专利名称：一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法
技术领域：
本发明属于蜜蜂育种领域，涉及一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法。
背景技术：
蜂螨是蜜蜂最主要的寄生病虫害之一，它靠吸吮蜜蜂幼虫、蜜蜂蛹以及成年蜂的体液为食。受蜂螨危害的蜂群，蜂群群势迅速削弱，幼虫早期死亡，出房的蜜蜂无翅或翅不全，使蜂群中蜜蜂数量下降，采集蜂也逐渐减少，从而导致蜂群生产力、生命力同时下降。又由于蜂螨的繁殖率极高，在普遍的蜂群中形成了恶性的生物断链循环，可以导致蜂群的最后灭亡。全球中90%以上意蜂均有不同程度的蜂螨病。为了及时控制和治疗蜂螨，几十年来，养蜂从业人员大都采用药物防治，但药物防治有如下危害(1)蜂螨对治螨药物易产生抗性，降低了蜜蜂群体质量，同时导致其他蜂病如爬蜂病等相继出现；(2)药物治螨只能把蜂螨控制在低水平，养蜂者必须每年用药物治螨2-3 次，不仅需要资金，还浪费劳动力和时间；(3)药物治螨容易对蜂产品的造成污染，特别引起国际市场对我国蜂产品药物残留的过度关注，导致增加了贸易壁垒和技术壁垒。中华蜜蜂是蜂螨的原始寄主，对蜂螨有较强的抗性。利用营养杂交技术结合常规的育种方法来选育优质抗螨蜂种是从根本上解决蜂螨危害的有效途径。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是针对上述药物不能从根本上解决蜂螨问题，提供一种利用营养杂交、配子选育、人工受精、自然交尾配套育种技术来选育优质高产抗螨蜂种方法。本发明的技术方案是通过配子选育技术与人工受精技术定向选育高产蜂王浆的意大利蜜蜂和抗螨性强的中华蜜蜂。利用中蜂与意蜂营养杂交技术和自然交尾方法培育意蜂蜂王。杂交数代后， 培育出优质抗螨意蜂蜂种。再通过蜜蜂育种常规指标检测技术、现代分子生物学技术和生化检测技术等来选育一个抗螨的意蜂新品种。具体步骤是a)育种素材的选定根据蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求，按照抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< 10% )、生产力(蜂王浆年产量> 8. 10kg、蜂蜜年产量> 96. 15kg、商品蜂花粉年> 4. 56kg)、生命力(蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 35. 76U/ml)等系列指标，我们筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越(年产蜜量> IlOkg)的法国纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康(无各类蜜蜂疾病，并且蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 37. 30U/ ml)本地中华蜜蜂蜂种为引种对象。b)抗螨蜂种的选育先利用配子选育原理(即通过雄蜂的精子活力与畸形率检测，选出最优雄蜂)从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物学与遗传育种特性 (检测对蜂王的初生重、卵巢管数、体长与体宽指标进行对比，选出最优处女王。)的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本。以从法国引进的产蜜性能优越的纯种意蜂为母本。选择抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< )能较强的健康中蜂，采集其新鲜蜂王浆，-20°C保存c)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束。制作蜡质意蜂王台放入中蜂群清理12h。移中蜂幼虫，产浆3天后，在不破坏王浆的情况下去除中蜂幼虫， 移入法国意蜂一日龄幼虫。放入中蜂群继续哺育10-12h后移出，放入江山2号强群(蜜蜂数量在4. 5kg以上)，每天用注射器往王台中人工注射50ul新鲜中蜂蜂王浆，直至封盖。营养杂交子1代蜂王出房后与江山2号雄蜂自然交尾并产卵，组成新的蜂群，检测其工蜂自然蜂螨寄居率。当工蜂自然蜂螨寄居率大于5%时，取营养杂交子1代一日龄幼虫按上述育种方法培育子2代、子3代、子4代营养杂交蜂种。并每隔7天割除子1代、子2代和子3代雄蜂蛹，直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%为止。同理，以江山2号(引自江山健康种蜂场，) 为母本、浙大A系(引自浙江大学动物科学学院)为父本培育出“中意蜂营养杂交意蜂子1 代”，然后用同样的方法以“营养杂交意蜂子1代”母本、“江山2号”为父本培育出“营养杂交意蜂(Fl，Fi表示第i代，下同)”。当在不用药物防治情况下，“营养杂交意蜂”蜂群蜂螨感染率下降至5%以下时，再将“营养杂交意蜂”进行姐妹杂交进行基因固定，以此方式，每代进行姐妹杂交固定，经过4代的横向固定和继代繁殖，当基因不再发生变化时，即形成一个遗传稳定的蜜蜂品系——优质抗螨高产蜂种。本发明，可以为蜂农解决蜂螨对蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂产品的产量禾口质量。
