专利名称：一种人工诱导花鳗鲡性腺发育成熟的方法
技术领域：
本发明属于水产养殖领域，是一种鳗鲡的人工繁殖技术，具体涉及激素诱导花鳗鲡性腺发育成熟的方法。
背景技术：
花鳗鲡(Anguilla marmorata)俗名鲈鳗、花鳗、雪鳗、鳝王、溪鳗等，在分类学中属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、鳗鲡目(Anguilliformes)、鳗鲡科(Anguillidae)、鳗鲡属 (Anguilla)，是鳗鲡属鱼类中分布最广的种类，分布范围东至太平洋的中部诸岛，西至印度洋的马达加斯加岛，南至澳大利亚南部，北至朝鲜、日本南部。在我国主要见于海南、广东、 福建、台湾等省的河流及海域中。花鳗鲡是一种降海生殖洄游性鱼类，在淡水河流湖泊中生长，性成熟后洄游到离海岸数千里之外的产卵场进行产卵。自然状态下，鳗鲡在降海生殖洄游过程中完成性腺的发育，到达产卵场时性腺成熟。近年来，由于过度捕捞、环境污染、拦河建坝等人类活动加剧，花鳗鲡的自然资源明显衰退，我国已将其列为二级保护动物。花鳗鲡不但肉质鲜美，营养价值高，而且有药用价值，素有“淡水人参”之称，系优质食用鱼类。目前，海南等地积极发展花鳗鲡人工养殖业， 市场前景广阔，产业发展势头良好，已成为淡水养殖的名贵新品种。然而，鳗鲡属鱼类的人工繁殖技术至今仍未解决。养殖鳗苗全部依赖于捕捞野生鳗苗，造成自然资源的急剧衰退。鳗鲡的人工繁殖技术属于世界性的难题，相关研究始于上个世纪40年代，由于其生活史的特殊性，国内外学者做了大量的研究工作，现有的人工诱导鳗鲡方法主要依赖多次注射外源激素，并在日本鳗鲡上已获得阶段性成功。然而，花鳗鲡人工催产催熟的研究在国内外是一片空白，本方法通过人工诱导花鳗鲡催产催熟，将为花鳗鲡的人工繁殖打下基石出。
发明内容
本发明的目的在于提供一种人工诱导花鳗鲡性腺发育成熟的方法，解决花鳗鲡在人工饲养条件下，其性腺无法自然发育成熟的问题。本发明所提供的诱导花鳗鲡性腺发育成熟的方法如下(1)亲鱼的驯养亲鱼选用3龄以上的健康人工塘养花鳗鲡；其中挑选的雄性花鳗鲡规格要求体重0. 425-0. 875kg,体长55_66cm ；挑选的雌性花鳗鲡规格要求体重 1. 305-2. 89kg，体长73-99cm。驯养期间水温控制在22_26°C ；全天M小时避光；活饵料和鳗鱼粉混合投喂，每日3次；亲鱼养殖密度为1尾/缸(规格为IOOcmX60cmX50cm的玻璃缸)；驯养时间为1个月。(2)驯养结束后，停止投喂，雌性花鳗鲡需要过度至半海水后开始催熟，而雄性花鳗鲡在淡水中进行催熟。(3)诱导性腺发育成熟雄性花鳗鲡采用肌肉注射HCG进行催熟；雌性花鳗鲡采用肌肉注射LHRH-A2和鲤鱼脑垂体勻浆进行催熟。
其特征在于(1)亲鱼选用3龄以上健康塘养花鳗鲡；驯养期间水温控制在22_26°C ；全天M小时避光；活饵料和鳗鱼粉混合投喂，每日3次；亲鱼养殖密度为1尾/缸；驯养时间为1个月。(2)雌性花鳗鲡催产池逐步增加盐度至半海水，每日盐度提高2-3，直至盐度为
