一种防止大蒜子房培养污染的方法

专利名称：一种防止大蒜子房培养污染的方法
技术领域：
本发明涉及一种防止大蒜子房培养污染的方法，属于大蒜组织培养技术领域。
背景技术：
大蒜(A. Sativum L.)为百合科的香辛类蔬菜，生产上由于在常规栽培条件下大蒜花败育，不能正常结籽，不能进行有性杂交，所以长久以来只能靠种蒜瓣无形繁殖。无形繁殖造成大蒜遗传背景狭窄，无法利用遗传背景不同的大蒜种质资源培养新品种；同时大蒜的无性繁殖，造成病毒在体内积累、导致蒜种退化严重，产量和品质下降。本发明申请人于 2005年建立了一种大蒜有性生殖培养方法(具体见专利2005100425M. 8，一种大蒜有性生殖胚培养技术)，该方法是在实验室条件下使大蒜开花授粉，子房膨大后，将子房从花茎连接的基部切下，进行子房组织培养，其中培养中污染率高是一个严重影响大蒜子房进一步发育的重要因素，而此方法中的消毒方式严重伤害了大蒜子房，导致没有污染的子房死亡率极高。为了使大蒜子房在培养基中很好地生长发育，防止污染和降低大蒜子房死亡率是亟待解决的问题。这就需要根据大蒜子房的生长环境和结构特点，选出一种有效防止大蒜子房组织培养污染的方法，以提高大蒜子房培养的成活率。

发明内容
为了解决大蒜子房组织培养污染率高的难题，本发明提供了一种防止大蒜子房培养污染的方法，该方法大大降低了大蒜子房组织培养的污染率，提高了大蒜子房培养成活率。本发明技术方案如下一种防止大蒜子房培养污染的方法，其特征是，包括以下步骤(1)对配制的子房培养基进行高压灭菌；( 防止大蒜子房污染的药剂头孢氨苄过滤灭菌后加入到培养基中；C3)大蒜子房接入培养基前消毒处理；(4)将消毒好的大蒜子房接种在含有头孢氨苄的培养基中培养。具体步骤如下(1)将0. Olmg 6_苄氨基腺嘌呤或玉米素、0. 02mg吲哚乙酸或萘乙酸和6_7g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中配制成子房培养基，将子房培养基pH调整至5. 8-6.0，并进行高压灭菌；(2) IL高压灭菌好的子房培养基中加入50_200mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装；C3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用75% (质量百分浓度)的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用-1.5% (质量百分浓度)的次氯酸钠溶液消毒8-15min ；然后用无菌水冲洗3遍；(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄的已分装好的培养基中培养。培养条件为温度23士2°C，光照13-Wh/d，相对湿度65-75%。本发明的有益效果为本发明的方法大大降低了大蒜子房组织培养的污染率，提高了大蒜子房培养成活率，为大蒜有性生殖技术研究提供了保障。
具体实施例方式实施例1(1)将0. Olmg 6_苄氨基腺嘌呤、0. 02mg萘乙酸和6g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中配制成子房培养基，将子房培养基PH调整至5. 8-6. 0，并进行高压灭菌；(2) IL高压灭菌好的子房培养基中加入120mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装；(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用75%的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用1. 5%的次氯酸钠溶液消毒lOmin，然后用无菌水冲洗3 遍；(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄已分装好的培养基中培养。实验例对采用本发明实施例1的方法和对照方法(专利2005100425M. 8中实施例1的方法)进行培养30天，其培养7天及30天的真菌、细菌污染率及大蒜子房成活率实验结果如下表1不同防止污染方法下大蒜子房的污染率
处理培养7天真菌培养7天细菌污培养30天真菌污培养30天细菌污
污染率(％)染率(％)染率(％)染率(％)
本发明方法 6.7O13.33.3
对照方法 73.386.783.390表2不同防止污染方法对大蒜子房成活率的影响(没有污染的大蒜子房统计结果)
处理培养30天大蒜子房成活率(％) 培养30天大蒜子房死亡率(％) 本发明方法7525
对照方法1585培养7天调查污染情况，按照此方法进行的培养，真菌污染率为6. 7%，没有发现细菌污染，而按照对照组方法进行的培养，真菌污染率为73. 3%，细菌污染率为86. 7% ；30 天调查总的污染情况，按照此方法进行的培养真菌污染率为13. 3%，细菌污染率为3. 3%, 大蒜子房成活率为75 % ；而对照方法真菌污染率高达83.3%，细菌污染率高达90 %，大蒜子房成活率为15%。从两种方法对于大蒜子房的伤害程度上看，本发明方法有效地降低了对大蒜子房的伤害程度，大大提高了成活率。从试验结果可看出本发明的方法大大降低了大蒜子房组织培养的污染率，提高了大蒜子房培养成活率，为大蒜有性生殖技术研究提供了保障。实施例2
