专利名称：：一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂制备方法
技术领域：
：本发明涉及动物科学，具体说就是一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂制备方法。(二)
背景技术：
：中草药作为饲料添加剂使用，在我国已有几千年的悠久历史，如我国最早的药书《神农草木经》就有"桐叶饲猪，肥大三倍，且易养"的记载。中草药饲料添加剂依据我国中医中药理论，科学组方配伍，不仅具有扶正祛邪、健脾开胃、抗菌促生长、增强动物免疫机能、改善动物产品品质等效果，而且来源广泛、无毒副作用、无残留、无抗药性，引起了国内外学者的广泛兴趣，祖国这一宝贵遗产因而得以不断发掘。《中国饲料工业19962020年发展战略》中提出"应该继续努力发掘我国中草药方面的遗产，特别是当今世界'回归'自然声浪日高的情况下，用中草药替代化学合成物、抗生素类添加剂有着广阔的前景"。因此，全面启动天然中草药添加剂的现代化研究和产业化开发，替代传统的抗生素添加剂，对于提高我国畜牧生产水平、增加畜禽产品出口份额，促进国民经济的发展，无疑具有重大的实践意义，不仅势在必行，而且迫在眉睫。(三)
发明内容本发明的目的在于提供一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂制备方法。本发明的目的是这样实现的所述的植物性饲料添加剂为天然中草药_女贞子，其添加方法是将女贞子经65t:烘至恒重，粉碎，过40目筛，并按0.5%、1%两个剂量分别添加到蛋雏鸡日粮中。本发明一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂制备方法，将女贞子经65t:烘至恒重，粉碎，过40目筛，并按0.5%、1%两个剂量分别添加到蛋雏鸡日粮中。经过一定阶段的饲养试验，通过测定女贞子对蛋鸡(雏鸡、成鸡和产蛋鸡)生产性能、抗氧化功能、特异性免疫功能(体液免疫与细胞免疫)、蛋品质及血液生化指标后发现女贞子具有1)对育成期蛋鸡的成长发育有积极的促进作用，以添加1%女贞子的效果较好；2)女贞子有增强育成期蛋鸡免疫功能的作用，添加1%女贞子能促进育成期蛋鸡生长中、后期脾脏和胸腺发育，能提高蛋鸡体液免疫和细胞免疫的作用，1%女贞子能提高蛋鸡血清新城疫抗体滴度，延长持续时间，提高血清中免疫球蛋白浓度、血清IL-2和TNF含量，添加0.5%女贞子能提高前、中期血清补体C3、C4的浓度；3)女贞子能增强心脏、肝脏和肾脏的SOD、T-AOC、CAT、GSH-PX活性，且能降低组织中MDA含量，减少脂质过氧化物对机体的损害；4)0.5%女贞子可提高蛋内容物中蛋白质含量，并且降低蛋内胆固醇含量，并对蛋品的机械指标有作用。本发明主要是通过在雏鸡日粮中添加0.5%、1%两个剂量的经烘干粉碎后的女贞子粉，可在一定程度上改善生产性能、抗氧化功能、免疫力和蛋品质。本发明的产品具有价格低、生产和使用简单、添加量少、添加效果明显、无不良反应等特点。具体实施例方式下面对本发明作进一步说明。实施例1:本发明一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂制备方法，所述的植物性饲料添加剂为天然中草药_女贞子，其添加方法是将女贞子经65t:烘至恒重，粉碎，过40目筛，并按0.5%或1%两个剂量分别添加到蛋雏鸡日粮中。实验内容如下1.试验动物及试验设计试验动物选用1日龄海兰褐蛋雏鸡384只(购自哈尔滨远大孵化厂)，均为母鸡，随机分为4组，每组6个重复，每个重复16只鸡。对照组(I组)饲喂基础日粮，试验nIV组在基础饲粮中分别添加5mg/kg的黄霉素、0.5%、1%的女贞子。试验基础饲粮养分含量均达到或超过NRC(1994)标准，饲粮组成及营养水平见表2-1(1-18周)和2_2(19-28周)。试验动物笼养，自由采食和饮水，控制舍内温度、湿度和光照。从1周龄开始正式试验至28周龄结束，为期28周。试验设计见表2-3。表2-1基础饲粮的组成和营养水平「n词粮组成(％)Ingredients营养水平Nutrientlevels_1-6周7-1213-181-67-1213-18<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>(1)每kg饲粮中含VA:7600IU，VD:100IU，VE:15mg，VK:2.6mg，VB!:lmg，VB2:8mg，VB12:0.05mg，叶酸0.8mg，烟酸30mg，泛酸7mg。