专利名称：摘出器官的保存、复苏和移植方法
技术领域：
本发明涉及哺乳动物的摘出器官的保存、复苏和移植方法。更详细的，涉 及摘出哺乳动物的器官，在固定娜艮保存后，将其移植复苏的方法。
背景技术：
心脏、肾脏、肝脏等一旦出im會據竭，即使实施药物治疗、手术治疗、
AXJtl斤治疗，如果症状加重，则这些处治都不育统率决。因此，即使移植他人
的器官，实施所谓的临床移植治疗，由于器官提供者(供体)不足，对于器官 接受者(受体)不能充分供给器官。此外，由于器官移植手术后免疫调节缺乏 发病，移植的器官的质量、亲和性成为m^的课题。
在现在实施的器官移植手术中使用人的移植器官的情况下，从供体中摘出 至够植到受体的最大娜艮，例如对于心脏4小时是期限。如果可以延长它们的 保存期限，由于储存摘出器官成为可能，可以期待贡献给更多的受体。
传统的动物器官的保存方法是在低温保存下保存极限为4-24小时(J. Thorac. Cardiovasc. Surg.迎，460471, 1994)，使用威斯康星大学溶液 (University of Winsconsin Solution ) (UW溶液)盼瞎况下，6隱18小时是极 限(TransplantProc. 21,1350,1989;Ann.Thorac. Surg. 42,932,1990)，或^f顿UW 溶液、全氟化碳溶液和氧的情况下，成功移植的是最长48小时，^ffl该保存器 官的雜心脏移植后的生存期限是6周(Transplantation丛699-701,1995)。
另一方面，在JP-A-2000-72601号公报中，记载了将浸泡在海藻糖溶液中 的摘出器官用 、 ^^筛等脱7jC剂J^7jC处理，浸泡在全氟化碳中，通过冷藏 保存可以保存10-20天。财卜，在WO2002/069702中，记载了fflil用混^体 曝气的克雷布斯-汉斯莱特(Krebs-Henseleit， KH)溶液在摘出器官中灌流 血，将混仏体(氧气95%^二氧化碳5%) ;i^A脱血的器官中脱水，直到7j^分 除去率达到25-60%后，浸泡在全氟化碳溶液中，然后，{慰见定娜艮冰箱保存的 器官复苏的方法，该方法中复苏了保存24小时的器官。
但是，在这些方法中， 一旦器官的7K分丧失到一定程度以上，例如对于心脏丧失30%以上时，就存在复苏率非常低下的问题，而且需要操作上也很錢 的高度技术。
发明内容
本发明的目的是提供不将心脏、肾脏、角膜等摘出器官进行脱水、千燥的 复杂操作，使这些器官能够长期保存，會,移植该保存器官、使其复苏的摘出 器官的保存方法。
本发明的目的^M31摘出哺乳动物的器官，用灌流瀬繊出器官灌流IMl， 将灌流脱血的器官在温度4-10。C，相对湿度80-92%，绝对压力5000-8000hPa 的条件下，在含有二氧化碳、氧气和惰性气体的混合气体的存在下保存来实现 的。
ffi5tt发明涉及的器官保存方法，例如心脏即使在72-96小时的保存后， 进行，心脏移植的瞎况下，也获得了育嫩记录到心搏的优秀成果。
因此，由于将被保存的摘出器官移植到受体中，本发明方法可认为是开创 性的方法。此外，本发明方法除了心脏以外，还可以适用于肾脏、肝脏、I熟l、 肺等各种器官。
图l颈部，心脏移植的循环动态示意图。
具体实施例方式
从哺学L动物中摘出器官的方法，可以fflil—般的夕卜禾样术进行。 用于将摘出器官灌流脱血而使用的灌流液，为用混合气体曝气的克雷布斯-汉斯莱特溶液(KH溶液)，混仏体是氧气和二氧化碳的混仏体，雌的是 4顿氧气85-95: 二氧化碳5-15的分压比的气体。灌流液《邻到器官的保存温 度4-10。C， 的4-6°。，为了防止腐蚀，添加抗生m^防腐效果的药剂^im 的。灌流是在摘出器官的主动脉中插入导管，安装兰根道尔夫(Langendorff) 式灌流装置，通过灌流5-10併中，，10併中的灌流液，进行脱血。
