶面喷雾。
采收前20天左右按上述用量和方法再进行叶面喷雾。
应当说明的是(1)芥菜专用SOD制剂可以与其它杀虫剂、杀菌剂(杀细菌剂除外)、植物生长调节剂、叶面肥、化学肥料等农化物质混合使用，不影响使用效果，并可以与其它栽培管理措施结合实施。
(2)建议上午10点前或下午3点后喷施。喷后2小时内下雨，要重新喷施。
(3)芥菜专用SOD制剂使用时，至少提前4小时用凉水溶解开，便于喷施。
(4)其它生产栽培管理按正常进行。
下面用表格形式将16个实施例归类进行比较说明表1为芥菜SOD测定结果表2为100℃加热30分钟的芥菜SOD测定结果其中“采收前天数”指采收前是否进行芥菜专用SOD制剂喷雾的天数。表2是对应表1进行热处理的结果。
从表1可看出有拌种、沾根、生长期和采收期喷雾的实例1测定结果均高于缺少一个以上处理的其它实例的结果。其中采收前22天进行芥菜专用SOD制剂喷雾，所得到的结果最为理想；采收之前过晚、过早进行专用制剂喷雾，所得到的结果均不理想，较为适宜的天数为15～30天。处理越少，所得的结果就越差。而不拌种、不沾根、生长期和采收期不喷的实例16，所得SOD含量均较低。
从表2可看出实例1四个阶段均有处理，经过热处理后SOD酶活仍能保持50％以上；处理阶段越少，经过热处理后SOD酶活保存就越少；而未作任何处理的实例16，经过热处理后SOD酶活几乎丧失殆尽。可见，有经过芥菜专用SOD制剂处理的芥菜，其SOD酶活有较强的耐热性，适宜多种深加工。
总之，根据本发明所提供的方法对芥菜生长四个阶段进行处理，能够生产出适宜多种加工、富含SOD的高品质功能芥菜。
表1 芥菜SOD测定结果(单位IU/g)
表2 100℃加热30分钟芥菜SOD测定结果(单位IU/g)
权利要求
1.一种SOD芥菜的生产方法，其特征在于将芥菜专用SOD制剂在芥菜播种至采收期之前施用。
2.根据权利要求1所述的SOD芥菜的生产方法，其特征在于以下步骤(1)将芥菜专用SOD制剂与芥菜种子搅拌均匀；(2)芥菜苗移栽时使用专用制剂沾根；(3)芥菜生长期使用专用制剂喷雾；(4)采收前7-40天使用专用制剂喷雾。
3.根据权利要求1或2所述的SOD芥菜的生产方法，其特征在于所述的芥菜包括褐芥、黑芥、埃塞俄比亚芥、白芥等四个种。
全文摘要
本发明公开的是一种SOD芥菜的生产方法，将芥菜专用SOD制剂用到芥菜上，通过芽孢杆菌在芥菜植株体内繁殖、转移，提高芥菜体内的SOD活性和含量。该方法是使用芥菜专用SOD制剂在芥菜播种至采收期之前施用，具体包括拌种、沾根、生长期及采收前喷雾。经测定，通过该技术可生产出具有富含SOD的高品质功能芥菜，并适宜多种深加工。
文档编号A01G7/00GK1596592SQ20041003551
公开日2005年3月23日 申请日期2004年8月4日 优先权日2004年8月4日
发明者李建生, 王 琦 申请人:李建生