(2)每kg饲粮中含Cu:5mg，Mn:50mg，Fe:40mg，Zn:40mg，Se:0.15mg，I:0.15mg。试验基础饲粮为玉米一豆粕型，按中国家禽营养需要配制，基础饲粮配方与营养水平(见表2-1)表2-2基础饲粮组成及营养水平<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>1每kg饲粮中含VA:7600IU，VD:100IU，VE:15mg，VK:2.6mg，VB丄:lmg，VB2:8mg，VB12:0.05mg，叶酸0.8mg，烟酸30mg，泛酸7mg。2每kg饲粮中含Cu:5mg，Mn:50mg，Fe:40mg，Zn:40mg，Se:0.15mg，I:0.15mg。表2-3试验设计方案<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.样品收集于试验的第6、12、18周每个重复选出2只接近平均体重的健康鸡，翅下静脉采血，分离血清，放于EP管内，-201:保存，剖杀试鸡摘取免疫器官脾脏、法氏囊，胸腺并称重，测定免疫器官指数，同时采心脏、肝脏和肾脏，用玻璃匀浆器研磨，以生理盐水稀释成10%或1%组织匀浆，_201:保存，待用；于18周，每个重复选出2只接近平均体重的健康鸡，翅下静脉采血，用于外周淋巴细胞转化率测定。于试验的19周注射禽流感H具亚型疫苗，于21、24、26周即免疫后14、28、42天翅下静脉采血，清晨喂料前，每个重复随机取1只，标号，3000r/min离心10分钟，制备血清分装三份于印pendorf管中，-2(TC冰箱保存备检。22、24、26、28周结束时的同一时间分别采集蛋样，每个重复随机抽取4枚，标号，随取随捡。3.检测指标及方法(1)生长性能于试验第1、6、12、18周对各组鸡进行称重，称前空腹8h，仅供饮水，次日早上8点以重复为单位空腹称重，同时称量余料量。并计算各组试鸡的日增重、采食量和饲料转换率。公式如下日增重(g/d)=(末重-始重)/试验天数饲料转换率=采食量/日增重19-28周龄开始准确地记录每重复产蛋数、产蛋量、破软蛋数，每周结束时结料，计算每重复耗料量，根据饲养试验记录，整理统计平均产蛋率、平均日采食量、料蛋比、破软蛋率。平均产蛋率(％)=总蛋数/(鸡数X天数)平均日产蛋量(克/只日)=总蛋重/(鸡数X天数)平均日采食量(g/d)=总采食量/(鸡数X天数)料蛋比=总采食量/总蛋重破软蛋率(％)=破软蛋数/总蛋数X100%在每期试验开始和结束时，每重复随机抽取2只鸡称取体重，计算体重变化。体重变化=结束重_初始重(2)免疫功能指标l-18周龄时，测定免疫器官指数、新城疫血凝抑制抗体效价、外周血淋巴细胞转换率、血清免疫球蛋白含量、补体C3、C4含量、白细胞介素-2含量和肿瘤坏死因子含量。19-28周龄时，测定血清中的免疫球蛋白、禽流感亚型血凝抑制抗体效价。4.结果与分析各处理蛋雏鸡不同时期的生长性能指标见表2-4。6周龄时1%女贞子组与对照组、抗生素组间日增重无显著差异(P>0.05)，但0.5%女贞子组的日增重显著低于1%女贞子组(P<0.05)，与对照组、抗生素组无显著差异。12周龄时，O.5%女贞子组的日增重比对照组和抗生素组有增加，但无显著差异(P>0.05)。18周龄时，试验组较对照组、抗生素组的日增重有所增加，差异不显著(P>0.05)。另外，各处理组间的118周日增重和饲料转化率均无显著差异(P>0.05)。表2-4女贞子对蛋雏鸡生产性能的影响(克/只)曰增重(g)饲料转化组别1~6周712周1318周118周R增重率(1~18周)对照11.55±0.91ab*16.19±1.75a11.48±0.41a11.48±0.41a2.85±0.33a黄霉素11.30±0.O8ab16.16±1.03a11.64±1.23a11.64±1.23a2.65±0.26a0.5%女贞子11.19±0.47b16.51±1.49a12.20±0.47a12.20±0.47a2.82±0.26a1%女贞子12.18±1.07a15.85±0.56a11.85±1.00a11.79±0.84a2.62±0.23a注同行肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母差异极显著(P<O.Ol)，下表同。