图1为Nei ‘ s的UPGMA法聚类图；图2为育种技术流程图；图3为育种技术路线图。其中A 江山2号，B:法国意蜂，C:中华蜜蜂，D 子1代，E 子4代。
具体实施例方式a)育种素材的选定根据蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求，按照抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< 10% )、生产力(蜂王浆年产量> 8. 10kg、蜂蜜年产量> 96. 15kg、商品蜂花粉年> 4. 56kg)、生命力(蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 35. 76U/ml)等系列指标，我们筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越(年产蜜量> IlOkg)的法国纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康(无各类蜜蜂疾病，并且蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 37. 30U/ ml)本地中华蜜蜂蜂种为引种对象。b)抗螨蜂种的选育先利用配子选育原理(即通过雄蜂的精子活力与畸形率检测，选出最优雄蜂)从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物学与遗传育种特性 (检测对蜂王的初生重、卵巢管数、体长与体宽指标进行对比，选出最优处女王。)的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能
4较强的江山2号蜂种作为父本。以从法国引进的产蜜性能优越的纯种意蜂为母本。选择抗螨性(工蜂自然蜂螨寄居率< )能较强的健康中蜂，采集其新鲜蜂王浆，_20°C保存备用。c)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束。制作蜡质意蜂王台放入中蜂群清理12h。移中蜂幼虫，产浆3天后，在不破坏王浆的情况下去除中蜂幼虫，移入法国意蜂一日龄幼虫。放入中蜂群继续哺育ιο-ia!后移出，放入江山2号强群 (蜜蜂数量在4. 5kg以上)，每天用注射器往王台中人工注射50ul新鲜中蜂蜂王浆，直至封盖。营养杂交子1代蜂王出房后与江山2号雄蜂自然交尾并产卵，组成新的蜂群，检测其工蜂自然蜂螨寄居率。当工蜂自然蜂螨寄居率大于5%时，取营养杂交子1代一日龄幼虫按上述育种方法培育子2代、子3代、子4代营养杂交蜂种。并每隔7天割除子1代、子2代和子3代雄蜂蛹，直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%为止。同理，以江山2号(引自江山健康种蜂场，)为母本、浙大A系(引自浙江大学动物科学学院)为父本培育出“中意蜂营养杂交意蜂子1代”，然后用同样的方法以“营养杂交意蜂子1代”母本、“江山2号”为父本培育出“营养杂交意蜂(Fl，Fi表示第i代，下同)”。当在不用药物防治情况下，“营养杂交意蜂”蜂群蜂螨感染率下降至以下时，再将“营养杂交意蜂”进行姐妹杂交进行基因固定， 以此方式，每代进行姐妹杂交固定，经过4代的横向固定和继代繁殖，当基因不再发生变化时，即形成一个遗传稳定的蜜蜂品系——优质抗螨高产蜂种。遗传育种检测①优质抗螨高产蜂种形态指标及初生重测定本地浆蜂、法国意蜂、本地中华蜜蜂、营养杂交F1、F2、F3和F4代的形态测定工作。通过标准方法测定指标为吻长、右前翅长度、右前翅宽度、第三腹节背板长度、肘脉指数、翅钩数等六外部形态指标及初生重。②优质抗螨高产蜂种生化特性研究以本地浆蜂、法国意蜂、本地中华蜜蜂和营养杂交Fl、F4代工蜂为材料，应用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术检测工蜂苹果酸脱氢酶 II的基因型、基因型频率、基因频率、杂合度和纯合度。