专利名称：一种组织培养快速繁育碰碰香的方法
技术领域：
本发明涉及一种组织培养快速繁育碰碰香的方法。
背景技术：
碰碰香(Plectranthus tomentosa),唇形科香茶菜属，多年生草本植物。丛生,多分枝，全株被有细密的白色绒毛。肉质叶，交互对生，绿色，卵圆形，边缘有钝锯齿。因触碰后可散发出香气而享有“碰碰香”的美称，又因其香味浓甜，颇似苹果香味，故又享有“苹果
香”美誉。碰碰香不仅能散发令人神清气爽的香气，而且可净化空气，环保特点突出，市场受宠；碰碰香适宜盆栽，宜放置在高处或悬吊在室内，也可作几案、书桌的点缀品；碰碰香叶片可泡茶、酒，奇香诱人，提神醒脑，清热解暑，驱避蚊虫；碰碰香全草可提炼香精，是未来香 薫治疗的一种新兴植物。迄今为止，国内外对于碰碰香的研究较少，仅有其挥发物组分的相关分析报道。目前，碰碰香的培育方法主要有扦插和有性繁殖两种(I)碰碰香扦插可成活，但自然繁殖率低；(2)有性繁殖容易因变异而不能保持其优良性状。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种培养基配方简单、繁育操作简单、繁育速度快，繁殖系数高，培育苗生长旺盛、健壮的组织培养快速繁育碰碰香的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，它包括以下步骤
Si:切取外植体并灭菌；
52:初代培养将灭菌后的外植体切割至2 3cm长的幼嫩茎段，接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，PH值为5. 8，光照强度为2800 3200LX，光照时间为15 17h/d，温度为23 25°C，培育时间为30 60d，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽；
53:继代培养切割丛生芽，分成直径为I. 5 2. 5cm的小块，接种于继代培养基中培养，继代培养基为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，培育时间为6 8d ；
54:生根培养丛生芽中的小芽长至2cm以上时，转接于生根培养基中培养，生根培养基为1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，培育时间为18 22d，生根培养后得到生根强壮的碰碰香组培苗；
55:炼苗移植洗掉组培苗上的培养基后移植。步骤SI中所述的切取外植体并灭菌的步骤包括以下子步骤
(1)采集无病虫害的碰碰香幼嫩茎段；
(2)去除多余叶片，于流水中冲洗30 40min；(3)在洗涤剂中浸泡4 6min；
(4)用流水冲洗，直至无泡沫出现；
(5)放入超净工作台上，用浓度为70% 75%的酒精消毒18 22s；
(6)用无菌水冲洗4 6次，放入浓度为O.1% O. 15%的升萊中灭菌4 6min ；
(7)用无菌水冲洗4 6次后，置于无菌纸上晾干。步骤S5中所述的移植基质为草炭土混合蛭石，混合比例为I 2 :1。本发明的有益效果是培养基配方简单，繁育过程操作简便，繁殖系数高，能够快速进行大量繁殖，繁殖后的小苗生长旺盛，健壮；移栽后只要注意遮光、降温和保湿，成活率 可高达100% ;炼苗移栽后的小苗长势良好，香味纯正浓郁。
图I为初代培养后外植体上长出丛生芽的照片图2为继代培养后外植体上长出大量丛生芽的照片图3为生根培养后得到的碰碰香组培苗的照片图4为碰碰香组培苗发达根系的照片图5为碰碰香组培苗炼苗移植的照片图6为碰碰香组培苗移植后室外生长状态照片图。
具体实施例方式下面结合具体实施例和附图进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。实施例I一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，它包括以下步骤
Si:切取外植体并灭菌，它又包括以下子步骤
(1)采集无病虫害的碰碰香幼嫩茎段；
(2)去除多余叶片，于流水中冲洗40min；
(3)在洗涤剂中浸泡4min；
(4)用流水冲洗，直至无泡沫出现；
(5)放入超净工作台上，用浓度为75%的酒精消毒18s；
(6)用无菌水冲洗6次，放入浓度为O.1%的升汞中灭菌6min ；
(7)用无菌水冲洗6次后，置于无菌纸上晾干；
52:初代培养将灭菌后的外植体切割至2cm长的幼嫩茎段，接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，PH值为5. 8，光照强度为3200LX，光照时间为15h/d，温度为25°C，培育时间为30d，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽，一个茎段上可诱导新芽数量达60个以上；
