专利名称：日本冬虫夏草的人工栽培技术的制作方法
技术领域：
生物技术
背景技术：
虫草属Cordyceps (Fr. ) Link.是ー种营腐寄生菌。冬虫夏草寄生于蝙蝠蛾幼虫，这种虫被感染此菌后，就会得病死亡，到一定的时侯从虫体头上长出子座(即虫草)。虫草的人工培养包括液体发酵和固体栽培两种。液体发酵技术简単，成本低，可在短时间内富集发酵液和菌丝体，并提取其中的活性产物，目前应用较广泛。然而从我国传统中药学角度来看，野生虫草的药学性质表现为草性寒，虫性热，一寒ー热，分用各有利弊，合用则可调和阴阳，因此药性温和，一年四季均可食用，老、少、病、弱、虚者皆宜。由此可见，虫草最重要的医学价值在于虫草复合体的联用，而人工栽培的实现和栽培技术的推广使用便是虫草资源深度开发利用的必然途径。虫草属真菌的人工栽培是指使用无性型菌丝体人工感染寄生昆虫 (或培养基)，在特定的培养条件下诱发形成具有成熟子囊壳的子实体。近年来，众多研究表明，人工栽培的虫草在化学成分和药理活性方面与野生虫草相似，但价格却远远低于野生虫草。因此，虫草属真菌子实体诱发及生长条件成为国内外研究的热点。自19世纪60年代起，国内外就开始了对虫草子实体人工培养的研究，但由于虫草属真菌种类繁多，不同种的虫草生长条件不尽相同，而每种虫草的子实体形成和生长所需的条件往往都很苛刻，各种条件难于同时满足，导致许多虫草无法进行人工栽培，已有的虫草人工栽培技术也难以大范围推广应用。这成为虫草资源开发利用的瓶颈，亟待解決。至今为止正式报道栽培成功的虫草仅有布氏虫草、挪威虫草、蛹虫草、高雄山虫草、粉被虫草、蝉花、球孢虫草等少数几种，且多数处于实验阶段，尚不能进行批量生产。目前，仅有蛹虫草实现了规模化生产。日本冬虫夏草具有广泛的生理活性和药效成分，人工栽培可以获得大量的虫草资源，应用于医药保健行业。
发明内容
本发明的目的是提供日本冬虫夏草(Cordyceps japonica)进行人工栽培的方法，本发明是将源于青岛崎山风景区采集的日本冬虫夏草(Cordyceps japonica),寄主为鳞翅目大蚕蛾科的昨蚕蛹(Antherea pernyi Guerin-MeneviIIe)虫草,将其进行表面消毒以无菌操作的方法在PDA培养基上进行组织分离，获得日本冬虫夏草(Cordyc印sjaponica)的菌种，将该菌种接种在人工配置的培养基上或寄主昆虫体内，经过培养，获得日本虫草。栽培方法简单，栽培条件易与控制，可进行产业化栽培，提供了人工培养日本虫草的技木。
图I :人工培养子实体图片。图2 :柞蚕蛹为寄主培养全草图片。
具体实施例方式实施例II.日本虫草菌株的分离纯化采集青岛崎山风景区的日本虫草(Cordyceps japonica),用升萊进行表面消毒，从虫草体表无菌切子座成米粒大小块，取无菌部位组织块压入培养基(土豆200g，蔗糖20g，蛋白胨lg，配置1000ml)中；将其培养在26°C，培养时间为7天。在培养基表面出现虫草菌落时，挑取单个菌落置试管斜面培养基培养。该菌株在培养基(土豆200g，蔗糖20g，酵母膏3g，K2HPO4L 5g，MgSO4O. 5g，VB1适量)上26°C避光培养7天后，菌落直径25_30mm，平展，由致密的菌丝体组成。培养初期菌落表面呈白色，随着培养时间的延长，表面变为原白色绒毛状，布满孢子，菌落背面淡棕色，呈放射状。菌落与培养基结合紧密。2.制备菌种将液体培养基(土豆200g，蔗糖 20g，酵母膏 3g，K2HPO4 I. 5g，MgSO4 0. 5g，VB1 适量，配制1000ml)分装于500ml三角瓶中，每瓶加培养液200ml，灭菌后接种，24°C摇瓶培养10天，获得栽培用菌种。3.虫草子实体人工培养小麦(小麦可以由大米、玉米、大麦代替)合成培养基配方培养液(蔗糖1%,K2HPO4O. 15%, MgSO4O. 05%，蛋白胨0. 3% 1000ml)，优质麦粒。配置时，用500ml罐头瓶装30g麦粒，加入45mL培养液。灭菌后至室温，按无菌操作规程接种，置培养室24°C培养。避光培养12天。待菌丝布满米饭培养基表面时，采用22-26°C光照培养，继续培养30-35天。
4.采收子实体生长至5-7厘米，轻轻完整采收，采收后即避光风干或低温烘干，获得日本虫草人工培养基的子实体(图I)。实施例2I 制备菌种将分离菌株在PDA培养基上活化后,接种于无菌培养基液体培养基(土豆200g，蔗糖20g, K2HPO4 I. 5g，MgSO4 0. 5g，配制1000ml，分装于500ml三角瓶中，每瓶加培养液200ml，封ロ灭菌)，24°C摇瓶培养3天，菌丝长成粘稠糊状，无污染，既得栽培用菌种。2 接种和培养将栽培用菌种按无菌操作注射于新鲜柞蚕蛹体内，每只柞蚕蛹接种约0. 1ml，接种后将蛹体放入500ml玻璃广ロ瓶中，每瓶8只蛹体，聚丙烯薄膜封ロ。至于22-24°C避光10天，蛹体僵化后移入培养室，然后至于22°C光照培养。IOOOLux每天光照10小时。空气相对湿度85% 90%。诱导子实体原基产生，培养30-40天。3.采收子实体生产至6-8厘米，采收后即风干或低温烘干，获得日本虫草的虫草复合体(图2)。
权利要求
1.日本冬虫夏草(Cordycepsjaponica)子实体栽培技术,其特征是采集天然日本冬虫夏草通过无菌操作进行组织分离获得菌种，用分离得到的菌种进行人工栽培，在合成培养上生产日本冬虫夏草子实体。
2.日本冬虫夏草(Cordycepsjaponica)寄主栽培技术,其特征是采集天然日本冬虫夏草通过无菌操作进行组织分离获得菌种，用分离得到的菌种，通过注射接种在柞蚕蛹体内，培养日本冬虫夏草。
全文摘要
本发明的目的是提供日本冬虫夏草(Cordyceps iaponica)进行人工栽培的方法，本发明是将源于青岛崂山风景区采集的日本冬虫夏草(Cordyceps iaponica)，寄主为鳞翅目大蚕蛾科的柞蚕蛹(Antherea pernyi Guerin-Meneville)虫草样品，将其进行表面消毒以无菌操作的方法在PDA培养基上进行组织分离，获得日本冬虫夏草(Cordyceps japonica)的菌种，将该菌种接种在人工配置的培养基上或寄主昆虫体内，经过培养，获得日本虫草。栽培方法简单，栽培条件易与控制，可进行产业化栽培，提供了人工培养日本虫草的技术。
文档编号A01G1/04GK102754562SQ20111011340
公开日2012年10月31日 申请日期2011年4月24日 优先权日2011年4月24日
发明者陈大宫 申请人:陈大宫