14-17为止。(3)雄性花鳗鲡在催熟期间均采用淡水培育。(4)雄性花鳗鲡采用肌肉注射HCG进行催熟，剂量为500U/kg ·体重，每周注射一次，注射6周；雌性花鳗鲡采用肌肉注射LHRH-A2和鲤鱼脑垂体(CPE)勻浆进行催熟， LHRH-A2剂量为250 μ g/kg ·体重，CPE的剂量为4粒/kg ·体重，每7-9天注射一次，注射
15-18次。在诱导雄性花鳗鲡精巢发育成熟过程中，分别对在海水和淡水的中雄性花鳗鲡的催熟效果对比，结果显示两组鱼的精巢均发育成熟，其精子活力均在15%左右，快速运动时间和寿命没有明显差异，说明雄性花鳗鲡在海水和淡水中的催熟效果是一样的。因此，在淡水中进行雄性花鳗鲡催熟是本发明专利技术的一个创新点，这样会减少不必要的人力和物力的损耗。采用LHRH-A2和鲤鱼脑垂体勻浆的混合物诱导雌性花鳗鲡性腺发育成熟是本发明专利技术的又一个创新点，利用促性腺激素释放素类似物诱导花鳗鲡自身产生内源型促性腺激素，并且配合外源促性腺激素(鲤鱼脑垂体)共同作用，效果良好。通过实施本方案，亲鱼性腺发育成熟，腹部明显突起，用手抚摸腹面凸处，明显感到性腺松软有弹性。在任意挑选的15尾实验组雌鱼中，5尾卵巢发育完全成熟，平均 GSI(性腺系数)为20.9 士 5. 04% (最大达到27.3%) ；5尾卵巢发育至成熟期，平均GSI为 7. 2士2. 86% ；5尾卵巢发育至卵黄生成期，平均GSI为2. 32士 1.5% ；而对照组的性腺停留在未发育的II期(GSI为1. 18士0. 39%)，解剖实验组雌鱼人工催产催熟观察发现，卵巢上可见大量卵子。而雄性花鳗鲡GSI (性腺系数)达到9. 5士2. 1%，挤压腹部可收集到乳白色精液。
图1 对照组雄性花鳗鲡腹部解剖2 实验组雄性花鳗鲡腹部解剖3 对照组雌性花鳗鲡腹部解剖4 实验组雌性花鳗鲡腹部解剖图
具体实施例方式下列实施方法是本发明的一个具体应用实例，而不仅限于此实例。(1)将收集的人工塘养鳗鲡按1尾/缸的密度放入玻璃缸中驯养，采用室内循环水养殖系统，全天M小时避光，水温控制在22-26°C。驯养时间为1个月，驯养期间活饵料和鳗鱼粉混合投喂，每日3次，每次投喂3小时后将吃剩的饲料清理干净。(2)亲鱼从淡水进入半海水需要经过渗透压及生理调节的整个过程，需要一定时间。雌性花鳗鲡盐度调节期间不投喂饵料。停止投喂的第2天起，每日盐度提高2-3，直至盐度提高到14-17为止，历时7-9天，观察亲鱼若有不适表现，立即停止提高盐度，等亲鱼状态稳定后再继续增加盐度直至达到要求为止。(3)过渡半海水后开始花鳗鲡催熟实验。雄性花鳗鲡催熟过程将亲鱼从玻璃缸中捞出，放入冰水混合物中麻醉10-20分钟；麻醉后使用浸过冰水的毛巾包住亲鱼头部，将鱼类生理盐水溶解的HCG(剂量为500U/kg 体重)，注射器从背部肋间扎入，注射完毕后在针孔处擦涂红霉素软膏，以防止感染，每周注射一次，共注射6次。