53:继代培养切割丛生芽，分成直径为I. 5cm的小块，接种于继代培养基中培养，继代培养基为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，培育时间为6d，完成继代培养后，丛生芽的数量可增加3倍以上；
54:生根培养丛生芽中的小芽长至2cm以上时，转接于生根培养基中培养，生根培养基为1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，培养5d后可见生根，培养18d后，得到生根强壮的碰碰香组培苗；
S5:炼苗移植洗掉组培苗上的培养基后移植，移植基质为草炭土混合蛭石，混合比例为 2 :1。实施例2一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，它包括以下步骤
Si:切取外植体并灭菌，它又包括以下子步骤
(1)采集无病虫害的碰碰香幼嫩茎段；
(2)去除多余叶片，于流水中冲洗30min；
(3)在洗涤剂中浸泡6min；
(4)用流水冲洗，直至无泡沫出现；
(5)放入超净工作台上，用浓度为70%的酒精消毒22s；
(6)用无菌水冲洗4次，放入浓度为O.15%的升汞中灭菌4min ；
(7)用无菌水冲洗4次后，置于无菌纸上晾干；
52:初代培养将灭菌后的外植体切割至3cm长的幼嫩茎段，接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，PH值为5. 8，光照强度为2800LX，光照时间为17h/d，温度为23°C，培育时间为60d，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽，一个茎段上可诱导新芽数量达60个以上；
53:继代培养切割丛生芽，分成直径为2. 5cm的小块，接种于继代培养基中培养，继代培养基为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，培育时间为8d，完成继代培养后，丛生芽的数量可增加3倍以上；
54:生根培养丛生芽中的小芽长至2cm以上时，转接于生根培养基中培养，生根培养基为1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，培养5d后可见生根，培养22d后，得到生根强壮的碰碰香组培苗；
55:炼苗移植洗掉组培苗上的培养基后移植，移植基质为草炭土混合蛭石，混合比例为 I :1。实施例3一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，它包括以下步骤
Si:切取外植体并灭菌，它又包括以下子步骤
(1)采集无病虫害的碰碰香幼嫩茎段；
(2)去除多余叶片，于流水中冲洗35min；
(3)在洗涤剂中浸泡5min；
(4)用流水冲洗，直至无泡沫出现；
(5)放入超净工作台上，用浓度为72.5%的酒精消毒20s ；
(6)用无菌水冲洗5次，放入浓度为O.125%的升汞中灭菌5min ；
(7)用无菌水冲洗5次后,置于无菌纸上晾干；
52:初代培养将灭菌后的外植体切割至2. 5cm长的幼嫩茎段，接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，PH值为5. 8，光照强度为3000LX，光照时间为16h/d，温度为24°C，培育时间为45d，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽，一个茎段上可诱导新芽数量达60个以上；
53:继代培养切割丛生芽，分成直径为2cm的小块，接种于继代培养基中培养，继代培养基为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，培育时间为7d，完成继代培养后，丛生芽的数量可增加3倍以上；
54:生根培养丛生芽中的小芽长至2cm以上时，转接于生根培养基中培养，生根培养基为1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，培养5d后可见生根，培养20d后，得到生根强壮的碰碰香组培苗；
55:炼苗移植洗掉组培苗上的培养基后移植，移植基质为草炭土混合蛭石，混合比例为 I. 5 :1。实施例4一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，它包括以下步骤
Si:切取外植体并灭菌，它又包括以下子步骤 (1)采集无病虫害的碰碰香幼嫩茎段；
(2)去除多余叶片，于流水中冲洗30min；
(3)在洗涤剂中浸泡5min；
(4)用流水冲洗，直至无泡沫出现；
(5)放入超净工作台上，用浓度为75%的酒精消毒20s；
(6)用无菌水冲洗5次，放入浓度为O.15%的升汞中灭菌5min ；
(7)用无菌水冲洗5次后,置于无菌纸上晾干；
52:初代培养将灭菌后的外植体切割至2cm长的幼嫩茎段，接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，PH值为