财卜，作为灌流液使用的KH溶液，im其葡萄糖量变更成一般的lOmM 的2-5倍量即20-50mM，再优选的是34倍量即3040mM而使用。由此维持器 官的功能或在器官移植时排斥反应的抑制效果得以优化。此外，以防止血液凝
固为目的，在灌流液中添加华法林是im的。
灌流脱血 净的器官，在温度4-10。C， i 24°C，相对》显度50-92%、优选80-90%，绝对压力5000-8000hPa， ,6000-8000hPa的条K牛下，在含有二 氧化碳、氧气和惰性气体的混仏体的存在下保存。保存在该压力下的器官， 由于氧气或二氧化碳溶解在器官中，细胞内被结构化，获得了器官能够被保存 复苏移植的效果。其中对于使用的惰性气体，可例举氦气、氩气等，对于混合 气体，可以使用各自分压为二氧化碳50400hPa，优选50-100hPa，氧气 400-2000hPa，雌1000-2000hPa，情性气体2600-7000hPa，雌2900-6000hPa 的气体。其中，如果在比上述绝对压力低的压力下进行器官的保存，保存可能 时间的娜臨尤变为24小时以下，另一方面，如果在比它高的压力下进行保存， 由于存在患低压症的原因，因此是不雌的。
被保存的器官在生理盐水中浸泡1至10辦中左右，复苏后，移植至湘同、
同种^禾中的哺孚L动物中。
关于摘出器官的存活的验证，有电生理学的方法、组织J 剖学的方法、实 际移植进行验证的移植方法等，例如对于心脏的情况，aai使用心电图的电生 理学的方法，或通过由异位心脏移植所导致的受体大鼠的存活天数等可以确认
保存期限是否合适，对于肾脏的情况下，将保存的器官移植到动物，M3i测定
被移植的动物的尿蛋白量，可以确认保存期限，与否。
可以^f顿本发明的方法的器官，除了心脏以夕卜还可例举肾脏、肝脏、月繊、 肺等。 实施例
以下记载了本发明的实施例，但本发明不限于这些实施例。 实施例1
使用符合美国NIH的实验动物标准的、人工繁殖的雌性6周龄大鼠 LEW/SsNslc (体重224g)。大鼠腹腔内施用乙醚麻醉药0.3ml，其后开胸摘出大 鼠的心脏。向摘出心脏(重量L349g)的主动脉中用肝素钠的生理盐水脱血(冲 洗)后，,Ai动脉插入导管，MJa灌流5iH中，注入在4'C的KH溶液(葡萄糖 变为40mM)中添加头孢他啶0.05%、米诺环素0.05%和华法林0.5mg/500ml形 成的液体作为保存液，所述KH溶Mii含有氧气85% (850hPa)和二氧化碳 15% (150hPa)的混合气体曝气而形成。灌流后，将含有二氧化碳100hPa、氧 气1900hPa、氦气4000hPa的混合气体导入心脏，方Vv相对温度90%的高压箱 中， 在41冰箱中，保存72小时。保存时间结束后，将取出的器官(重量1.320g)在生理盐水中浸泡1^H中 后，纟糊出保存的心脏在受体大鼠的右侦顿部，按颈总动脉与主动脉、颈外动 脉与肺动脉分别端对端的吻合的方式，实施雜心脏移植(参见图1)，帮瞿流 开始后，用心电图记录受体大鼠的供体。、脏的搏动。该结果，在心耳心房处确 认了强的、波动的搏动。此外，心电图是在供体心脏的左心室和主动脉开孔处 安装心电图记录用电极，通过双曲诱导使用活体放大器(NEC三荣生产的 Bioview-E)连续记录的。
实施例2
在实施例1中，对体重213g的大鼠同样;fcfeit行心脏的摘出、保存和移植， 在再灌流开始后确定'll、搏时，在心耳和心房处确定了弱的搏动。其中，摘出后 的心脏重量是1.335g，保存结束后的心脏重量是1.284g。
实施例3
在实施例1中，混仏体4顿二氧化碳50hPa、氧气950hPa、氦气6000hPa， 对体重251g的大鼠同样itkiS行心脏的摘出、保存和移植，在再灌流开始后确认 心搏时，在心耳和心房处确认了微弱的全搏动，S卩使在其后1小时也确认了尽 管微弱但仍在继续搏动。其中，摘出后的心m量是1.323g，保存结束后的心 雌量是1.358g。