③优质抗螨高产蜂种微卫星DNA遗传多样性分析以本地浆蜂、法国意蜂、本地中华蜜蜂和营养杂交Fl、F4代工蜂为实验材料，运用微卫星DNA遗传多样性分析技术检测以上蜜蜂的DNA多态性。④优质抗螨高产蜂种繁殖率、蜂螨寄生率和卫生行为测定以本地浆蜂、法国意蜂和营养杂交F1、F4代蜂群为材料，检测各个蜂种的繁殖率，蜂螨寄生率和卫生行为。⑤优质抗螨高产蜂种抗农药性能测定以本地浆蜂、法国意蜂和营养杂交F4代蜂群为材料，通过农药摄入法检测以上蜜蜂的抗农药特性。⑥实验蜂群生产力的测定在生产季节，定时定群记录每组蜂群的蜂蜜及蜂王浆产量。⑦蜂蜜、蜂王浆的质量检测用抗螨意蜂生产出来的蜂蜜、蜂王浆质量是否符合国家标准，取样送往农业部蜂产品检测中心进行水分、蛋白质、蔗糖、癸希酸等指标分析。通过本发明选育的蜂种与亲本蜂种对比如下1、营养杂交子4代工蜂和亲本蜂种形态指标对比
权利要求
1. 一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法，其特征在于包括以下步骤a)育种素材的选定根据蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求，按照抗螨性工蜂自然蜂螨寄居率< 10%，生产力蜂王浆年产量> 8. 10kg、蜂蜜年产量> 96. Mkg、商品蜂花粉年> 4. 56kg，生命力蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 35. 76U/ml这些系列指标，筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和年产蜜量> IlOkg的产蜜性能优越的法国纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康无各类蜜蜂疾病且蜜蜂抗氧化能力SOD活性> 37. 30U/ml的本地中华蜜蜂蜂种为引种对象；b)抗螨蜂种的选育通过雄蜂的精子活力与畸形率检测，选出最优雄蜂的办法，从江山2号中选育出种用雄蜂，然后检测对蜂王的初生重、卵巢管数、体长与体宽指标，进行对比，选出最优的江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本；以从法国引进的产蜜性能优越的纯种意蜂为母本；选择工蜂自然蜂螨寄居率< 的抗螨性能较强的健康中蜂，采集其新鲜蜂王浆，-20°C保存备用；c)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束；制作蜡质意蜂王台放入中蜂群清理12h;移中蜂幼虫，产浆3天后，在不破坏王浆的情况下去除中蜂幼虫，移入法国意蜂一日龄幼虫；放入中蜂群继续哺育10-1 后移出，放入蜜蜂数量在4. 5kg以上的江山2号强群，每天用注射器往王台中人工注射50ul新鲜中蜂蜂王浆，直至封盖；营养杂交子1代蜂王出房后与江山2号雄蜂自然交尾并产卵，组成新的蜂群，检测其工蜂自然蜂螨寄居率；当工蜂自然蜂螨寄居率大于5 %时，取营养杂交子1代一日龄幼虫按上述育种方法培育子2代、子3代、子4代营养杂交蜂种；并每隔7天割除子1代、子2代和子3代雄蜂蛹， 直至工蜂自然蜂螨寄居率小于5%为止；同理，以引自江山健康种蜂场的江山2号为母本、 引自浙江大学动物科学学院的浙大A系为父本培育出“中意蜂营养杂交意蜂子1代”，然后用同样的方法以“营养杂交意蜂子1代”母本、“江山2号”为父本培育出“营养杂交意蜂Fl ； 当在不用药物防治情况下，“营养杂交意蜂”蜂群蜂螨感染率下降至5%以下时，再将“营养杂交意蜂”进行姐妹杂交进行基因固定，以此方式，每代进行姐妹杂交固定，经过4代的横向固定和继代繁殖，当基因不再发生变化时，即形成一个遗传稳定的蜜蜂品系——优质抗螨高产蜂种。
全文摘要
一种优质抗螨蜜蜂蜂种的选育方法，其特征在于包括以下步骤1)育种素材的选定按照抗螨性、生产力、生命力等系列指标，筛选出蜂王浆产量较高的“江山2号”意蜂和产蜜性能优越的法国纯种意蜂以及抗螨性能优越的健康本地中华蜜蜂蜂种为引种对象；2)抗螨蜂种的选育先从江山2号中选育出种用雄蜂，然后遵照蜜蜂生物学与遗传育种特性的要求选育出江山2号处女蜂王，与选育出的种用雄蜂进行人工受精杂交，形成生产性能、抗病性能较强的江山2号蜂种作为父本；以从法国引进的产蜜性能优越的纯种意蜂为母本；3)从春繁开始，每隔7天检查割除法国意蜂雄蜂蛹，直至育种结束。本发明可以为蜂农解决蜂螨对蜂群的危害，提高蜂群的繁殖速度和蜂产品的产量和质量。
文档编号A01K67/033GK102342264SQ20111024700
公开日2012年2月8日 申请日期2011年8月25日 优先权日2011年8月25日
发明者何旭江, 曾志将, 汪志平, 陈利华 申请人:兰溪市鸿香生物科技有限公司