5.8，光照强度为3000LX，光照时间为16h/d，温度为24°C，培育时间为50d，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽，一个茎段上可诱导新芽数量达60个以上；
53:继代培养切割丛生芽，分成直径为2cm的小块，接种于继代培养基中培养，继代培养基为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，培育时间为7d，完成继代培养后，丛生芽的数量可增加3倍以上；
54:生根培养丛生芽中的小芽长至2cm以上时，转接于生根培养基中培养，生根培养基为1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，培养5d后可见生根，培养20d后，得到生根强壮的碰碰香组培苗；
55:炼苗移植洗掉组培苗上的培养基后移植，移植基质为草炭土混合蛭石，混合比例为 2 :1。如图I所示，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽，一个茎段上可诱导新芽数量达60个以上；如图2所示，完成继代培养后，丛生芽的数量可增加3倍以上；如图3、图4所示，生根培养5d后可见生根，培养20d后，得到生根强壮的碰碰香组培苗；如图5、图6所/In，炼苗移植后的小苗生长旺盛，长势良好。
权利要求
1.一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，其特征在于它包括以下步骤Si:切取外植体并灭菌；52:初代培养将灭菌后的外植体切割至2 3cm长的幼嫩茎段，接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为MS+6-BA1. 5mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，PH值为5. 8，光照强度为2800 3200LX，光照时间为15 17h/d，温度为23 25°C，培育时间为30 60d，完成初代培养的茎段上长出成簇丛生芽；53:继代培养切割丛生芽，分成直径为I. 5 2. 5cm的小块，接种于继代培养基中培养，继代培养基为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L，培育时间为6 8d ；54:生根培养丛生芽中的小芽长至2cm以上时，转接于生根培养基中培养，生根培养基为1/2MS+NAA0. 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，培育时间为18 22d，生根培养后得到生根强壮的碰碰香组培苗；55:炼苗移植洗掉组培苗上的培养基后移植。
2.根据权利要求I所述的一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，其特征在于步骤SI中所述的切取外植体并灭菌的步骤包括以下子步骤(1)采集无病虫害的碰碰香幼嫩茎段；(2)去除多余叶片，于流水中冲洗30 40min；(3)在洗涤剂中浸泡4 6min；(4)用流水冲洗，直至无泡沫出现；(5)放入超净工作台上，用浓度为70% 75%的酒精消毒18 22s；(6)用无菌水冲洗4 6次，放入浓度为O.1% O. 15%的升萊中灭菌4 6min ；(7)用无菌水冲洗4 6次后，置于无菌纸上晾干。
3.根据权利要求I所述的一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，其特征在于步骤S5中所述的移植基质为草炭土混合蛭石，混合比例为I 2 :1。
全文摘要
本发明公开了一种组织培养快速繁育碰碰香的方法，包括以下步骤切取外植体并灭菌；初代培养初代培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L；继代培养继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂10g/L；生根培养生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；洗掉培养基后炼苗移植。本发明的培养基配方简单，繁育过程操作简便，繁殖系数高，能够快速进行大量繁殖，繁殖后的小苗生长旺盛，健壮；移栽后只要注意遮光、降温和保湿，成活率可高达100%；炼苗移栽后的小苗长势良好，香味纯正浓郁。
文档编号A01H4/00GK102823496SQ201210343718
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月17日 优先权日2012年9月17日
发明者马建华, 冯爱云, 王小辉, 晏强, 罗丽君 申请人:巴中市光雾山植物研究所