雌性花鳗鲡催熟过程将亲鱼从玻璃缸中捞出，放入冰水中麻醉10-20分钟后，用浸过冰水的毛巾包住其头部，用鱼类生理盐水溶解的LHRH-A2和鲤鱼脑垂体(CPE)勻浆，采用ImL注射器肌肉注射，LHRH-A2 剂量为250 μ g/kg ·体重，CPE的剂量为4粒/kg ·体重，注射完毕后在针孔处擦涂红霉素软膏，以防止感染，每7-9天注射一次，共注射15-18次。通过实施本方案，亲鱼性腺发育成熟，腹部明显突起，用手抚摸腹面凸处，明显感到性腺呈松软状态。解剖发现雌性花鳗鲡的卵巢上可见大量卵子；雄性花鳗鲡通过挤压腹部可收集到乳白色精液。这为进一步研究花鳗鲡的全人工繁殖提供了前期的技术保证。
权利要求
1.一种人工诱导花鳗鲡性腺发育成熟的方法，其步骤和方法包括(1)亲鱼的驯养亲鱼选用3龄以上的健康人工塘养花鳗鲡；驯养期间水温控制在 22-260C ；全天M小时避光；活饵料和鳗鱼粉混合投喂，每日3次；亲鱼养殖密度为1尾/ 缸；驯养时间为1个月。(2)驯养结束后，停止投喂，雌性花鳗鲡需要过度至半海水后开始催熟；而雄性花鳗鲡在淡水中进行催熟。(3)诱导性腺发育成熟雄性花鳗鲡采用肌肉注射HCG进行催熟；雌性花鳗鲡采用肌肉注射LHRH-A2和鲤鱼脑垂体勻浆进行催熟。
2.按照权利要求1所述的诱导花鳗鲡性腺发育的方法，其特征在于亲鱼选用塘养花鳗鲡；其中挑选的雄性花鳗鲡规格要求体重0. 425-0. 87^g，体长55-66cm ；挑选的雌性花鳗鲡规格要求体重1. 305-2. 89kg，体长73-97cm。驯养期间水温控制在2246°C ；全天M 小时避光；活饵料和鳗鱼粉混合投喂，每日3次；亲鱼养殖密度为1尾/缸；驯养时间为1个月。
3.按照权利要求1所述的诱导花鳗鲡性腺发育的方法，其特征在于；逐步增加盐度至半海水，每日盐度提高2-3，直至盐度调为14-17为止。
4.按照权利要求1所述的诱导花鳗鲡性腺发育的方法，其特征在于雄性花鳗鲡采用肌肉注射HCG进行催熟，剂量为500U/kg·体重，每周注射一次，注射时间为6周；雌性花鳗鲡采用肌肉注射LHRH-A2和鲤鱼脑垂体(CPE)勻浆进行催熟，LHRH-A2剂量为250 μ g/kg 体重，CPE的剂量为4粒/kg ·体重，每7-9天注射一次，注射次数为15-18次。
全文摘要
本发明公开了一种人工诱导花鳗鲡性腺发育成熟的方法，其方法如下雄性花鳗鲡采用肌肉注射HCG进行催熟，剂量为500U/kg·体重，每周注射一次，注射时间为6周；雌性花鳗鲡采用肌肉注射LHRH-A2和鲤鱼脑垂体(CPE)匀浆进行催熟，LHRH-A2剂量为250μg/kg·体重，CPE的剂量为4粒/kg·体重，每7-9天注射一次，注射次数15-18次。通过实施本方案，亲鱼性腺发育成熟，腹部明显突起，用手抚摸腹面凸处，明显感到性腺呈松软状态，雌性花鳗鲡可以排出成熟卵子；雄性花鳗鲡通过挤压腹部可收集到乳白色精液。这为进一步研究花鳗鲡的全人工繁殖提供了前期的技术保证。
文档编号A01K61/00GK102232363SQ20101016955
公开日2011年11月9日 申请日期2010年4月26日 优先权日2010年4月26日
发明者周雯伊, 尹绍武, 林浩然, 骆剑, 齐兴柱, 齐鑫 申请人:海南大学