专利名称：一种用于液态低温条件保存血小板的添加液及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及保存血小板的制剂，具体涉及一种用于液态低温条件保存血小板的添 加液。
背景技术：
由于临床血小板的常规保存方法(22°C振荡保存)存在显著的细菌和其它病原体 污染的风险，使得目前血小板保存期仅限于5天。另外，这一条件也导致了血小板制品中残 留的白细胞产生多种细胞因子，如TGF- β ,RANTES,1L-I β和IL-8等，可引起非溶血性输血 反应和其它输血副反应的发生。目前，解决这一问题的方法主要有血小板制品污染检测、冷 冻或冷藏保存等。然而，以往的研究表明。低温冷藏可导致血小板的活化和损伤，血小板回 输人体后将被快速清除出血流，失去临床应用价值。美国LifeCell公司曾在90年代初研制成功了一种可用于血小板低温保存添加 液-Thrombosol，它含有多种第2信使调节剂(second-messenger effectors)。如阿米洛 利(amiloride)、硝普钠(sodium)和潘生丁(dipyridamole)等临床抗血小板药物，其作用 是抑制血小板的活化。体外实验研究结果证明，能提高4°C冷藏保存血小板的活力，却未能 对冷藏导致的血小板回输体内后被快速吞噬清除的现象作进一步评价。而且，这些抗血小 板药物如不经洗涤直接输注给患者，必然会产生一定的副作用。因此，到目前为止仍未有能 用于临床输注的血小板冷藏添加液问世。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种可减小血小板在低温条件下 冷藏损伤的、保持血小板活力且符合静脉滴注要求的且能用于血库规模化冷藏的血小板添 加液。本发明首先提供了一种用于冷藏保存血小板的添加液，除含有血液抗凝剂、血小 板代谢底物和平衡盐外，还含有血小板冷藏保护剂。所述抗凝剂可选自常规血小板保存添加液所采用的抗凝剂，如枸橼酸钠，乙二胺 四乙酸钠、肝素等中的一种或多种，抗凝剂的总浓度为8j6mmol/L。所述血小板代谢底物可选自常规血小板保存添加液所采用的血小板代谢底物，如 醋酸钠、腺苷和葡萄糖等中的一种或多种，血小板代谢底物的总浓度为25-35mmol/L。所述平衡盐包括缓冲对与无机盐，缓冲对可选自常规血小板保存添加液所采用 的缓冲对，如磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲对(PH6. 8-7. 0)、碳酸钠/碳酸氢钠缓冲对 (pH6. 8-7.0)等；无机盐包括氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或多种，无机盐的总浓度为 6. 5-105. 5mmol/L。所述冷藏保护剂的组配是本发明的关键，包括下列终浓度的组分(以添加剂总体 积或总重量为基准计)1)甘露醇 50-120mmol/L
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2)以下组分中的任一种A.海藻糖 20-150mmol/LB. DMSO 2-5% (体积百分比浓度)C.腺嘌呤 l_5mmol/L。本发明的血小板添加液的溶剂为水，优选去离子水。本发明的血小板添加液的溶质均为可溶性。优选的，本发明的用于冷藏保存血小板的添加液中含有下列浓度的溶质组分枸橼酸钠8-26mmol/L
醋酸钠25_35mmol/:
磷酸二氢钠23-26mmol/
磷酸氢二钠23-26mmol/
海藻糖20-150mmol,
甘露醇50-120mmol,
氯化钠0-99mmol/L
氯化钾5mmol/L