由表2-5可知，在整个试验期中各处理组间的结束体重和体重变化均呈增加趋势，但生物统计差异不显著(P>0.05)，表明女贞子对产蛋鸡的增重影响不显著，但是增重趋势最大的是0.5%女贞子组。表2-5女贞子对蛋鸡体重的影响处理起始体重结束体重体重变化(kg)(kg)(kg)0.5%女贞子组1.664±0.0551.860±0.0350.175±0.0561%女贞子组1.673±0.0331.814±0.0460.141±0.027黄霉素组1.692±0.0511.835±0.0220.143±0.041空白组1.660±0.0671.793±0.0390.136±0.033P值0.6950.2440.547由表2-6可知，随蛋鸡周龄的增长，各处理组的产蛋率都不同程度的升高。与空白组相比，其中24周时I组的产蛋率提高2.22%，各处理组对产蛋率的影响差异不显著(P>0.05);与空白组相比，26周时，1、1I组分别提高10.60%、5.70%，I组与空白组相比差异显著(P<0.05)，与II、III组差异不显著(P>0.05);在产蛋高峰期28周时，各处理组产蛋率都达90%以上，且均高于空白组，与空白相比，I组高出7.50%，表现为差异显著(P<0.05)，其他各组差异均不显著(P>0.05)。试验全期产蛋率无明显影响(P<0.05)，其中I组高于空白组3.72%。表2-6女贞子对蛋鸡产蛋率和软蛋率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表2-6知，从整个试验全期来看，各组之间的软蛋率差异不显著(P>0.05)，II组的破软蛋率表现为最低，I组与III组在整个试验期几乎无差异，都低于空白组。整个试验期来看，破软蛋率最低的是1%女贞子组。对于蛋鸡的日产蛋量，本试验用只日蛋重(克/只日)来表示。由表2-7可知，22周龄时各组之间日产蛋量几乎平行，表现为差异不显著(P>0.05);24、26周龄时，与空白组相比，各组都表现出升高的趋势，I组尤为明显，但差异不显著(P>0.05);在28周龄时，I组高出空白组5.47%，与空白组相比，I组日产蛋量差异显著(P<0.05)。日产蛋量与产蛋率在蛋鸡高峰期时表现相似性。表2-7女贞子对蛋鸡日产蛋量的影响处理曰产蛋量(克/只'日)22W24W26W28W0.5%女贞51.42±0.4555.05±0.6659.19±0.8961.89±子组51.72±0.9254.72±0.6858.25±0.841.15a1%女贞子51.94±0.8755.55±1.3158.32±0.8859.95±组51.70±0.6654.66士0.5956.99±1.180.86ab黄霉素组60.51±空白组0.84ab58.68±由表2-8知，蛋鸡日采食量在整个试验期过程中，各组采食量呈现增加的趋势，但无明显差异(P>0.05)。与空白组相比，各处理组在22、24、26周表现为差异不显著(P>0.05);整个试验期II组采食量比其它各组都高。在28周时女贞子II组采食量最大，高出空白组6.85%，其中I组耗料最低，I组和II组相比差异显著(P〈0.05)，和其它各组差异不显著(P>0.05)。由表3-4可知，各组料蛋比在22、24周龄差异不显著(P>0.05)，其中22周龄时，与空白组相比，第I、III组分别下降了12.5%、13.64%，II组和IV组料蛋比几乎无差异；24周龄时各组料蛋比无明显差异；26周龄时，与空白组相比，1组表现为差异性显著(P<o.05);与其它各组差异不显著(P>0.05);28周龄时I组显著高于其它各处理组(P<0.05)，其它各组之间无差异(P>0.05)，其中II组与空白组相比表现出负效应。总体看来，I组的料蛋比在整个试验期最低，与空白组相比，试验全期料蛋比显著降低(P<0.05)。