(1)将0. Olmg 6_苄氨基腺嘌呤、0. 02mg萘乙酸和6g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中，pH调整至5. 8-6. 0，进行高压灭菌。(2) IL高压灭菌好的子房培养基中加入80mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装。(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30分钟，再在无菌条件下先用75%的酒精浸泡1秒钟，然后用无菌水冲洗3遍，再用1. 5%的次氯酸钠溶液消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3遍。(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄已分装好的培养基中培养。实施例3(1)将0. Olmg 6_苄氨基腺嘌呤、0. 02mg萘乙酸和6g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中，pH调整至5. 8-6. 0，进行高压灭菌。(2) IL高压灭菌好的子房培养基中加入IOOmg过滤灭菌的头孢氨苄，分装。(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用75%的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用1 %的次氯酸钠溶液消毒15min，然后用无菌水冲洗3遍。(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄已分装好的培养基中培养。实施例4(1)将0. Olmg 6_苄氨基腺嘌呤、0. 02mg萘乙酸和6g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中，pH调整至5. 8-6. 0，进行高压灭菌。(2) IL高压灭菌好的子房培养基中加入150mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装。(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用75%的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用1 %的次氯酸钠溶液消毒15min，然后用无菌水冲洗3遍。(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄已分装好的培养基中培养。实施例5(1)将0. Olmg玉米素、0. 02mg吲哚乙酸和6. 5g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中配制成子房培养基，PH调整至5. 8-6. 0,并进行高压灭菌；(2) IL高压灭菌好的子房培养基中加入200mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装。(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用75%的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用1.5%的次氯酸钠溶液消毒8min，然后用无菌水冲洗3 遍。(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄已分装好的培养基中培养。
权利要求
1.一种防止大蒜子房培养污染的方法，其特征是，包括以下步骤，(1)将0.Olmg 6-苄氨基腺嘌呤或玉米素、o.oaiig吲哚乙酸或萘乙酸和6-7g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中配制成子房培养基，将子房培养基pH调整至5. 8-6.0，并进行高压灭菌；(2)IL高压灭菌好的子房培养基中加入50-200mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装；(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用质量百分浓度75% 的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用质量百分浓度1 % -1. 5%的次氯酸钠溶液消毒 8-15min ；然后用无菌水冲洗3遍；(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄的已分装好的培养基中培养。
2.如权利要求1所述的一种防止大蒜子房培养污染的方法，其特征是，包括以下步骤，(1)将0.Olmg 6-苄氨基腺嘌呤、0. O^iig萘乙酸和6g的琼脂溶解在IL B5基本培养基中配制成子房培养基，将子房培养基PH调整至5. 8-6. 0,并进行高压灭菌；(2)IL高压灭菌好的子房培养基中加入120mg过滤灭菌的头孢氨苄，分装；(3)将取下的大蒜子房用自来水冲洗30min，再在无菌条件下先用质量百分浓度75% 的酒精浸泡ls，然后用无菌水冲洗3遍，再用质量百分浓度1.5%的次氯酸钠溶液消毒 lOmin，然后用无菌水冲洗3遍；(4)将表面消毒好的大蒜子房用已灭菌的滤纸吸干水，然后接种在含有头孢氨苄已分装好的培养基中培养。
全文摘要
本发明公开了一种防止大蒜子房培养污染的方法，属于大蒜组织培养技术领域。所述培养方法包括以下步骤(1)对配制的子房培养基进行高压灭菌；(2)防止大蒜子房污染的药剂头孢氨苄过滤灭菌后加入到培养基中；(3)大蒜子房接入培养基前消毒处理；(4)将消毒好的大蒜子房接种在含有头孢氨苄的培养基中培养。本发明的方法大大降低了大蒜子房组织培养的污染率，提高了大蒜子房培养的成活率，为大蒜有性生殖技术研究提供了保障。
文档编号A01H4/00GK102257966SQ201110183228
公开日2011年11月30日 申请日期2011年7月1日 优先权日2011年7月1日
发明者刘冰江, 吴雄, 孔素萍, 徐培文, 杨妍妍, 杨爱平, 段乃彬, 陈运起, 高莉敏 申请人:山东省农业科学院蔬菜研究所