氯化镁1. 5mmol/L本发明提供的血小板添加液的配制方法为按配方称取血液抗凝剂、血小板代谢 底物、平衡盐，以及冷藏保护剂，加去离子水至一定体积，充分搅拌溶解，而后除菌或灭菌， 可采用过滤除菌或高压蒸汽灭菌。本发明还提供了一种冷藏保存血小板的方法，为在血小板中添加前述血小板添加 液后冷藏。本发明中，冷藏是指2-6°C保藏。较佳的，添加血小板添加液后，血小板终浓度为 0. 9-1. 2X109 个/L。由于本发明添加液中除冷藏保护剂外，所有成分均为德国Macopharma公司的 PAS-IIIM和国产MAP商品化血细胞添加液所含组分，已被证实可安全适用于静脉滴注，而 冷藏添加液成分甘露醇为静脉注射剂；DMSO也曾在美国和德国获得静脉注射许可。海藻 糖属于双糖，与葡萄糖类似，在细胞吞噬实验和小鼠体内试验中均未见有细胞毒性和全身 毒性[黄成垠等.以海藻糖为添加剂冷藏保存血小板的研究中国实验血液学杂志2005 ； 13 (5) =904-906]，因此认为，本发明的添加液适用于静脉滴注。发明的效果本发明添加液组合中除了包含维持防止血小板聚集、维持血小板能量代谢水平、 酸碱度稳定性的基本成分外，还包含防止血小板活化的成分，并特别添加了在低温保存条 件下有效的防止血小板冷藏损伤的冷藏保护剂。本发明所述冷藏添加液成分均适用于静脉 滴注。用于血小板液态冷藏保存，对保持血小板质膜完整性以及血小板的体内和体外活力 具有一定的作用。
图1 血小板冷藏添加液2和PAS-IIIM血小板添加液冷藏保存7天的血小板输注 地塞米松处理的小鼠(n = 6*2)试验结果
具体实施例方式以下列举具体实施例以进一步阐述本发明，应理解实例并非用于限制本发明的保 护范围。实施例1按照表1的配方配制血小板添加液。配制方法为按配方称取血液抗凝剂、血小板代谢底物、平衡盐，以及冷藏保护剂， 加入离子水，充分搅拌溶解，而后过滤除菌或高压蒸汽灭菌。表1(单位 mmol/L)
权利要求
1.一种用于冷藏保存血小板的添加液，含有血液抗凝剂、血小板代谢底物和平衡盐，其 特征在于，所述冷藏保存血小板的添加液中还含有血小板冷藏保护剂，以添加剂总体积或 总重量为基准计，所述冷藏保护剂包括下列浓度的组分1)甘露醇50-120mmol/L2)以下浓度组分中的任一种A.海藻糖20-150mmol/LB.DMSO体积百分比浓度为2-5%C.腺嘌呤l-5mmol/L。
2.如权利要求1所述用于冷藏保存血小板的添加液，其特征在于，所述抗凝剂选自枸 橼酸钠，乙二胺四乙酸钠或肝素等中的一种或多种，抗凝剂的总浓度为8j6mmol/L。
3.如权利要求1所述用于冷藏保存血小板的添加液，其特征在于，所述血小板代谢底 物选自醋酸钠、腺苷和葡萄糖等中的一种或多种，血小板代谢底物的总浓度为25-35mmol/ L。
4.如权利要求1所述用于冷藏保存血小板的添加液，其特征在于，所述平衡盐包括缓 冲对与无机盐。
5.如权利要求4所述用于冷藏保存血小板的添加液，其特征在于，所述缓冲对选 自pH6. 8-7.0的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲对或pH6. 8-7. 0的碳酸钠/碳酸氢钠 缓冲对，所述无机盐选自氯化钠、氯化钾或氯化镁中的一种或多种，无机盐的总浓度为 6. 5-105. 5mmol/L。
6.如权利要求1所述用于冷藏保存血小板的添加液，其特征在于，所述添加液中含有 下列浓度的溶质组分
7.如权利要求1-6任一权利要求所述用于冷藏保存血小板的添加液，其特征在于，所 述添加液的溶剂为水，溶质均为可溶性物质。
8.如权利要求1-7任一权利要求所述用于冷藏保存血小板的添加液的制备方法，包括 下列步骤按配方称取血液抗凝剂、血小板代谢底物、平衡盐以及冷藏保护剂，加去离子水 至一定体积，充分搅拌溶解，而后除菌或灭菌。
9.一种冷藏保存血小板的方法，为在血小板中添加权利要求1-7任一权利要求所述添 加液后冷藏。
10.如权利要求9所述保存血小板的方法，其特征在于，添加血小板添加液至血小板终 浓度为 0. 9-1. 2 X 109 个/L。
全文摘要
本发明公开了一种用于冷藏保存血小板的添加液，含有血液抗凝剂、血小板代谢底物、平衡盐以及血小板冷藏保护剂。本发明用于冷藏保存血小板的添加液可减小血小板在低温条件下冷藏损伤、保持血小板活力且符合静脉滴注要求，能用于血库规模化冷藏。
文档编号A01N1/02GK102144630SQ201110036458
公开日2011年8月10日 申请日期2011年2月12日 优先权日2011年2月12日
发明者任亚娜, 张晰, 杨洁, 范华骅, 谢如锋, 钱开诚 申请人:上海市血液中心