表2-9女贞子对蛋雏鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数法氏囊指数脾脏指数对照3.30±0.57a*4.64±0.70b2.62±0.42a6W黄霉素3.31±0.77a4.70±0.52b2.74±0.45a0.5%女贞子3.46±0.99a5.77±1.30a2.88±0.30a1%女贞子3.38±0.40a4.80±0.52ab3.09±0.51a对照2.75±0.58a0.52±0.16a2.43±0.16b12W黄霉素2.73±0.63a0.57±0.17a2.51±0.17ab0.5%女贞子2.85±0.27a0.52±0.12a2.54±0.24ab1%女贞子2.48±0.17a0.61±0.25a2.82±0.39a对照1.59±0.09b0.81±0.43a2.08±0.34a18W黄霉素0.5%女贞子1.80±0.35ab1.90±0.49ab0.71±0.16a0.63±0.23a2.16±0.42a1.89±0.25a1%女贞子2.09±0.37a0.86±0.27a2.07±0.29a由表2-10可知，免疫当日、免疫后7天女贞子组抗体效价较对照组与抗生素组有升高的趋势，但各组间抗体效价无显著差异(P>0.05)。免疫后14天，女贞子组抗体效价均高于对照组，其中1%女贞子组的抗体效价显著高于其他各组(P<0.05)。免疫后21天，各试验组抗体效价均高于对照组，其中1%女贞子组抗体效价与对照组、0.5%女贞子组差异显著(P<0.05)。免疫后28天，各试验组血清抗体效价均高于对照组，并且女贞子组抗体效价显著高于对照组(P<0.05)。表2-10女贞子对接种新城疫油苗蛋雏鸡血清抗体效价的影响(log2X)组别免疫当日免疫后7d免疫后14d免疫后21d免疫后28d对照2.50±0.55a*3.00±1.26a6.83±1.33b6.17±0.75b3.17±0.98b黄霉素2.33±0.82a3.17±1.47a6.50±1.05b7.33±0.82ab3.67±0.52ab0.5%女贞子2.33±0.52a3.17±0.41a7.17±0.98b6.33±1.37b4.17±0.75a1%女贞子3.00±0.63a3.33±1.03a8.67±0.82a7.77±0.82a4.33±0.52a各处理蛋雏鸡外周淋巴细胞转换率结果见表2-11。用ConA剌激后，女贞子组淋巴细胞转换率显著高于对照组与抗生素组(P<0.05)。表2_11女贞子对蛋雏鸡淋巴细胞转换率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>女贞子对各处理蛋鸡不同时期血清免疫球蛋白含量的影响见表2-12。6周龄时，各试验组IgG含量显著高于对照组(P<0.05)，各组间IgA，IgM含量无显著差异(P>0.05);12周龄时，l^女贞子组IgG含量与对照组差异显著(P〈0.05)，各试验组IgA含量与对照组相比无明显差异(P>0.05)，但IgM含量显著高于对照组(P<0.05);18周龄时，各试验组的IgG，IgM含量与对照组差异不显著，l^女贞子组的IgA含量显著高于对照组(P<0.05)。表2-12女贞子对血清中IgG、IgA、IgM含量的影响(g/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表2-13可知，6周龄时，添加女贞子能提高血清中C3的含量，其中0.5%女贞子组较对照组差异显著(P<0.05)，12周龄时添加女贞子能显著提高血清中C3的含量(P<0.05)，18周龄时各组间无显著差异(P>0.05)，但女贞子组的血清C3含量较对照组与抗生素组有提高的趋势。女贞子组不同时期血清中c;含量均高于对照组与抗生素组，但无显著差异(P>0.05)。表2-13女贞子对蛋雏鸡血清C3、C4的影响(g/L)组别6周c3c412周18周6周12周18周对照2.69±0.14b*2.31±0.16b2.39±0.30a0.08±0.03a0.08±0.04a0.09±0.01a黄霉素2，0.28ab2.32±0,07b2.49±0.13a0.09±0.04a0.09±0.05a0.10±0.04a0.5%女贞子3.18±0.59a2.64±0.25a2.73±0.27a0.11±0.05a0.10±0.04ao.io士o.or1%女贞子2.78±0.15ab2.52±0.05a2.66±0.60a0.10±0.03ao.mo.or0.11±0.02a由表2-14可知，6周龄时，1%女贞子组IL-2含量显著高于对照组和抗生素组(P<0.05);12周龄时，女贞子组IL-2含量显著高于对照组和抗生素组(P<0.05)，其中以添加1%女贞子组1卜2含量最高；18周龄时，添加女贞子能显著提高血清中IL-2含量(P<0.05)，其中0.5%女贞子组与对照组差异极其显著(P<0.01)，1%女贞子与空白组差异显著(P<0.05)。