专利名称：一种卵黄稀释液的配制新方法
技术领域：
本发明属于动物生殖生物技术领域，适用于牛冻精生产中稀释液的配制，主要提 供一种卵黄稀释液的配制新方法。
背景技术：
稀释液是牛冷冻精液生产中的主要和必要试剂，而卵黄稀释液因对精子有更好的 保护作用，广泛使用于牛性控冷冻精液的生产中。卵黄稀释液中有很多颗粒杂质成分影响 稀释液的质量和产品的检测，目前主要通过离心加过滤手段除去这些杂质颗粒。因卵黄中 含有大量的有机成分，用0. 22 μ m的无菌滤器过滤，不但耗时耗力，而且成本高昂，为此开 发了该技术。
发明内容
本发明提供一种用于牛冻精生产的卵黄稀释液配制新方法，该技术原理是利用盐 离子浓度对卵黄中颗粒成分的聚集起重要作用，低盐离子浓度有助于颗粒的聚集，从而可 以通过离心去除大部分颗粒，这样就可以省去过滤的步骤，降低成本，节省人力物力。本发明的目的是通过以下技术方案实现的一种卵黄稀释液的配制新方法，其特 征在于它包括下述步骤1、卵黄的制备选取新鲜鸡蛋，将蛋壳用75%的酒精消毒，在无菌条件下去蛋壳、 蛋清，用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干，用无菌注射器抽取卵黄；2、4. 6 倍 Tris-A 及 6 倍 Tris-B 母液的配制表1 IOOml 4. 6XTris-A 母液配方
权利要求
1. 一种卵黄稀释液的配制新方法，其特征在于它包括下述步骤 1)卵黄的制备选取新鲜鸡蛋，将蛋壳用75%的酒精消毒，在无菌条件下去蛋壳、蛋 清；用已灭菌滤纸将卵黄膜表面的蛋清吸干，用无菌注射器抽取卵黄；(2) 4. 6倍Tris-A及6倍Tris-B母液的配制IOOml 4.6XTris-A母液配方药品名称重量(g)Tris base16. 25柠檬酸7. 92D-Fructose5. 82IOOml 6XTris-B母液配方药品名称重量(g)Tris base21. 45柠檬酸11. 99D-Fructose8. 83按照上述配方用双蒸水配制4. 6倍Tris-A母液，6倍Tris-B母液，分别调PH值为(6. 80 士 0. 02，用0. 22 μ m无菌滤器过滤；(3)0. 5倍Tris-A溶液和0. 5倍Tris-B溶液的配制用无菌水将4. 6倍Tris-A母液与 6倍Tris-B母液分别稀释为0. 5倍Tris-A溶液和0. 5倍Tris-B溶液，配制好的溶液在4°C 环境下保存，备用；(4)Tris-A, Tris-B稀释液的配制①Tris-A稀释液的配制将0.5倍Tris-A溶液和卵黄按7 2的体积比加到一无菌容器中，于4°C环境下用磁力 搅拌器以400-500转/分钟搅拌2小时，再静置20h，然后将上清液4°C、3850g离心60min， 取上清液，并按1 9.4的体积比加入4.6倍Tris-A母液，摇勻，加入抗生素庆大霉素终 浓度500 μ g/ml ；林可霉素终浓度300 μ g/ml ；奇霉素终浓度600 μ g/ml ；泰乐菌素终浓度 100 μ g/ml，调PH值为6. 80 士 0. 02，于4°C冰箱中保存备用；②Tris-B稀释液的配制将0.5倍Tris-B溶液和卵黄按7 2. 3的体积比加到一无菌容器中，于4°C环境下 用磁力搅拌器以400-500转/分钟搅拌2小时，再静置20h，然后将上清液(4°C、3850g离 心60min，取上清液，并按7 93的体积比加入6倍Tris-B母液，再加入无菌甘油，甘 油最终比例为12% (ν/ν)，摇勻，加入抗生素庆大霉素终浓度26. 6 μ g/ml ；林可霉素终 浓度15. 9μ g/ml ；奇霉素终浓度31. 9μ g/ml ；泰乐菌素终浓度5. 3 μ g/ml，调PH值为 6. 80 士 0. 02，于4°C冰箱中保存备用。
全文摘要
一种卵黄稀释液的配制新方法，属于动物生殖生物领域，它包括卵黄的制备；配制4.6倍Tris-A母液及6倍Tris-B母液，无菌过滤；用无菌水稀释为0.5倍Tris-A和Tris-B溶液；分别和卵黄混合、搅拌、静置、离心后收取上清液；用4.6倍Tris-A和6倍Tris-B母液分别调节上清液的浓度，使Tris-A和Tris-B达到1倍；分别加入抗生素及无菌甘油，调pH值，于4℃保存备用。本发明省去过滤，方法简单，卵黄稀释液颗粒少，保证冷冻精子的活率，提高冻精产品质量，减少生产成本。
文档编号A01N1/02GK101999342SQ201010299290
公开日2011年4月6日 申请日期2010年10月8日 优先权日2010年10月8日
发明者周文忠, 李喜和, 王丽霞, 胡树香 申请人:内蒙古蒙牛繁育生物技术股份有限公司