实施例4
在实施例1中，混合气体4顿二氧化碳50hPa、氧气1950hPa、氦气5000hPa， 对体重183g的大鼠同样;fcfeiS行心脏的摘出、保存和移植，在再灌流开始后，确 认A祸时，在心房的一部分确认了微弱的搏动，在其后9併中时确定了微弱的 全搏动，再在其后6併中时确定了弱的全搏动。其中，摘出后的心脏重量是 1.229g，保存结束后的心脏M是1.074g。
实施例5
在实施例1中，混合气体4柳二氧化碳100hPa、氧气900hPa、氦气6000hPa， 对于体重185g的大鼠同样地进行心脏的摘出、保存和移植，在再灌流开始后， 确认心搏时，确认了弱的全搏动。其中，摘出后的心脏重量是1.364g，保存结 束后的心ltt量是1.070g。
实施例6
在实施例1中，混合气体^ffl二氧化碳100hPa、氧气900hPa、氩气6000hPa，
6且保存时间变更为96小时，对体重250g的大鼠同样iikit行心脏的摘出、保存 和移植，在再灌流开始后，确认心搏时，确认了心耳的微弱的搏动。其中，摘 出后的心脏重量是1.366g，保存结束后的心脏重量是1.233g。 比较例
在实施例1中，将灌流后的心脏浸泡在乡M压力1000hPa的全氟化碳溶液 (住友3M制品7口y于一卜FC77; QF18)中，在含有氮气80%和氧气20%的 标准空气中间歇曝气的状态，,在4'C的冰箱中，保存72小时，保存72小时 后的供体心脏的搏动，在实施的5例中全部未能确认。
产业实用性
本发明涉及器官的保存方法是不将心脏、肾脏、角膜等的细胞、组织、摘 出器官进行脱水、干燥的复杂操作，使保存后的器官能够长期的保存，所述器 官是可实现功能的状态的摘出器官，使用本发明的保存方法保存的摘出器官， 可以移植到相同、同种^种的哺乳动物中，在器官移植医疗中非常有用。
权利要求
1、摘出器官的保存方法，其特征在于，摘出哺乳动物的器官，用灌流液将摘出的器官灌流脱血，将灌流脱血的器官在温度4-10℃、相对湿度80-92％、绝对压力5000-8000hPa的条件下，在含有二氧化碳、氧气和惰性气体的混合气体的存在下保存。
2、 权利要求1所述的摘出器官的保存方法，混仏体的分压是二氧化碳 50400hPa、氧气400-2000hPa和惰性气体2600-6000hPa。
3、 权利要求1或2所述的摘出器官的保存方法，情性气体是氦气龜气。
4、 权利要求1或2所述的摘出器官的保存方法，哺乳动物的器官是心脏。
5、 禾又利要求1所述的摘出器官的保存方法，灌流液是用按照分压比计氧气 为95-50%和二氧化碳为5-50%的混仏体曝气的克雷布斯-汉斯莱特溶液。
6、 权利要求5戶舰的摘出器官的保存方法，f顿葡萄糖量是20-50mM的克雷布斯國汉斯莱特溶液。
7、 il31权利要求1至6中任一项所述的方齒呆存的摘出器官。
8、 器官复苏方法，其特征在于，ffiil将权利要求7所述的摘出器官移植到 相同、同种離种的哺乳动物中，实施摘出器官的复苏。
9、 器官移植方法，^#征在于，将权利要求7所述的摘出器官移植到相同、 同种，种的哺乳动物中。
10、 权利要求9所述的器官移植方法，移植是雜心脏移植。
全文摘要
本发明涉及摘出器官的保存、复苏和移植方法。摘出哺乳动物的器官，用灌流液将摘出的器官灌流脱血，将灌流脱血的器官在温度4-10℃、绝对压力5000-8000hPa的条件下，保存在含有二氧化碳、氧气和惰性气体的混合气体中。通过该摘出器官的保存方法，可以不将心脏、肾脏、角膜等的细胞、组织、摘出器官进行脱水干燥等复杂的操作，长期保存这些器官。
文档编号A01N1/02GK101578976SQ20081012874
公开日2009年11月18日 申请日期2008年5月16日 优先权日2008年5月16日
发明者关邦博, 吉田优, 畑山直之 申请人:共鸣俱乐部株式会社