表2-14女贞子对蛋雏鸡血清IL-2含量的影响(ng/mL)组别6周12周18周对照2.23±1.06b*3.26±0.53b5.74±2.05e黄霉素2.33±1.30b3.42±0.46b7.30±1.69bc0.5%女贞子5.14±3.67ab5.66±1.13a10.14±2.30a1%女贞子6.06±2.76a6.39±1.71a8.71±1.32ab由表2-15可知，6周龄和18周龄时，各试验组血清中TNF含量均较对照组有增加，但差异不显著(P>0.05)。12周龄时，女贞子组、抗生素组血清中TNF含量均高于对照组，其中添加1%女贞子可显著提高血清中TNF含量(P<0.05)。表2-15女贞子对蛋雏鸡血清TNF的影响(ng/mL)组别6周12周18周对照0.52±0.09a*0.53±0.15b0.66±0.17a黄霉素0.53±0.15a0.57±0.13b1.13±0.72a0.5%女贞子1.16±1.39a0.88±0.18ab1.58±1.61a1%女贞子0.58±0.07al,18±0.60a1.77±1.69a各处理组对蛋鸡的禽流感115^亚型抗体效价结果见表2-16。与空白组相比，在免疫后28天或42天，各试验组的禽流感H5亚型抗体效价均显著性升高，在免疫后28天，0.5%女贞子组抗体效价显著高于空白组(P<0.05);免疫后42天，除黄霉素组抗体效价表现下降外各组抗体效价仍旧表现升高，0.5%女贞子显著高于空白组(P<0.05)，1%女贞子组、黄霉素组和空白组相比无显著性差异(P〉0.05)。表2-16女贞子对蛋鸡禽流感亚型抗体效价的影响曰龄0.5%女贞子组1%女贞子组黄霉素组空白组免疫后144.50±2.505.25±1.184.00±0.000天7.80±0.37a6.57±0.53ab6.33±0.67ab5.67±0.76b免疫后288.14±0.67a7.00±0.45ab5.67±0.61ab5.86±0.55b天免疫后42天由表2-17可知1%女贞子组与空白组相比，IgG和IgM都表现为差异显著(P<0.05)，其中IgG相比空白组高出33.3%，0.5%女贞子组和黄霉素组与各组之间差异不显著(P〉0.05);与空白组相比，两种女贞子添加方式对IgA含量的影响表现为显著性差异(P<0.05)，黄霉素组与各组差异不显著(P>0.05)。表2-17女贞子对蛋鸡免疫球蛋白的影响处理0.5%女贞子组1%女贞子组黄霉素组空白组0.21±IgGIgAIgM0.23±0.014ab0.14±0.003a0.13±0.006ab0.28±0.025a0.14±0.008a0.14±0.006a0.21±0.023ab0.13±0.008ab0.12±0.004ab0.010b0.12±0.004b0.12±0.004b权利要求一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂方法，其特征在于所述的植物性饲料添加剂为天然中草药-女贞子，其添加方法是将女贞子经65℃烘至恒重，粉碎，过40目筛，并按0.5％、1％两个剂量分别添加到蛋雏鸡日粮中。全文摘要本发明提供一种改善蛋鸡免疫力的植物性饲料添加剂制备方法。所述的植物性饲料添加剂为天然中草药一女贞子，其添加方法是将女贞子经65℃烘至恒重，粉碎，过40目筛，并按0.5％、1％两个剂量分别添加到蛋雏鸡日粮中。通过测定女贞子对蛋鸡(雏鸡、成鸡和产蛋鸡)生产性能、抗氧化功能、特异性免疫功能(体液免疫与细胞免疫)、蛋品质及血液生化指标后发现女贞子对育成期蛋鸡的成长发育有积极的促进作用，本发明主要是通过在雏鸡日粮中添加0.5％、1％两个剂量的经烘干粉碎后的女贞子粉，可在一定程度上改善生产性能、抗氧化功能、免疫力和蛋品质。本发明的产品具有价格低、生产和使用简单、添加量少、添加效果明显、无不良反应等特点。文档编号A23K1/16GK101731480SQ20101010252公开日2010年6月16日申请日期2010年1月29日优先权日2010年1月29日发明者单安山,张玮,石莉莎申请人:东北农业大学